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细胞内多糖和过氧化物酶的定位 Experiment8 实验目的 掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法 实验原理 高碘酸 雪夫试剂反应 简称PAS反应 主要是利用高碘酸作为强氧化剂 这种强氧化剂能打开C C键 使多糖分子中的乙二醇变成乙二醛 氧化所得到的醛基与Schiff试剂反应形成紫红色化合物 颜色的深浅与糖类的多少有关 细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色络合物 根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存在 实验材料 一 仪器 显微镜 镊子 染色钵 刀片 载玻片 盖玻片 吸水纸等二 材料 马铃薯块茎 洋葱根尖或洋葱鳞茎三 试剂 1 高碘酸溶液 高碘酸 HIO4 2H2O 0 4g 95 乙醇35ml M 5醋酸钠溶液 2 72g醋酸钠溶于100mlH2O 5ml 蒸馏水10ml2 Schiff试剂3 亚硫酸水溶液4 70 乙醇5 联苯胺溶液 在0 85 盐水内加入联苯胺至饱和为止 临用前加入20 体积的H2O2 每2ml加一滴 6 0 1 钼酸铵溶液 称取0 1g钼酸铵溶于100ml0 85 盐水 实验内容 一 细胞中多糖的测定 高碘酸 雪夫 PAS 反应1 把马铃薯块茎用刀片徒手切成薄片 2 浸于高碘酸溶液5 15min 3 移入70 乙醇中浸片刻 4 Schiff试剂染色15min 5 亚硫酸溶液洗三次 每次1min 6 蒸馏水洗片刻 7 装片镜检 二 细胞中过氧化物酶的测定 联苯胺反应1 把洋葱根尖徒手切成20 40 m厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块 2 浸在溶有0 1 钼酸铵的0 85 盐水溶液中5min 钼酸铵的作用是催化剂 3 浸在联苯胺溶液内2min至切片出现蓝色 4 在0 85 盐水溶液中洗1min 5 将薄片置于载玻片上展开 盖上盖玻片 显微镜检查 作
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