铁皮石斛研究进展.doc

_铁皮石斛分子鉴定的研究进展刘静静 （安徽中医药大学）摘要：铁皮石斛是中国特有的名贵药材, 生长较慢、自然繁衍率很低的兰科附生植物，一直以来和灵芝、人参和冬虫夏草等被列为上品中药,道家养生经典道藏誉其为“中华九大仙草之首”,药用价值非常高，有“救命仙草”、“药中黄金”的美称。铁皮石斛作为我国传统滋阴名贵中药，其保健价值为人们所熟知。本文从铁皮石斛的分子鉴定、化学成分、功能活性研究等方面进行分类综述。关键词：铁皮石斛、分子鉴定、进展与展望铁皮石斛为兰科石斛属植物铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)的干燥茎1，因表皮呈铁绿色而得名。自古以来被认为是滋阴补益的珍品 ,具有益胃生津 、滋阴清热 、明目利嗓等功效 。铁皮石斛是中国特有的名贵药材, 生长较慢、自然繁衍率很低的兰科附生植物，一直以来和灵芝、人参和冬虫夏草等被列为上品中药,道家养生经典道藏誉其为“中华九大仙草之首”,药用价值非常高，有“救命仙草”、“药中黄金”的美称。铁皮石斛作为我国传统滋阴名贵中药，其保健价值为人们所熟知。这些年来许多学者都在探索从分子水平寻找鉴定铁皮石斛的有效方法，如基于PCR的DNA分子标定技术、基于DNA序列分析的分子标记技术、基因芯片技术等。1 基于 PCR 的 DNA 分子标定技术 如限制性内切酶片段长度多态性( RFLP)、随机扩增多态性DNA( RAPD)、扩增酶切片段多态性( AFLP)、PCRRFLP 等2。张铭等3 用 RAPD 技术对石斛属内 26个品种和金石斛的 1 个品种进行了基因组 DNA 多态性分析, 设计成的特异性引物能方便快捷地鉴别出铁皮石斛。丁鸽等4 采用 RAPD 技术对铁皮石斛8个野生居群的遗传多样性、亲缘关系以及分子鉴别等进行研究, 结果表明, 铁皮石斛居群间遗传差异明显, 具有较丰富的遗传多样性。虞泓等5 用AFLP 技术对石斛属内石斛组4个品种和1个外类群种进行基因组 DNA 多态性分析, 构建了药用石斛的DNA分子指纹图谱。 AFLP 方法较之 RAPD方法在可信度、灵敏度和经济实用等方面具有较大的优势。2 基于 DNA 序列分析的分子标记技术 目前用于该测序的基因主要有叶绿体基因组的 rbcL、matK、rpoC, 核基因组的 rRNA、 ITS( 植物类) , 线粒体基因组的 cyt-b( 动物类)2 。张铭等6 用随机扩增多态性 DNA (RAPD) 技术对石斛属内 26 个种和金石斛属的 1 个种进行基因组 DNA 多态性分析，设计出了能方便快捷地鉴别出铁皮石斛成的特异性引物。这项技术为各种药材的分子鉴定提供了一个全新的思路。 丁鸽等7 采用RAPD分子标记技术,对中国特有濒危植物铁皮石斛的遗传多样性进行了研究。方法筛选随机引物进行RAPD分析,通过UPGMA聚类,研究了铁皮石斛各居群及个体间的遗传关系，结果表明铁皮石斛居群间存在明显遗传差异,遗传具有多样性。丁小余等8在铁皮石斛与其他 37 种石斛的 rD N A IT S 序列的基础上，设计了一对位 点特殊性 PC R 鉴 别引物 T PJB0 1S 和T P JB01X 鉴别铁皮石斛， 当退火温度降1166 ， 只有铁皮石斛有阳性反应。3 基因芯片技术 由于基因芯片从遗传的角度鉴别中药的物种, 但中药药效的作用成分大多是多次代谢产物, 所以基因芯片鉴定的是中药的真伪而不是中药的优劣, 因而它不能取代中药化学成分指纹图谱等的鉴定, 须和其他技术结合才能在中药学现代化系统中发挥最佳作用9。4 进展与展望 随着分子生物学及分子生药学技术的不断发展，关于铁皮石斛分子鉴定的研究成果越来越多，研究也更加地深入。近年来，铁皮石斛市场需求不断扩大，由于无节制的滥采滥挖，导致铁皮石斛的野生资源遭到严重破坏，再加上在自然条件下种子萌发率低，生长缓慢，严重影响了商品铁皮石斛质量的稳定性，市场上出现较多的铁皮石斛的伪劣品。所以，铁皮石斛的真伪鉴定及石斛属不同个体鉴定的研究受到广泛重视，建立有效的铁皮石斛鉴定体系十分重要。除本文所述的主要方法外，像 matK 基因序列、线粒体 nad 1 内含子序列比较等已应用于其它药用石斛质量评价及真伪鉴定的新兴技术将为铁皮石斛的鉴定研究提供新的途径 10,11。在准确鉴定铁皮石斛的基础上，深入开展有效成分和药理作用的研究，建立一个铁皮石斛化学质量控制标准体系，为推向国际市场打下坚实的基础。精品资料参考文献：1.国家药典委员会. 中国药典(一部)S.北京: 中国医药科技出版社, 2010.2.杨一令, 来平凡, 蒋士鹏. 铁皮石斛的研究进展J. 山东中医药大学学报, 2008, 32(1):82-85.3.张铭, 黄华荣, 廖苏梅, 等. 石斛属 RAPD 分析及鉴定铁皮石斛的特异性引物设计 J . 中国中药杂志, 2001, 26( 7) : 442-447.4.丁鸽, 丁小余, 沈洁, 等. 铁皮石斛野生居群遗传多样性的RAPD 分析与鉴别 J . 药学学报, 2005, 40( 11) : 1028-1032.5.虞泓, 和锐, 倪念群, 等. 石斛属 4 种植物的 AFLP 分析 J . 中草药, 2004, 35( 7) : 808-810.6.张铭, 黄华荣, 廖苏梅,等. 石斛属RAPD分析及鉴定铁皮石斛的特异性引物设计J. 中国中药杂志, 2001, 26(7):442-447.7.丁鸽, 丁小余, 沈洁,等. 铁皮石斛野生居群遗传多样性的RAPD分析与保护策略C/ 全国药用植物和植物药学学术研讨会. 2005.8. D ing XY，Wang ZT，Zhou KY ，etal A llele-specific primers for diag- nostic PCR authentication of D endrobium officinaleJ.Planta M edica，2003，69 (6):587 588.9.应依, 徐红, 王峥涛. DNA 分子标记技术在中药石斛类药材鉴定中的应用 J . 世界科学技术-中医药现代化, 2006, 8