西北农林科技大学夏效东修改

汇报人：夏效东 西北农林科技大学 教授2016.8.17尿石素 A对 ox-LDL诱导的内皮细胞功能紊乱的影响及机制3214目 录Contents研究内容研究背景研究结论研究结果12 435瘫痪中风死亡据统计：我国每 5个成人中有 1人患有心血管疾病动脉粥样硬化是诱发心血管疾病的主要病理基础1.1 动脉粥样硬化发病率高一、研究背景1 动脉粥样硬化研究概况巨噬 -泡沫细胞形成 -关键环节在胞内胆固醇合成过多或者摄入过多的情况下， 促进巨噬细胞胆固醇外流 对抑制泡沫细胞形成和防治动脉粥样硬化起到关键作用。内皮细胞功能紊乱 启动环节动脉硬化发展的重要表征。 体现出 促炎 、 促血小板聚集 、促血管收缩、促凝等机能转变。microRNA新型药物靶点进行转录后基因调控。参与动脉粥样硬化进程的种类繁多，主要调节炎症反应、脂质代谢、细胞增殖等。1.2 动脉粥样硬化分子机制1 动脉粥样硬化研究概况一、研究背景尿石素 A(Urolithin A, Uro-A)是 石榴 、 草莓 、 花生 等富含 鞣花单宁 的食物经肠道微生物代谢生成的。尿石素 A在血浆中的浓度可达1425 M。图 1-2. 尿石素在肠道中的代谢过程2.1 尿石素的形成2 尿石素 A研究概况一、研究背景抗癌活性抗氧化活性抗炎活性抗疟疾活性抗菌活性2.2 尿石素生物活性一、研究背景2 尿石素 A研究概况在人动脉内皮细胞、 THP-1源性巨噬细胞、 LPS诱导的 RAW264.7中，尿石素 A可以显著抑制促炎因子表达上调，表现出 强于其他种类尿石素 的抗炎 作用 (Gimenez-Bastida et al. 2012， Piwowarski et al. 2014)。尿石素 A能够 显著 减弱人肝细胞和脂肪细胞中甘油三酯的累积 并有效抑制 THP-1/巨噬细胞中胆固醇的募集 (Mele L et al. 2016, Kang I et al. 2016)。因此 推测尿石素 A在小鼠 RAW264.7巨噬细胞中具有 潜在 的抑制胆固醇摄入和合成的作用。2.3 尿石素 A研究进展一、研究背景2 尿石素 A研究概况第二部分研究内容人动脉内皮细胞尿石素 A 细胞活性NO释放单核 -内皮黏附和黏附因子表达分析炎症因子表达分析炎症信号转导途径分析细胞结构（ LDH）相关基因表达分析从细胞水平阐明尿石素 A防治动脉粥样硬化的机制二、研究内容二、研究内容内皮细胞炎症反应单核 -内皮细胞粘附尿石素 A对动脉内皮细胞功能的影响MTT毒性乳酸脱氢酶含量及一氧化氮含量及表达分析单核 -内皮黏附和黏附因子表达分析炎症因子表达分析炎症信号转导途径分析分子机制尿石素 A抗动脉粥样硬化形成的作用机制研究技术路线第三部分研究结果图 1-1. Uro-A对 HAEC细胞存活率的影响内皮细胞存活率工作浓度：0.5 2.5 5 孵育时间：24 h1.1 低浓度尿石素 A促进 内皮细胞存活率1 尿石素 A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核 -内皮细胞粘附的影响三、研究结果1 尿石素 A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核 -内皮细胞粘附的影响三、研究结果1.3 尿石素 A提高一氧化氮（ NO）含量图 1-3. Uro-A对 NO含量的影响一氧化氮含量1.2 尿石素 A抑制乳酸脱氢酶（ LDH）漏出率图 1-2. Uro-A对 LDH漏出率的影响乳酸脱氢酶漏出率细胞完整性 氧化应激信号分子1 尿石素 A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核 -内皮细胞粘附的影响三、研究结果图 1-4. Uro-A对 eNOS和 ET-1基因表达量的影响NO血管舒张ET-1血管收缩基因相对表达1.4 尿石素 A对内皮一氧化氮合成酶（ eNOS）和内皮素 1（ ET-1）表达量的影响1.5 尿石素 A减少单核 -内皮粘附细胞总数图 1-5,6 孟加拉 红 染色法 检测 Uro-A对单 核 -内皮粘附 细 胞 总 数的影响。 (A)对 照 组 ； (B) ox-LDL组 ； (C)ox-LDL+0.5 M Uro-A组 ； (D)ox-LDL+2.5 M Uro-A组 ； (E) ox-LDL+5 M Uro-A组细胞总数比值1 尿石素 A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核 -内皮细胞粘附的影响三、研究结果1.6 尿石素 A对单核细胞粘附内皮细胞的影响图 1-7. pH荧 光探 针 法 检测 Uro-A对单 核 细 胞粘附内皮 细 胞 的影响。 (A)对 照 组 ； (B) ox-LDL组 ； (C)ox-LDL+0.5 M Uro-A组 ； (D)ox-LDL+2.5 M Uro-A组 ； (E) ox-LDL+5 M Uro-A组图 1-8. 定量分析 Uro-A对单 核 细胞粘附内皮 细 胞 的影响荧光强度1 尿石素 A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核 -内皮细胞粘附的影响三、研究结果图 1-9. Uro-A对 粘附因子表达量的影响1.7 尿石素 A抑制粘附因子表达基因相对表达1 尿石素 A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核 -内皮细胞粘附的影响三、研究结果尿石素 A可降低由氧化低密度脂蛋白诱导的黏附因子的表达下调 细胞间粘附因子 ICAM-1和单核细胞趋化蛋白 MCP-1的基因表达对单核 -内皮细胞粘附进行调控。维持 内皮细胞完整性和一氧化氮 /内皮素含量平衡 ，从而改善内皮细胞 功能紊乱的作用。1.8 小结人动脉内皮细胞尿石素 A1 尿石素 A对氧化低密度脂蛋白诱导的单核 -内皮细胞粘附的影响三、研究结果2.1 尿石素 A降低 ox-LDL诱导的内皮细胞炎症因子含量图 2-1. Uro-A对 IL-6浓 度的影响 图 2-2. Uro-A对 TNF-浓 度的影响 图 2-3. Uro-A对 IFN-浓 度的影响白介素6含量干扰素含量肿瘤坏死因子含量2 尿石素 A通过调控 MAPK信号通路对 ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响三、研究结果ox-LDL可诱导 IL-6、 TNF-产生诱导炎症反应， Uro-A可有效改善这种作用；ox-LDL不能 直接 通过 IFN-对 HEAC造成 炎症反应， 且 Uro-A不是通过响 IFN-相关 基因或 蛋白 的表达对炎症反应进行调控 。 图 2-4. Uro-A对 PPAR-基因表达的影响PPAR-基因相对表达2.2 尿石素 A通过调控 miRNA-27促进过氧化物酶体增殖物激活受体 （ PPAR-）基因表达2 尿石素 A通过调控 MAPK信号通路对 ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响三、研究结果Uro-A改善经氧化低密度脂蛋白对 PPAR-基因表达的抑制作用图 2-5. