GE中低压层析柱-柱效测定方法-详解

精品文档 1欢迎下载 GEGE 中低压层析柱中低压层析柱 柱效测定方法柱效测定方法 柱效测定是一项经常使用的操作 对于定量表征层析柱的工作状态是否良好 工艺的验证具有重要的意义 但是实际工作中很多朋友都遇到不会测柱效或者 测出来注销过低的状况 不知道如何解决 所以今天我就给大家详细介绍一下 柱效的正确测定方法 以及经常遇到的问题如何解决 本方法适用于所有 GE 公司中低压液相色谱的预装柱及自己填装的层析柱 介绍分为 5 个部分 测前准备 试剂选择 测柱效操作 测试结果积分 经常 发生的问题 1 测前准备 KTA 层析设备 要求设备的型号与层析柱大小匹配 从上样阀门到紫外和电 导检测器之间的体积要做到最小 管路内径尽量细 管路尽量短 这对于准 确测量实验室小层析柱的柱效非常重要 测试平衡溶液及样品 这个部分在试剂选择中单独细说 装填好的层析柱 使用平衡缓冲液在测柱效的流速下至少平衡 1 5 CV 柱体 积 平衡方向与测柱效方向必须 一致 样品环 容积大于 1 柱体积 2 试剂选择 测柱效主要有两种测试系统 1 NaCl 测试系统 2 丙酮测试系统 只要操作正 确 两个系统测出来的结果是 基本一致的 但是要注意 各试剂的浓度不能随 意改变 否则影响测试结果 NaCl 测试系统 对于所有种类的柱子和填料 都可以使用氯化钠系统测柱效 平衡液 0 4 M NaCl 水溶液 样 品 0 8 M NaCl 水溶液 3 测柱效操作 测柱效全程使用 30 cm h 线性流速 平衡层析柱至少 1 5 CV 将 1 CV 的样品 NaCl 或丙酮 注射进入层析 柱 使用平衡液冲洗直至电导或紫外 280nm 出 现响应峰 4 测试结果积分 以 UNICORN6 版本为例演示给大家看如何操作 各 UNICORN 版本操作基本一致 以 NaCl 系统测柱效的所 有操作针对电导曲线 以丙酮系统测柱效的所有操作 针对 UV 280 曲线 手头没有测柱效结果 所以随便找 了一个图 里面有两个 峰 大家测柱效的结果只有一个峰 1 在 Evaluation 窗口中打开测柱效结果文件 在 Curve 窗格中点击右键 选 择 Customize 2 勾选复选框去掉不需要显示的曲线 精品文档 2欢迎下载 3 在工具栏中点击峰积分按钮 进行积分处理或者在 Integrate 下拉菜单中点 击 Peak Intergrate 进行积分 处理 4 选择需要积分的曲线以及积分表存储位置 基线类型默认为 Calculatebaseline 5 在积分窗口中点击 Peak Window 出现以下窗口 通过拖动左右两条直线可 以选择需要进行积分的范 围 点击 OK 确认 6 在积分窗口点击 Reject Peaks 对需要分析的色谱峰可进行高级定义 包括 最小峰高 峰宽 峰面积 峰个数等 在这里最常用的是在 Peakarea is less than 输入需要显示的最大峰的个数 点击 OK 确定 7 在 Column height bed height 一栏中输入柱床高度 在柱效测定中此项 必须填写 8 点击积分窗口中 Save and Edit Peak Table 按钮 可以对峰进行高级操作 9 点击积分窗口中的 OK 查看积分结果 10 在 Peak data 区域点击右键 选择 Customize 在 Select peak table columns 对话框中找到需要显示的数据 plate height HETP Asymmetry 等 点击 OK 执行 Peakdata 区域中将会显示增选的分析结果 判断层析柱柱效是否合格的标准是 Plates per meter 和 Asymmetry Plates per meter 要求大于说明书上要求的最低限 如 3000 或 20000 或者 1000000 平均粒径 3 计算出来就是说明书上的值 Asymmetry 要求处于 0 8 1 8 之间 满足这两点 说明柱子装填没问题 5 经常发生的问题 如果不幸你测出来的柱效不合格 请检查以下原因 影响柱效的可能影响柱效的可能 原因原因 对策对策 柱子装填不均匀重新装柱 管道中液流不稳 定 NaOH 清洗系统 平衡柱子 1 5CV 以上 柱子中有气泡溶液脱气 反压阀在线 冲洗足够长时间 凝胶有结块现象 拆掉层析柱 NaOH 清洗凝胶后重新装柱 换 新的凝胶 柱子液流分配不 好 换分配器或层析柱 系统死体积大换细管路 短接柱位阀 样品体积太大上 1 柱体积