中国药典2010年版－－显微鉴别法.ppt

显微鉴别法 中药材及中药制剂的显微鉴别 显微鉴别系指用显微镜对药材的 饮片 切片 粉末 解离组织或表面制片及含药材粉末的制剂中药材的组织 细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法 鉴别时选择有代表性的供试品 根据各品种鉴别项的规定制片 制剂根据不同剂型适当处理后制片 光学显微镜的构造 1 机械部分 2 照明部分 3 光学放大部分 1 机械部分 1 镜座 基座 稳定和支持整个镜体 2 镜柱 支持镜臂 3 镜臂 支持镜筒 拿镜时握持此臂 4 镜筒 5 物镜转换器 物镜孔 可安装不同放大率的物镜 6 镜台 7 调节器 分粗调和细调 细调在一圈范围内调 2 照明部分 1 反光镜 光源 强时用平光镜 弱时用凹面镜 2 聚光器3 光圈光阑 3 光学放大部分1 目镜 5X 10X 15X 内可放测微尺2 物镜 低倍 镜筒短 筒径粗 5X 高倍 镜筒长 筒径细 40X 45X 油镜 镜筒最长 80X 85X 光学显微镜的使用 一 低倍镜的用法1 取镜 注意小心平稳轻放 2 准备 3 对光 4 上片 注意有盖玻片的向上 注意取盖玻片时的拿法 5 调节物距 注意先把低倍镜调至距玻片0 5厘米的样子 粗调 然后缓慢使物镜上调 直至视野里出现可见物 注意两个要领 一是慢 二是距离只允许调大不允许调小 标本片与物象移动方向相反 如果调过了必须从头再来一次 直至视野里出现物象 二 高倍镜的用法用高倍镜的方法须在低倍镜取像的情况下 换高倍镜头 调节微调旋钮直至看清物象 调节范围在一圈以内 显微镜的维护 取镜时应一手紧握镜臂 一手平托镜座 安放好的显微镜就不要随意搬动 使用前后 检查镜头和镜体 严禁随意拆卸 保持清洁 避免灰尘和潮湿 避免阳光直射 远离挥发性和腐蚀性化学试剂 镜筒下降时 眼睛一定要看着物镜 使用显微镜时 一定要稳重 谨慎 轻拿轻放 显微镜不要放在实验桌的边缘 以防跌落地面 实验完毕 把显微镜擦拭干净 再转动镜头转换器 把两个物镜偏到两旁 最后把显微镜放进镜箱里 送回原处保存 显微测微器的使用 显微测微尺是用来测量细胞在显微镜下长度的工具 由目镜测微尺和镜台测微尺组成 两尺配合使用 1 目镜测微尺放在目镜筒内的一种标尺 为一个直径18 22mm的圆形玻璃片 中央刻有精确等距离的平行线刻度 常为50格或100格 2 载物台测微尺在特制的载玻片中央粘贴一刻有精细尺度的圆形玻片 通常将长1mm 或2mm 精确等分成100 或200 小格 每1小格长为10um 用以标定目镜测微尺 3 目镜测微尺的标定用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜 目镜和镜筒长度时 目镜测微尺上每一格所代表的长度 取载物台测微尺置显微镜载物台上 在高倍物镜 或低倍物镜 下 将测微尺刻度移至视野中央 将目镜测微尺 正面向上 放入目镜镜筒内 旋转目镜 并移动载物台测微尺 使目镜测微尺的 0 刻度线与载物台测微尺的某刻度线相重合 然后再找第二条重合刻度线 根据两条重合线间两重合线间两种测微尺的小格数 计算出目镜测微尺每一小格在该物镜条件下相当的长度 um 如目镜测微尺77小格 0 77 与载物台测微尺的30小格 0 7 1 0 相当 已知载物台测微尺每一小格的长度为10um 目镜测微尺每一小格长度为 10um 30 77 3 8um 当测定时要用不同的放大倍数时 应分别标定 4 测量方法将需测量的目的物显微制片置显微镜载物台上 用目镜测微尺测量目的物的小格数 乘以上述每一小格的微米数 通常是在高倍镜下测量 但欲测量较长的目的物 如纤维 导管 非腺毛等的长度时 需在低倍镜下测量 记录最大值与最小值 um 