中央广播电视大学毕业设计(论文).doc

目录目录1中文摘要与关键词21.萱草的简介31.1萱草的生物学特性31.2组培在园林中的应用31.3植物组织培养的优点 32.萱草花苞组培32.1取材与处理32.1.1外植体的选择32.1.2外植体的消毒方式42.2接种与培养42.2.1建立无菌体系42.2.2芽的诱导42.2.3增殖培养42.2.4根的诱导42.3驯化与移栽52.3.1炼苗52.3.2移栽53.萱草花茎组培 53.1取材与处理53.1.1外植体的选择53.1.2外植体的消毒方式53.2接种与培养53.2.1建立无菌体系63.2.2培养方式与条件64.小结6注释6参考文献6摘要本文主要是以萱草的花苞作为外植体进行无性快繁，采用MS培养基为基本培养基，所采用的配方为诱导培养基MS+BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，增殖培养基为MS+BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L，生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L；其次是以萱草的花茎作为外植体进行组织培养，配方为诱导培养基MS+BA1.0mg/L+2，4-D2.0mg/L，增殖培养基MS+BA1.0m/L+NAA0.1mg/L，生根培养基1/2MS+NAA0.2mg/L。关键词 萱草；花苞；花茎；组织培养萱草的组织培养近年来市场对萱草种苗的需求越来越大，但传统的分株繁殖速度较慢，而且品种间增殖速度有明显差异，往往一些优秀的园艺品种增殖速度更慢。因此，建立萱草有效的离体再生和快繁体系是解决优良品种推广应用的关键问题之一。1.萱草的简介1.1萱草的生物学特性萱草（Hemerocallis fulva）又名金针菜，为百合科（Liliaceae）多年生草本宿根植物，原产我国、日本及欧洲南部。萱草叶狭长，花呈喇叭形，花茎变化大，花形各异，花期从晚春一直到秋季，盛花期可延续几个月。它不仅供人观赏，也可将花蕾作蔬菜供人食用，更是被广泛用于绿化工程。1.2组培在园林中的应用传统的无性繁殖方法常因气候、季节和土地等环境条件限制，繁殖系数低，生产周期长，对于一些名贵品种和母株来源不足的品种，更不能及时满足生产和市场的需要。随着植物组织培养技术的日益完善，其在园林方面的应用越来越广泛，主要应用领域有：植物组织的离体快繁、脱毒培养快繁无病毒苗、离体保存种质资源、培育无病毒苗木、培育花卉新品种等技术。1.3植物组织培养的优点植物组织培养是在人工控制的环境条件下，采用纯培养的方法离体培养植物的植株、器官、组织和细胞，与在自然状态下生长的植物相比，该技术具有以下优点：培养条件可人为控制，周年生产；生长周期短，繁殖速度快；管理方便，可实现工厂化生产；2.萱草花苞组培2.1取材与处理2.1.1外植体的选择选取健壮、无病虫害的植株，取其花苞作为外植体。花苞作外植体时消毒较容易、污染率低。萱草花期在6月上旬7月中旬是取材的最佳季节，采集时间在开花前的15d，将生长发育良好的未开放的花苞摘下作为外植体，若是生长末期或已进入休眠期时，则外植体可能对诱导反映迟钝或无反应。2.1.2外植体的消毒方式将采集的萱草外植体进行简单的修剪，花苞过大的可把花被切除一部分后消毒，方法为先用自来水冲洗一小时，然后加入84消毒液与洗涤灵清洗10min，同时利用离心力转圈摇动瓶子使外植体表面的污染物被析出，最后用自来水冲洗数次，直到没沫为止将水倒掉。移置于超净工作台上，根据花苞大小控制消毒时间，用75%酒精浸泡1015s，用无菌水冲洗1次，然后用01的升汞(HgCl2)溶液浸泡杀菌510min，再用无菌水冲洗56次，少量多次，最后用无菌滤纸吸去外植体表面的水分，待接种。2.2接种与培养2.2.1建立无菌体系在无菌条件下，将已经过消毒的花苞外植体，用解剖刀在子房上下12mm处切除花被及花柄（若子房已长出花药，需将花药全部切除），将中间的子房切成34mm见方的小块，接种到MS基本培养基中。刚接种的外植体需进行暗培养（3天）或是保持较低温度等措施，均可减轻材料褐化的发生；增加光照或延长光照时间都可降低材料玻璃化的产生。在接种过程中，操作越规范材料被污染的可能性就越小，建立无菌体系得到无菌苗后，接种到芽诱导培养基上即可。2.2.2芽的诱导以MS为基本培养基，诱导培养基为MS+BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L添加蔗糖30g/L，琼脂4.5g/L，pH值为5.8。培养室温度为252，光照强度约12001500LX，光照时间为10小时。大约710d后可以看到组织膨大，1020d后无菌苗增厚，切口有浅褐色瘤状突起即愈伤组织，继续培养即可由它分化出不定芽。2.2.3增殖培养将在诱导培养基上形成的芽与愈伤组织一起，分割转接到MS+BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L的培养基上进行增殖培养，经过2030天芽与愈伤的不断增殖生长，即可分化出丛生芽。每隔3045天，将分化的丛生芽切成23株再接种在增殖培养基上，每次可扩大5倍（淘汰增殖少而慢的材料）。待幼苗株高生长达到23cm时，切下转移到生根培养基上。2.2.4根的诱导将在增殖培养基上生长的苗高23cm，生长健壮，有心叶的幼苗分成单株，转接在生根培养基1/2MS+NAA0.2mg/L上，一周左右时间有根尖分化，10天左右小苗基部有长约1cm的白色不定根长出，2030天后，35条呈辐射状长于芽苗基部，根长可达34cm，不定根粗壮，部分长出侧根，生根率可达95%以上。2.3驯化与移栽2.3.1炼苗将苗高3cm并生有34条新根长度达2cm3cm以上的生根幼苗，移至常温下适应23天后，打开盖子再适应23天即可。用镊子或手指轻轻取出组培苗，彻底洗去苗根部粘附的琼脂，以免栽后发霉；然后放入清水中清洗干净，把无根、无心叶、畸形等不合格的苗剔除，最后放在已添加IBA0.1mg/L的溶液中备种。2.3.2移栽移栽前期，要将空气湿度保持在70%80%之间，遮光率为50%，环境温度控制在2226之间。移栽时，采用经过多菌灵消毒过的基质（草炭土：蛭石=3:1），用筷子等工具在穴盘的每个穴上打能容纳根系的孔，将组培苗的根系放入孔内，覆土压实。注意要浅栽、根系舒展、心叶露于基质之上。移栽后，浇透水(配有1的多菌灵)置于温室小拱棚内，用黑膜进行遮荫23天(如果阳光强，可以适当增加天数。下雨天可以不用黑膜遮荫)，保证温度在15以上、湿度在85以上，3天后适度通风，每天12小时，逐步增加通风时间，15天后可全部揭去薄膜。萱草喜微潮偏干的土壤环境，浇水不宜过多。经过12个月的管理，即可在正常的田间条件下生长。3.萱草花茎组培3.1取材与处理3.1.1外植体的选择植物组织培养具有周年生产的优点，因此萱草可在不同季节，使用其花茎分枝处的茎段作为外植体进行离体组织培养。在非生长季节选取外植体时，可将健壮、无病虫害的母株，置于温室内培养23周后进行取材。3.1.2外植体的消毒方式将作为萱草茎段外植体的母株进行修剪，切除掉叶子与根部，只留下长2cm左右的茎段作为外植体清洗干净后消毒。先用自来水冲洗一小时，然后加入84消毒液与洗涤灵清洗10min，同时利用离心力转圈摇动瓶子使外植体表面的污染物被析出，最后用自来水冲洗数次，直到没沫为止将水倒掉。移置于超净工作台上，根据茎段外植体大小控制消毒时间，用75%酒精浸泡1520s，用无菌水冲洗1次，然后用01的升汞(HgCl2)溶液浸泡杀菌810min，再用无菌水冲洗56次，少量多次，最后用无菌滤纸吸去外植体表面的水分，待接种。 3.2接种与培养3.2.1建立无菌体系在无菌条件下，将已消毒的茎段外植体，用解剖刀剥去被消过毒的部分，只留下材料基部的花茎，切成0.5mm左右见方的小块，将其接种到MS基本培养基上，建立无菌体系得到无菌苗。刚接种的外植体需进行暗培养（3天）并保持较低温度，可减轻材料褐化的发生；延长光照时间可降低材料玻璃化的产生。3.2.2培养方式与条件将无菌苗接种到诱导培养基MS+BA1.0mg/L+2，4-D2.0mg/L中诱导不定芽，添加蔗糖30g/L，琼脂4.5g/L，pH值为5.8，培养室温度为252，光照强度约15002000LX，光照时间为12小时。1020d后无菌苗增厚，切口有浅褐色瘤状突起，即愈伤组织。将已形成的不定芽与愈伤组织一起接种至增殖培养基MS+BA1.0m/L+NAA0.1mg/L中进行增殖培养；在经过多次增殖培养后，将苗高23cm，生长健壮、有心叶的幼苗分成单株，转接至生根培养基1/2MS+NAA0.2mg/L中诱导其生根；2030天后35条呈辐射状长于芽苗基部，当苗高3cm并且根长达23cm以上的生根幼苗即可炼苗移栽，炼苗与移栽同萱草花苞组培中的方法即可。4.小结本文通过对萱草进行组织培养，建立了主要以萱草的花苞、花茎作为外植体、诱导愈伤组织、不定芽分化及炼苗移栽的技术体系，该技术取材容易、消毒简便、移栽成活率高，是加快繁殖速度的有效途径，实现了种苗的周年工厂化生产。注释徐刚 植物组织技术在花卉领域应用广域，中国花卉园艺，2009第4期，第1-3页李胜主编 李唯译 植物组织培养原理与技术，化学工业出版社，2008年版，第8页谭文澄 戴策刚主编 观赏植物组织培养技术，中国林业出版社，2004年版，第308页李浚明 植物组织培养教程，北京，中国农业大学出版社，