肠道致病菌检验

肠道致病菌检测,肠杆菌的共同特点,1、相似的形态染色：G杆状2、简单的培养条件3、活泼的生化反应 乳糖发酵试验：初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌 肠道致病菌多数不发酵乳糖；肠道非致病菌多数发酵乳糖 葡萄糖发酵试验：G-杆菌发酵菌和非发酵菌 氧化酶试验：鉴别肠菌科和弧菌科 肠菌科氧化酶：；弧菌科氧化酶：+,4、抗原构造复杂：O、H、K、Vi抗原5、抵抗力不强6、易变 耐药性变易 毒力性变易 生化反应性变易,第一节 志贺菌属（Shigella）,可引起人类痢疾及急性胃肠炎。本属细菌多侵犯人肠道粘膜，很少侵入血流。临床上通常以粪便及直肠拭子作分离培养。,一、培养特性,液体培养基呈均匀混浊生长，不形成菌膜及沉淀。血平板：灰白色、半透明、表面光滑湿润、边缘整齐、中等大小、不溶血。MAC、XLD等选择性分离平板：无色透明、中等大小、表面光滑湿润（宋内氏志贺菌易形成粗糙型菌落）。,二、生化初筛,TSI或KIA：K/A（福氏志贺菌6型可产少量气体） 半固体上动力：,三、血清学分型 表1 志贺菌属血清学分型,注1、四种志贺菌多价血清仅包括A1、A2、B群多价和D群血清。2、四种志贺菌多价血清不凝集时，应考虑有K抗原的存在，将培养物制成浓菌液，10030min水浴后再进行凝集。若仍不凝集，用C群多价血清和A群3型12型血清进行凝集。3、四种志贺菌多价血清凝集，而相应的群、型血清均不凝集，且菌落较粗糙，可用宋内氏志贺菌相（粗糙型）血清做凝集。,四、系统生化鉴定,选用下列之一进行：1、选用符合国家或国际质量认可的市售商品化鉴定系统2、葡萄糖铵、西蒙枸橼酸盐、V.P、苯丙氨酸脱氨酶、赖氨酸脱羧酶、KCN、水杨苷，志贺菌属均为阴性反应。,五、结果报告,根据生化试验和血清学鉴定结果，符合志贺菌的，可报告“检出XX志贺菌”；如不符合则报告“未检出志贺菌”。,第二节 沙门菌属（Salmonella）,无荚膜大多数血清型以周生鞭毛运动，但有发生不运动的突变型。 鸡沙门菌、雏沙门菌通常不运动。,一、培养特性,液体培养基内均匀混浊生长；血平板、SS和MAC平板：中等大小、无色半透明、表面光滑、边缘整齐。产H2S菌株在SS平板上可形成中心黑色的菌落。大多数甲型副伤寒沙门菌和部分猪霍乱沙门菌不产生H2S。伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌和都柏林沙门菌具有Vi抗原。,二、生化初筛,TSI或KIA、赖氨酸脱羧酶试验在TSI或KIA上斜面产酸、底层产酸，同时赖氨酸脱羧酶试验阴性的菌株可排除。符合以上生化反应加做：靛基质、尿素、KCN,表2 沙门菌属生化反应初步鉴别表,三、系统生化鉴定,选用符合国家或国际质量认可的商品化生化鉴定系统,四、血清学试验,Vi抗原能阻碍O抗原与相应O抗血清凝集。破坏Vi抗原方法：挑取菌苔于1mL生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸即可。,五、结果报告,综合生化试验和血清学试验的结果，报告“检出XX沙门菌”或“未检出沙门菌”。,第三节 副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）,VP是一种嗜盐性细菌，可污染食品，特别是海产品。在我省，VP是引起的食物中毒的主要病原菌之一，占60%左右。形态：具有多形性，运动活泼。,一、培养特性,生长条件类似霍乱弧菌，不同之处是VP的嗜盐性。无盐培养基上不生长，最适盐浓度是3.5%。TCBS：圆形、光滑湿润、中心颜色较深的绿色菌落。氯化钠蔗糖琼脂平板：圆形、光滑湿润、中心颜色较深的蓝绿色菌落。,科玛嘉弧菌显色平板：圆形、光滑湿润、中心颜色较深的紫红色菌落。MAC：不生长或菌落扁平、半透明。SS：不生长或小、扁平粘韧性菌落，不易挑起，或能拉丝。EMB：一般不生长神奈川试验：在我妻氏琼脂上产生溶血。,二、初步鉴定,氧化酶试验：+涂片镜检：G，呈棒状、弧状等多形态，无芽胞。3%氯化钠TSI：K/A嗜盐性试验：0%盐胨水：，3 %盐胨水：+， 6%盐胨水：+， 8%盐胨水：+，10