Obelisc-HPLC-色谱柱-———-液相分离池技术.doc

Obelisc HPLC 色谱柱 液相分离池技术 Obelisc 色谱柱是由Primesep 的发明者，采用SIELC最新技术研制的新型色谱柱。在众多专利中，Obelisc色谱柱是第一个商业化的应用液态分离池技术( LiSC )的色谱柱。LiSC技术是采用了硅胶孔的新型化学修饰，这种新的修饰形成了一个带有自身电荷特性、tt离子强度和疏水特性的液态分离池。像活细胞与外界环境存在平衡一样，液态分离池存在于一个与流动相不断平衡的环境中。与活细胞的相似性 内部分离池环境与外界环境(流动相)有很大的不同。 孔壁构成液态分离池的空间和结构。 分离池的内部环境具有稳定(被限制的)和可交换的(流 动的)组分。 分离池内部与外部的pH值和离子强度不同。 开口的孔被用作分析物的膜通道。 分离池随着外部环境的物理和化学变化而改变。 这些变化包括长的疏水和亲水链，离子化程度，电荷 分布和反离子特性上的构象变化。性能卓越的Obelisc色谱柱的主要特点1. 较高的池内和流动相离子强度，即使在流动相为低浓度的缓冲液的情况下也能实现带电分析物进出分离池的快速高通量转换。2. 固定相占据了整个分离池的体积，这一点与其它色谱柱固定相只占据池壁部分不同，它的固定相占据了整个池，这给固定相带来了高负载性。3. 被长的有机链分开的分离池配合基的正负离子使正负电荷可以同时参与静电相互作用。基于LiSC 技术的两种色谱柱Obelisc R 和 Obelisc N, 运用多种分离机制来分离极性和非极性化合物Obelisc R 和 Obelisc N 色谱柱可替代多种高效液相色谱柱，如:反相柱，AQ型反相柱，极性嵌入式反相色谱柱，正相柱，阳离子交换柱，阴离子交换柱，离子排阻柱和疏水色谱柱。 仅通过两种Obelisc色谱柱和一些简单的适用于质谱仪或者低紫外范围（220 nm）的流动相便可简化方法开发过程。 具有反相特性的Obelisc R 色谱柱和具有正相特性的Obelisc N 色谱柱在类型和电荷基团的亲合性以及它们长链的疏水性上存在不同。Obelisc R色谱柱在硅胶表面附近有阳离子基团，一个疏水链将其与硅胶表面分开。Obelisc N 色谱柱在硅胶表面附近带有阴离子基团，一个亲水链将其与硅胶表面分开。Obelisc R 和Obelisc N 两种功能强大的高效液相色谱柱 这两种色谱柱能够吸附和分离所有类型的小分 子物质以及它们的混合物。 仅用这两种色谱柱就能快速开发出很多方法。 简单的流动相选择。 多样的分离模式(反相, 正相, 亲水, 离子交换) 为质谱仪，蒸发光散射检测器准备的, 适用于低 紫外范围的（220 nm）的低浓度缓冲剂 在各种分离模式下根据有机溶剂含量，pH值和 缓冲能力调整的选择性。 将Obelisc 液相分离分离池技术应用到色谱分离中可得到与其它色谱柱非常不同的结果。电荷和链构型是可变的，这一点可使分离选择性发生很大的变化。分析方法的开发重新回归到实验科学而不是对柱子的试验和误差筛选上。 图1表示的是同一混合物在Obelisc R和Obelisc N上使用相似的流动相进行分离的情况。仅通过改变流动相中乙腈的含量就可以使出峰顺序颠倒过来。 由于色谱柱的反相特性，疏水性的对羟基苯甲酸丙酯在Obelisc R 上的保留时间更长。而极性组分多巴胺和二羟基丙氨酸在Obelisc N的正相模式中保留时间更长。Obelisc R色谱柱 Obelisc R 色谱柱具有反相特性，可应用于传统反相条件。因为具有离子基团和一个长疏水链，Obelisc R 色谱柱可提供传统反相柱所不具有的吸附力和调节力。Obelisc 色谱柱典型的流动相是乙腈，水以及可适用于质谱的缓冲液甲酸铵(pH3)和乙酸铵(pH5)。如果有必要在低紫外范围(220 nm)下检测，建议使用磷酸盐缓冲液。 图2显示的是在调节乙腈含量和缓冲液pH值时，Obelisc R色谱柱的调整能力。 图3是Obelisc R和 Zorgbax SB-AQ两个色谱柱分离一个极性药物时的比较。AQ型色谱柱可以在低有机溶剂含量的流动相下工作，以便用来在反相色谱中分析极性的化合物。这七种药物可通过Obelisc R色谱柱吸附和分离，但AQ 色谱柱即使在流动相中有机溶剂含量很低的情况下也缺乏吸附和分离能力。 图4 显示的是一个由氨基酸、碱基、酸和中性物质组成的复杂混合物在Obelisc R柱上的分离情况。 疏水性最强的组分甲苯(峰6)先于极性更强的2,6-二甲基吡啶，苄胺和苯甲酸洗脱下来。在图5中显示的是极性很强的亲水除草剂-百草枯和杀草快在有甲酸铵基线分离的反相条件下被分离的情况。 用传统的C18色谱柱来分离极性异构体是很困难的。ObeliscR附加的极性相互作用则为此提供了必要的选择性。图6中对氨基吡啶异构体在Obelisc R色谱柱和普通C18色谱柱上的分离情况进行了对比。Obelisc R色谱柱在对极性化合物的吸附能力方面与传统的反相色谱柱相比有了很大的提高。 图7 是根据10种极性化合物在Obelisc R色谱柱 和两种普通反相色谱柱上的容量因子绘出的图,在各种情况下Obelisc R色谱柱的吸附能力最高可达普通柱的 10倍。而这两种普通反相色谱柱之间的差别很小 。Obelisc N色谱柱Obelisc N色谱柱具有很好的极性特点,并且非常适用于极性以及带电样品的分离,在离子交换模式下，带电样品与固定相上相反的电荷基团存在相互作用。 Obelisc N色谱柱的正负电荷基团可与样品的电荷基团发生相互作用。而在传统的亲水色谱模式中,带电的或者中性的极性样品与极性固定相表面的水层相互作用。 在Obelisc N 色谱柱上，电荷被很好的分开，能独立地与分析物作用，这使Obelisc N 色谱柱与其他传统的亲水色谱柱和硅胶色谱柱(图8)相比，具有不同的选择性。 图9 显示的是pH值和有机溶剂含量对糖，氨基酸和羧酸分离的影响。图10 是糖在亲水色谱模式下分离的一个例子。 流动相的组分不同可以改变长的亲水链的构成。这会影响到液相分离池的性质和分离的选择性。 图11 显示的是缓冲液浓度对氨基丁酸异构体分离的影响。仅通过改变缓冲溶液的浓度来使混合物达到基线分离是很困难的。 图12 显示了极性物质草甘膦在Obelisc N色谱柱上的分离情况。 图13 显示了核酸碱基的分离，从中我们可看出如何通过改变流动相的pH来调整色谱柱的选择性。在pH5下分离开的峰2和峰3组分，在