抗原抗体及其结合反应.ppt

第二章抗原和抗体及其结合反应 医学技术学院免疫教研室 教学目的 掌握 抗原抗体结合力 抗原抗体结合反应特点熟悉 影响抗原抗体结合反应的因素 第一节抗原 一 抗原的特性免疫原性 免疫反应性特异性二 用于免疫测定的抗原分类天然 合成多肽 基因重组 第二节抗体 一 抗体的特性特异性 多样性 免疫原性二 用于免疫测定的抗体分类多克隆 单克隆 基因工程三 抗体产生的规律初次应答 再次应答 第三节抗原抗体结合反应的原理 抗原抗体反应 指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应 抗原表位与抗体高变区间的结构互补抗原表位与抗体高变区的紧密接触抗原抗体之间的结合力亲水胶体转化为疏水胶体 物质基础 一 抗原抗体结合力 静电引力范德华引力氢键疏水作用力 抗原抗体结合力示意图 静电引力 electrostaticforces 抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力 又称为库伦引力 2 范德华引力 VonderWaalsforces 抗原和抗体相互接近时 由于分子的极化作用而出现的引力 范德华引力 静电引力 3 氢键结合力 供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引力供氢体 羧基 氨基和羟基受氢体 羧基氧 羧基碳和肽键 氢键具有高度的方向性 4 疏水作用力 疏水键 两个疏水基团在水溶液中相接触时 由于对水分子排斥而趋向聚集力 二 抗原抗体的亲和力和亲合力 抗原抗体亲和力示意图 抗原抗体亲合力示意图 三 液相中抗原抗体的结合反应 抗原抗体复合物 疏水胶体 可见反应 电解质 抗原 亲水胶体 抗体 四 固相表面抗原抗体的结合反应1 抗原抗体结合反应时间2 反应体积3 解离速度4 固相化抗原或抗体的构象 第四节抗原抗体结合反应的特点 特异性可逆性比例性阶段性 亲水胶体转化为疏水胶体示意图 亲水胶体 疏水胶体 可见反应 一 特异性 抗原抗体反应特异性示意图 特异性示意图 交叉反应 crossreactions 抗原抗体交叉反应示意图 二 可逆性 可逆性 抗原与相应抗体结合成复合物后 在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性 影响因素 抗体对相应抗原的亲合力环境因素对复合物的影响 Ag Ab Ag Ab 解离后抗原抗体仍保持原有特性 一定条件 低pH 高浓度盐等 Ab1 比例性 抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系最适比 沉淀物最多时的抗原抗体的浓度比或量比等价带 抗原与抗体分子比例合适范围前带 抗体过量后带 抗原过量 三 比例性 抗原抗体反应比例性示意图 四 阶段性 第一阶段 特异性结合阶段第二阶段 反应可见阶段 第五节影响抗原抗体结合反应的因素 抗原抗体本身因素反应基质因素实验环境因素 一 抗原抗体本身因素 抗原 理化性状 表位种类和数目抗体 来源 特异性 亲和性 效价 来源 R型Ab 等价带宽 易出现可见反应 H型Ab 等价带窄 易出现前带或后带McAb 不宜用于凝集和沉淀反应 浓度 是相对Ag而言 比例要合适 故实验前需滴定 以求最适Ag与Ab比例 特异性与亲和力 关键因素 选择特异性与亲和力高的Ab 二 反应基质因素非特异性因素 如蛋白 盐 药物等 三 实验环境因素 电解质 0 85 生理盐水或缓冲液酸碱度 pH6 8温度 37 最适 一 电解质 作用 中和胶体表面电荷 破坏水化层 使Ag Ab聚集 常用 0 85 NaCl溶液 缓冲液 Ca2 Mg2 等 二 酸碱度抗原抗体反应中一般以pH6 8为宜 有补体参与的反应最适pH为7 2 7 4酸凝集 当pH为3左右时 接近细菌Ag的等电点 可出现非特异性凝集 三 温度最适温度为37 或室温18 25 为宜 若温度高于56 可导致已结合了的抗原抗体复合物解离 甚至分子变性 抗原抗体反应类型 标记免疫技术用荧光物质 放射性核素 酶或化学发光物质等标记抗原或抗体 进行抗原抗体反应后 通过检测标记物对抗原或抗体进行定性 定位或定量分析 思考题 1 抗原抗体结合反应的原理 2 抗原抗体的结合力有哪些 3 抗原抗体结合反应的特点 小结 1 抗原抗