螺旋体

第21章 螺旋体,概述,螺旋体(Spirochete)是一类细长、柔软弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。 基本结构与细菌相似，例如有细胞壁、原始核质，以二分裂方式繁殖和对抗生素等药物敏感等。,属和代表菌 引起人类疾病 传播方式或媒介,密螺旋体属（Treponema） 苍白密螺旋体苍白亚种 梅毒 性传播 苍白密螺旋体地方亚种 地方性梅毒 黏膜损伤 苍白密螺旋体极细亚种 雅司病 皮肤损伤 品他密螺旋体 品他病 皮肤损伤疏螺旋体属（Borrelia） 伯氏疏螺旋体 莱姆病 硬蜱 回归热疏螺旋体 流行性回归热 体虱 杜通疏螺旋体 地方性回归热 软蜱 奋森疏螺旋体 咽峡炎、牙龈炎 条件致病钩端螺旋体属（Leptospira） 问号状钩端螺旋体 钩端螺旋体病 接触疫水,名称 螺旋数 特征 举例,致病螺旋体的螺旋特点,密螺旋体 814 细密而规则 两端尖直,疏螺旋体 310 呈波纹状,梅毒螺旋体品他螺旋体,钩端螺旋体 数十个 细密而规则 一端/两端呈钩状,问号状钩端螺旋体,回归热疏螺旋体 伯氏疏螺旋体,钩端螺旋体属,两个种-问号状钩端螺旋体（L. interrogans）致病-双曲钩端螺旋体（L.biflexa） 不致病,第一节,（一）形态染色 螺旋细密、规则，形似细小珍珠排列的细链，一端或两端呈钩状；运动活泼，常使菌体呈C、S或8字型，G，不易着染；Fontana镀银染色法染成棕褐色。,一、生物学性状,黄疸出血热群钩端螺旋体,钩端螺旋体镀银染色,（二）培养需氧或微需氧；营养要求复杂常用Korthof培养基，也可以用无血清的EMJH培养基适宜生长温度为2830最适pH7.27.6，小于6.5死亡，最高能耐8.4；, 在人工培养基中生长缓慢,3.抗原构造,1,属特异性抗原,3,型特异性抗原,菌体脂多糖复合物，用于分群,2,群特异性抗原,表面多糖与蛋白复合物，用于分型,糖蛋白或者脂蛋白,问号状钩端螺旋体至少可分为25个血清群、273个血清型。 我国已发现的致病性钩端螺旋体至少有19个血清群、75个血清型，是发现血清型最多的国家。,4.基因组,有两条染色体DNA大的为4332241bp,小的为358943bp,5.抵抗力对热抵抗力弱，60 1 min即死亡。0.2%来苏、1:2000升汞、1%石炭酸经1030 min被杀灭对青霉素敏感。 在湿土或水中可存活数月。,二、流行环节,钩端螺旋体病是一种人畜共患疾病。也是一种自然疫源性疾病。,由于钩端螺旋体水中长期存活以及疾病自然疫源性的特点，钩端螺旋体病是我国洪涝、地震等自然灾害中重点监控的传染病之一。,三、致病性与免疫性,（一）致病物质 1.粘附素(ELS) 2.内毒素样物质(ELS) 细胞壁中含类似脂多糖物质（LLS），引起的病理变化与典型的内毒素相似，只是毒性较低。 3.溶血素 波摩那型、犬型、七日热型产生溶血素，破坏红细胞膜而溶血。 4.胶原酶,储存宿主,传播途径,临床表现,疾病特点,鼠和猪，其他：50多种动物（蛇、鸡、鸭、鹅等）,与污染水或土壤接触,经粘膜或破损皮肤进入;经胎盘垂直传播.,先形成钩体血症，进入损伤全身毛细血管内皮细胞及肝、肾、肺心及中枢神经，可出现休克、DIC、黄疸、出血、脑膜炎等,TEXT,（二）所致疾病 钩端螺旋体病,起病急、高热、乏力、全身酸痛、眼结膜充血、腓肠肌压痛、表浅淋巴结肿大 。