抗乙型肝炎胎盘转移因子注射液制造及检定规程-《中国生.docx

执行标准：中国生物制品规程2002增补本抗乙型肝炎胎盘转移因子注射液制造及检定规程Requirements for Placenta Derived Anti-HBV Transfer Factor 1 定义、组成及用途 本品是用乙型肝炎表面抗体阳性而其他HBV标志物及抗-HCV、抗-HIV、梅毒均为阴性的健康产妇分娩胎盘，以机械和冻融法破碎组织及细胞，经提取超滤精制而成。主要成分是小分子多肽和多核苷酸。用于治疗慢性乙型肝炎。 2 制造 2.1基本要求 2.1.1设施与生产质量管理 应按中国药品生产质量管理规范要求实施。 2.1.2 原料及辅料 应符合现行中国药典或中国生物制品主要原辅材料质控标准的要求。未纳入上述标准的化学试剂，应符合药用标准。 2.1.3 生产用水 生产用水源水应符合饮用水标准；纯化水及注射用水应符合现行中国药典标准。 2.1.4 生产用器具 直接用于生产的金属或玻璃等器具，应经过严格清洗及去热原质处理或无菌处理。制造工作室及各种生产用器具必须专用。 2.2原料胎盘 2.2.1胎盘必须取自健康产妇，凡患有肝炎、恶性肿瘤、免疫缺陷症、艾滋病、性病 (梅毒、淋病)、急性传染病、人工流产、死胎、各种畸形儿胎盘，肉眼检查外观不正常、保存和运输不妥而变质者均不得使用。 2.2.2 胎盘娩出后，立即由接生人员用无菌操作放入灭菌容器内，并立即冷藏(10以下)，在收集运输过程中也应冷藏。收集的胎盘血逐支用国家药品管理局当局批准的试剂盒进行抗-HBs、HBsAg、抗-HBe、HBeAg和抗-HBc等各项检测。 2.2.3 收集抗-HBs阳性、其他HBV标志物阴性胎盘，再进行抗-HCV、抗-HIV-l/HIV-2和梅毒检测，阴性者为合格胎盘。 2.2.4 检出合格的胎盘应于-20冻存，并在胎盘娩出后6个月内投入生产。 2.3原液制备 2.3.1初加工 取合格胎盘解冻去除筋膜、脐带，将胎盘组织用注射用水冲洗，沥干，剪碎，称重，置灭菌容器内，置-20冻存。 2.3.2 匀浆 取胎盘组织，解冻，用胶体磨匀浆，加注射用水，然后加1.8%氯化钠溶液混匀。 2.3.3病毒灭活 将上述混匀液置59.560.5水浴加温10小时进行灭活。2.3.4 澄清灭活液经3000r/min离心60分钟，收集上清液。 2.3.5 超滤 将上清液经l00kD的中空纤维柱超滤，滤出液用l0kD的中空纤维柱再次超滤。收获滤液，即为原液。 2.3.6 原液检定 按3.1项进行。 2.4 半成品制备 原液经0.22m的微孔滤膜过滤除菌。其收获液即为半成品。 2.5半成品检定 按3.2项进行。 2.6 分批 按2000年版规程通则生物制品分批规程进行。 2.7分装 按2000年版规程通则生物制品分装规程进行。 2.8 规格 每支装量2ml，多肽含量应不少于lmg/支。 2.9 包装 按2000年版规程通则生物制品分装规程进行。 3检定 3.1原液检定 3.1.1化学检定 按2000年版规程附录生物制品化学及其他检定方法进行。 3.1.1.lpH值 为6.57.5。 3.1.1.2 蛋白质反应 用20%磺基水杨酸与等量检品混合反应为阴性。 3.1.1.3 多肽含量 用Lowry法测定，应不低于0.5mg/ml。 3.1.1.4 核糖含量 应不低于80g/ml。 3.1.2 免疫活性测定 平均非粘附白细胞指数应不低于50%(方法见附录1)。 3.2 半成品检定 3.2.1 无菌试验 按2000年版规程通则生物制品无菌试验规程A项进行。 3.2.2 细菌内毒素试验 按2000年版规程通则生物制品细菌内毒素试验规程进行。细菌内毒素含量应不高于5EU/ml。 3.3 成品检定 3.3.1 外观 应为澄明液体，不应有异物、浑浊或沉淀。 3.3.2 鉴别试验 同3.3.9项。 3.3.3 化学检定 按3.1.1项进行。 3.3.4 无菌试验 按2000年版规程通则生物制品无菌试验规程A项进行。 3.3.5热原质试验 按2000年版规程通则生物制品热原质试验规程进行，家兔注射剂量为3ml/kg体重。 3.3.6 异常毒性试验 按2000年版规程通则生物制品异常毒性试验规程)进行。 3.3.7 HBsAg测定 用国家药品管理当局批准的试剂盒检测，应为阴性。 3.3.8 特异免疫活性测定 方法见本规程附录1，平均非粘附白细胞指数应不低于50%. 3.8.9 指纹图谱检测 方法见附录2。本品在保留时间为1923分钟内应有三个主要组分，三组分总含量应不低于90%。第三组分含量应为 (555)%。不得出现分子量大于l0kD的成分。 4 保存、运输及有效期 28避光保存及运输，自胎盘投料之日起有效期为2年。 5使用说明 按2000年版规程通则生物制品包装规程中有关规定编写。 6 附录 附录1抗乙型肝炎胎盘转移因子特异免疫活性测定 (白细胞粘附抑制试验) 附录2 指纹图谱检测 （高效液相色谱法)附录 1抗乙型肝炎胎盘转移因子特异免疫活性测定(白细胞粘附抑制试验)1试验材料 1.1小鼠白细胞悬液的制备 取体重2225g健康小鼠5只，由眼静脉放血，无菌取出脾脏，以Hanks液洗3次，用无菌铜网轻轻压碎制成细胞悬液，用1640培养液洗3次 (1500r/min离心15分钟)，然后每只鼠脾脏加3m1无菌蒸馏水破坏红细胞，再加3.6%氯化钠溶液1m1调整渗透压，混匀后用200目尼龙网过滤，滤液经1500r/min离心5分钟，再分别用0.9%氯化钠溶液和1640培养液各洗1次，收集细胞，用1640培养液调整细胞浓度为1.01063.0106个/ml，备用。 1.2供试品溶液的制备 取待检样品1支备用。 2 试验步骤 取洁净的离心管2支，各加细胞悬液lml，一管加待检样品lml为试验管，另一管加无菌0.9%氯化钠溶液lml为对照管。置37致敏30分钟，1500r/min离心10分钟，弃上清液，每管沉淀分别准确加入1640培养液1m1。取无菌培养瓶6个，前3瓶各加试验管细胞悬液0.2m1，后3瓶各加对照管细胞悬液0.2ml，然后每瓶内加纯化HBsAg0.2ml(HBsAg 100g/ml)，1640培养液0.6m1，置CO2培养箱内37培养12小时后，取出轻轻摇匀，静置13分钟，显微镜下计数未粘附的白细胞数。 3 结果计算 未粘附白细胞抑制指数(NAI)=(试验组平均未粘附细胞数一对照组平均未粘附细胞数)/对照组平均未粘附细胞数100%附录 2 指纹图谱检测 (高效液相色谱法)1试验材料1.1仪器高效液相色谱仪；pack Doil-200(8.0mm300mmI.D，Japan)色谱柱。1.2 流动相0.1mol/L PB-0.1mol/L 硫酸钠-0.05%叠氮钠，pH7.