允许有小量数值略高或略低于规定 药材显微制片 1 横切片或纵切片制片取供试品欲观察部位 经软化处理后 用徒手或滑走切片法 切成10 20 m的薄片 必要时可包埋后切片 选取平整的薄片置载玻片上 根据观察对象不同 滴加甘油醋酸试液 水合氯醛试液或其他试液1 2滴 盖上盖玻片 必要时滴加水合氯醛试液后 在酒精灯上加热透化 并滴加甘油乙醇试液或稀甘油 盖上盖玻片 粉末制片 供试品粉末过四号筛 挑取少许置载玻片上 滴加甘油醋酸试液 水合氯醛试液或其他适宜的试液 盖上盖玻片 必要时 按上法加热透化 表面制片 将供试品湿润软化后 剪取欲观察部位约4mm2 一正一反置载玻片上 或撕取表皮 加适宜的试液或加热透化后 盖上盖玻片 解离组织制片 将供试品切成长约5mm 直接约2mm的段或厚约1mm的片 如供试品中薄壁组织占大部分 木化组织少或分散存在 采用氢氧化钾法 若供试品质地坚硬 木化组织较多或集成较大群束 采用硝铬酸法或氯酸钾法 1 氢氧化钾法置供试品于试管中 加5 氢氧化钾溶液适量 加热至用玻璃棒挤压能离散为止 倾去碱液 加水洗涤后 取出少量置载玻片上 用解剖针撕开 滴加稀甘油 盖上盖玻片 2 硝铬酸法置供试品于试管中 加硝铬酸试液适量 放置 至用玻璃棒挤压能离散为止 倾去酸液 加水洗涤后 照上法装片 3 氯酸钾法置供试品于试管中 加硝酸溶液 1 2 及氯酸钾少量 缓缓加热 待产生的气泡渐少时 再及时加入氯酸钾少量 以维持气泡稳定地发生 至用玻璃棒挤压能离散为止 倾去酸液 加水洗涤后 照上法装片 花粉粒与孢子制片 取花粉 花药 或小的花朵 孢子或孢子囊群 干燥供试品浸于冰醋酸中化 用玻璃棒研碎 经纱布过滤离心管中 离心 取沉淀加新鲜配制的醋酐与硫酸 9 1 的混合液1 3ml 置水浴上加热2 3分钟 离心 取沉淀 用水洗涤2次 取沉淀少量置载玻片上 滴加水合氯醛试液 盖上盖玻片 或加50 甘油与1 苯酚各1 2滴 用品红甘油胶 取明胶1g 加水6ml 浸泡至溶化 再加甘油7ml 加热并轻轻搅拌至完全混匀 用纱布过滤至培养皿中 加碱性品红溶液 碱性品红0 1g 加无水乙醇600ml及樟油80ml 溶解 适量 混匀 凝固后即得 封藏 磨片制片 坚硬的动物 矿物类药 可采用磨片法制片 选取厚度约1 2mm的供试材料 置粗磨石 或磨砂玻璃板 上 加适量水 用食指 中指夹住或压住材料 在磨石上往返磨砺 待两面磨平 且厚度约数百微米时 将材料移置细磨石上 加水 用软木塞压住在材料上 往返磨砺至透明 用水冲洗 再用乙醇处理和甘油乙醇试液装片 含药材粉末的制剂显微制片 按供试品不同剂型 散剂 胶囊剂 内容物为颗粒状 应研细 可直接取适量粉末 片剂取2 3片 水丸 糊丸 水蜜丸 锭剂等 包衣者除去包衣 取数丸或1 2锭 分别置乳钵中研成粉末 取适量粉末 蜜丸应将药丸切开 从切面由外至中央挑取适量样品或用水脱蜜后 吸取沉淀物少量 根据观察对象不同 分别按粉末制片法制片 1 5片 细胞壁性质的鉴别 1 木质化细胞壁加间苯三酚试液1 2滴 稍放置 加盐酸1滴 因木质化程度不同 显红色或紫红色 2 木栓化或角质化细胞壁加苏丹 试液 稍放置或微热 显橘红色至红色 3 纤维素细胞壁加氯化锌碘试液 或先加碘试液湿润后 稍放置 再加硫酸溶液 33 50 显蓝色或紫色 4 硅质化细胞壁加硫酸无变化 细胞内含物性质的鉴别 1 淀粉粒 1 加碘试液 显蓝色或紫色 2 用甘油醋酸试液装片 置偏光显微镜下观察 未糊化的淀粉粒显偏光现象 已糊化的无偏光现象 2 糊粉粒 1 加碘试液 显棕色或黄棕色 2 加硝酸汞试液 显砖红色 材料中如含有多量脂肪油 宜先用乙醚或石油醚脱脂后进行试验 3 脂肪油 挥发油或树脂 1 加苏丹 试液 显橘红色 红色或紫红色 2 加90 乙醇 脂肪油和树脂不溶解 篦麻油及巴