,免疫性：疾病后可获得抗同型钩体的持久免疫力，以体 液免疫为主。,（一）标本采集 发病一周内取血液；2周后取尿液或脑脊液。 血清学诊断则需在病程早期及恢复期分别采集血清，作双份血清试验。 （二）标本直接检查,四、微生物学检验,取急性期病人血1ml加入2ml枸橼酸盐先以1000rpm离心510min，取血浆再以4000rpm离心4560min，取1滴沉淀物置玻片上，加盖玻片后作暗视野检查。也可用Fontana镀银染色法染色后观察。,（三）分离鉴定 接种于Korthof 培养基中，28孵育，一般714天生长，取培养物作暗视野检查，观察有无螺旋体生长，连续观察30d，如无生长方判为阴性。阳性标本在2周内可见近培养液面呈半透明雾状混浊。（四）动物接种 接种于幼龄豚鼠或金地鼠腹腔，一周后取心血检查并作分离培养。动物死后解剖，可见皮下、肺部等有大小不等的出血斑，肝、脾脏器中有大量钩端螺旋体存在。,（五）血清学诊断 病初和发病后第34周各采血清一次。有脑膜刺激症状者采取脑脊液。 1.显微镜凝集试验（MAT） 用标准株或当地流行株作型特异性抗原，分别与病人不同稀释度血清混合，28-30孵育2h，取1滴覆盖玻片，暗视野显微镜下若有抗体存在，则钩体凝集成团，数减少，当抗体效价高时，凝集的菌体溶解。 结果判定：50以上菌体凝集或溶解为“2+” 为血清效价。1：300才有诊断意义，或效价增高4倍以上，则可确诊本病。,2.间接凝集试验 可溶性钩端螺旋体属特异抗原，吸附于乳胶或活性炭成为颗粒性抗原，与病人血清中相应抗体作用，可出现肉眼可见的凝集。,凝集 凝集抑制 结果,不凝集，呈均匀乳状 不凝集，呈均匀乳状 血清中有抗原无抗体为早期钩体病出现明显凝集颗粒 出现明显凝集颗粒 血清中有抗体无抗原为钩体病晚期不凝集，呈均匀乳状 出现明显凝集颗粒 阴性（非钩体病）,1.防鼠、灭鼠，加强对带菌家畜的管理2.接种多价钩体疫苗： 在常年流行地区，对易感人群和与疫水接触者宜接种包含当地流行株在内的多价钩端螺旋体疫苗。3.治疗： 青霉素首选，注意赫氏反应。,五、防治原则,第二节 密螺旋体属,密螺旋体分类 苍白密螺旋体（T. pallidum）苍白亚种(subsp. pallidum)：引起性传播梅毒地方亚种（subsp. endemicum）：引起非性传播梅毒（污染餐具传播）极细亚种（subs. perternue）：雅司病（皮肤损伤受染）品他密螺旋体（T. carateum）引起人类品他病 本属主要介绍梅毒螺旋体。,（一）形态染色 814个致密而规则的螺旋，两端尖直。运动活泼，圆柱体表面绕有34根周鞭毛，与运动有关。 普通染色不易着色，常用Fontana镀银染色法，菌体染成棕褐色且变粗。,一、生物学性状,（二）培养特性 目前人工培养方法尚未真正成功。 接种兔睾丸或眼前房，但生长缓慢，多用来保存菌种；采用棉尾兔上皮细胞培养保持毒力。（三）抵抗力 抵抗力极弱，对冷、热及干燥特别敏感；血液中的螺旋体4放置3天后才死亡，故冷藏3天以上的血液无传染梅毒的危险。,（一）致病因素 1.荚膜样物质 为酸性粘多糖，具有抗吞噬作用 2.粘附因子 粘附作用,激活人皮肤微血管内皮上的血管粘附分子-1（VCAM-1）和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的表达，促进T细胞增殖，释放炎症因子（TNF-和IL-1）。 