凝集反应实验

凝集反应,抗原抗体反应的类型,1沉淀反应 2凝集反应 3补体参与的反应 4. 中和反应 5. 免疫标记,凝集反应,是指颗粒性抗原(红细胞、细菌等)或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后与相应抗体（或抗原）发生特异性结合，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。在免疫学技术中，凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应两大类。,凝集反应的类型一、直接凝集反应(direct agglutination),是指细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集。反应中的抗原称为凝集原，参与反应的抗体称为凝集素。,将已知的可溶性抗原（或抗体）吸附或耦联到与免疫无关的载体颗粒表面,形成致敏颗粒,再与相应抗体（或抗原）作用,在适宜的电解质存在的条件下，出现肉眼所见的凝集现象，称之。 载体不同可分： 红细胞间接血凝试验 聚苯乙烯乳胶间接乳胶凝集试验 活性炭间接炭凝集试验。,二、间接凝集反应,1、正向间接凝集反应 用于检测标本中的抗体,抗体,载体微球,可溶性抗原,免疫微球,免疫微球凝集,+,+,本试验简便、快速、敏感性和特异性高、成本低。,2、反向间接凝集反应 用于检测标本中的抗原本法快速、敏感性和特异性高,+,凝集,抗原,载体颗粒,抗体,抗体致敏颗粒,A、正向：诊断试剂为已知抗原致敏的载体颗粒及相应抗体，用于检测标本中是否存在与致敏抗原相同的抗原。,3、间接凝集抑制反应又称为胶乳凝集抑制试验,抗体,待测抗原,免疫微球,免疫微球不凝集,+,（,（,结果：免疫微球不凝集为阳性,(标本),第一种情况：,抗体,免疫微球,免疫微球凝集,+,标本中无抗原,结果：免疫微球凝集为阴性,第二种情况：,3间接凝集抑制反应B、反向：诊断试剂为已知抗体致敏的载体颗粒及相应抗原，用于检测标本中是否存在与致敏抗体相同的抗体。,间接凝集反应的应用,间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点，而且能用于抗原或抗体的测定，因此在临床检验中广为应用。,（一）抗原的检测,人绒毛膜促性腺激素检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的间接血凝试验。,（一）抗体的检测,梅毒抗体类风湿因子RF,一、 正向间接凝集试验,梅毒快速血浆反应素试验Rapid Plasma Reagin （RPR）RPR试验,感染梅毒后，首先产生IgM型抗梅毒螺旋体抗体， 感染梅毒4周左右产生IgG型抗梅毒螺旋体抗体，即使经足量抗梅治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，IgG抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生，甚至终生在血清中可测出,梅毒的免疫性（一）,梅毒的免疫性（二）,另一种具有抗体性质的物质叫反应素（reagin），是梅毒螺旋体破坏人体组织过程中释放出的一种抗原性心磷脂刺激机体所产生的抗体。反应素一般在感染后57周产生。经正规治疗后可逐渐消失。,梅毒感染的实验室诊断,（一）非梅毒螺旋体抗原血清学试验（二）梅毒螺旋体抗原血清试验 （三） 梅毒确认试验,非梅毒螺旋体血清试验,这类试验的抗原分为心磷脂、卵磷脂和胆固醇的混悬液，用来检测抗心磷脂抗体。由于这些试验具有相同的标准化抗原，所以敏感性相似。可用作临床筛选，并可作半定量，用于疗效观察。,非特异性类脂抗体测定,1、性病研究实验室试验（VDRL） 2、不加热血清反应素试验（USR） 3、快速血浆反应素试验 （RPR） 4、甲苯胺红试验（TRUST）,梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试验，但不能用作疗效观察的指标。 1、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 2、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA) 3、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）,特异性梅毒血清学试验,梅毒确认试验（三）,1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验 （FTA-ABS）2、梅毒螺旋体蛋白印迹试验 （western blot test）,一、梅毒快速血浆反应素试验（RPR）,实验原理梅毒患者血清中存在着能与VDRL(类脂质)抗原发生凝集反应的反应素，本试剂利用这一原理，将VDRL抗原吸附于活性炭颗粒表面，当待测血清中存在反应素时，即与其发生凝集反应，出现肉眼可见的黑色凝块。,一、梅毒快速血浆反应素试验（RPR）,用途本方法能快速简单地测定梅毒病人血清中的反应素，可用于梅毒诊断和监测梅毒病人疗效。,试剂与器材,RPR试剂梅毒阳性对照梅毒阴性对照纸片专用滴管，针头，橡皮头,操作方法,1.分别吸取30微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。2.另吸取30微升待检血清均匀铺加在纸卡的另一个圆圈中。3.用专用针头，滴管吸取RPR试剂，分别垂直滴加30微升于上述血清中。4.用RPR旋转仪水平转动卡8分钟，100转/分钟然后3分钟内在光线充足处判断结果。,结果判断,1.阴性反应（）：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。2.弱阳性反应（+）：可见较小的黑色凝集物。3.阳性反应（+）：可见中等或较大的黑色凝块，溶液清亮。,实验讨论,1.实验条件：在23c29c度的环境下进行。2.RPR试剂在使用前应充分摇匀。3.血清中加入试剂后充分振荡使其混匀。4.定性实验呈弱阳性或阳性者必须做定量实验才能了解患者血清中的抗体滴度，具体方法如下：将待检血清用生理盐水作倍比稀释（原血清，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32）然后对每个稀释按定性实验方法再进行测定并判断结果。,实验讨论,5.本实验只为过筛试验，实验呈弱阳性或阳性反应者，需结合临床进行综合分析判断，同时再做特异性密螺旋体实验加以确诊。,二、间接凝集抑制反应又称为胶乳凝集抑制试验,妊娠试验HCG测定,HCG：,人绒毛膜促性腺激素，胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素妊娠4-10周分泌量最大 HCG是一种不随胎盘重量增加而分泌增长的胎盘激素,HCG的结构,结构中包括与两个非共价键结合的亚基。亚基与LH，FSH，及TSH的亚基相似，能与这些激素产生交叉免疫反应而亚基与这些激素有较大的差异，不存在于其他激素中，决定了生物活性和免疫活性的高特异性。临床上采用高效的抗HCG亚基现试剂盒为HCG-试剂,HCG检测方法,1，ELISA：酶联免疫吸附试验2，单克隆抗体胶体金试验3，化学发光免疫法4，放射免疫技术5，胶乳凝集抑制实验6，血凝抑制试验：载体不同，吸附于RBC上,胶乳凝集抑制试验,实验原理将含有可溶性抗原的待测标本先与已知抗体混合，充分作用后再加入抗原致敏的胶乳颗粒，因抗体已与标本中的可溶性抗原结合，胶乳颗粒不再出现可见的凝集现象。,结果判断,若试验出现明显