3.透明质酸酶 分解透明质酸有利于扩散并造成组织损伤。,二、致病性与免疫性,（二）所致疾病：据感染方式分 1.先天性梅毒 亦称胎传梅毒，易致流产、早产或死胎；也可致先天畸形，出生后被称为梅毒儿，常呈锯齿形牙、间质性角膜炎、神经性耳聋等症状。,2.后天性梅毒：分三期 I期梅毒： 梅毒螺旋体经皮肤黏膜感染后2-10周，局部出现无痛性硬性下疳，多见外生殖器，含有大量梅毒螺旋体，此时传染性极强。48周后，下疳自然愈合。经23个月无症状潜伏期后进入第二期。,II期梅毒： 感染性强，破坏性小。全身皮肤黏膜出现梅毒疹，周身淋巴结肿大，不经治疗一般在13个月后症状自然消退而痊愈，经24年, 又可被激活进入第三期。,III期（晚期）梅毒： 感染性小，破坏性大。感染2年（亦可达1015年）后，可侵犯内脏器官或组织，出现慢性肉芽肿病变。重症患者引起心血管及中枢神经系统病变，出现梅毒瘤、动脉瘤、脊髓瘤。,（三）免疫性 1.传染性免疫 一般认为当体内持续有螺旋体存在时，对再感染有免疫力，一旦螺旋体被杀灭，其免疫力亦随之消失。 2.以细胞免疫为主 3.产生两类抗体 梅毒螺旋体抗体 心磷脂抗体（反应素）：能与生物组织中的类脂抗原（如牛心肌）发生非特异性结合反应，可利用其进行血清学诊断。,（一）标本采集 期梅毒：硬下疳渗出液 期梅毒：梅毒疹渗出液或局部淋巴结 抽出液（二）显微镜检查 暗视野显微镜观察螺旋体的动力和形态 Fontana镀银染色法,三、微生物学检查法,（三）血清学诊断 非密螺旋体抗原试验：测非特异性抗体 抗原（正常牛心脂质）测血清中的反应素（心磷脂抗体） 1. RPR试验和TRUST试验：适合梅毒患者的初筛。,2.密螺旋体抗原试验 采用Nichols株梅毒螺旋体或重组蛋白作为抗原， 测定病人血清中特异性抗体。 荧光密螺旋体抗体吸收试验（fluorescent treponemal antibody-absorption, FTA-ABS） 梅毒螺旋体血凝试验（treponema pallidum hemagglutination assay, TPHA）,预防：加强性卫生教育和严格社会管理。治疗：梅毒确诊后，宜用青霉素等药物及 早予以彻底治疗。治疗原则：早期，足量，正规。,四、防治原则,有310个稀疏而不规则的螺旋，运动活泼。 对人致病的主要有伯氏疏螺旋体、回归热螺旋体、奋森螺旋体等。,第三节 疏螺旋体属,莱姆病的主要病原体。 1977年在美国莱姆镇（Lyme, a town of southeast Connecticut, USA）发现，从硬蜱及患者体内分离出伯氏疏螺旋休。 1985年我国在黑龙江省林区首次发现莱姆病，1988年从病人血液中分离出病原体，迄今已有十多个省和自治区证实。,一、伯氏疏螺旋体,（一）形态染色 两端稍尖，运动活泼，周浆鞭毛数不 等，与运动有关。 Giemsa或Wright染色均佳。,一、生物学性状,革兰染色,Wright染色,（二）培养特性 BSK培养：该培养基含长链饱和与不饱和脂肪酸、氨基酸、牛血清白蛋白及热灭活兔血清等丰富的营养物质。 微需氧，510CO2促进生长。分裂繁殖一代需1218 h。一般培养23周，长出细小而边缘整齐的小菌落。（三）分类 根据DNA-DNA同源性及16S rRNA基因序列分析结果，可将菌株分为10个不同基因种。,（一）致病性 能选择性吸附在胶原纤维相关的核心蛋白多糖。 在体外，它们能与整合素、锚定蛋白、粘多糖相结合。 在体内，表达脂蛋白能激活多种细胞，引起剧烈的炎症反应。,二、致病性与免疫性,（二）所致疾病 莱姆病 经330天潜伏期，在叮咬部位可出现慢性移行性红斑（erythema migrans）。经23周，皮损消退，留有斑痕与色素沉着。 早期症状表现为乏力、头痛、发热、颈硬及关节炎等。晚期症状主要表现为慢性关节炎、神经系统与皮肤异常、心内膜炎等。,（三）宿主及传播媒介 蜱（tick）： 在美国主要是肩突硬蜱和太平洋硬蜱，在欧洲主要是蓖子硬蜱，我国北方林区主要是全沟硬蜱。,慢性移行性红斑,1. ELISA 方法简便，特异性和敏感性较高，为多数实验室所采用。 特异性IgM的主要靶抗原是表面蛋白（21 kDa和35 kDa）和鞭毛抗原（37 kDa和41 kDa），IgG抗体的靶抗原则为鞭毛蛋白（37 kDa和41 kDa）和外膜蛋白C（OspC，21 kDa）。 2.IFA 3.PCR,三、微生物学检查法,疫区人员加强个人防护，避免硬蜱的叮咬。 灭活疫苗于1992年获准在美国家犬中使用。 人用重组蛋白疫苗（OspA、OspC）正在临床试验中。 早期莱姆病可口服四环素、强力霉素、羟氨苄青霉素及红霉素等。 晚期莱姆病由于多种深部组织损害，故一般用青霉素联合头孢三嗪等静脉滴注。,四、防治原则,引起人类回归热的病原体。 根据回归热传播媒介不同，分为两类：一类为虱传回归热，或称流行性回归热，其病原体为回归热疏螺旋体；另一类为蜱传回归热，又称地方性回归热。 我国流行的回归热主要是虱传型。,二、回归热疏螺旋体,致病性 经一周左右的潜伏期，大量流入血液，引起菌血症型发热、肝脾肿大，出现黄疽； 持续一周左右，骤然退热，血中螺旋体消失，隔一周或数日又发热，血中出现螺旋体； 如此反复发作与缓解可达310次，故称回归热。,微生物检查 取发热期外周血1滴，加盖玻片用暗视野显微镜观察，螺旋体运动活泼，为红细胞直径的24倍，螺旋稀疏而不规则，呈波状。,Wright染色,三、奋森疏螺旋体,与梭形梭杆菌寄居于人类口腔牙龈部。 当机体免疫功能下降，则这两种菌大量繁殖，协同引起奋森咽峡炎、牙龈炎、口腔坏疽等。,1.培养钩端螺旋体的最佳温度是A.37 B.35 C.28 D.24 E.202.人畜共患的螺旋体病是A.钩端螺旋体病B.梅毒C.回归热D.雅司病E.奋森咽喉炎3.关于钩端螺旋体病的描述，错误的是 A.人主要是通过接触钩端螺旋体污染的水或土壤而被感染B.钩端螺旋体致病与其产生的内毒素样物质有关C.钩端螺旋体可进入血液引起钩端螺旋体血症D.钩端螺旋体病可累及全身多个脏器E.钩端螺旋体病患者病后可获得以细胞免疫为主的特异性免疫力4.下列观察螺旋体最好的方法是A.革兰染色法 B.抗酸染色法 C.Giemsa染色法 D.暗视野显微镜法 E.悬滴法5.与梅毒螺旋体特征不符合的一项叙述是A.菌体有致密而规律的螺旋，两端尖直B.用普通染料不易着色C.菌体的鞭毛样结构与动力有关 D.用人工培养基不能生长E.抵抗力弱，加热505分钟即死亡,6.关于梅毒螺旋体致病性与免疫性的描述 ，错误的是A.人是梅毒的唯一传染源B.梅毒螺旋体是通过内毒素和外毒素致病C.一、二期梅毒传染性强，而对机体的破坏性小 D.三期梅毒传染性小，而对机体的破坏性大E.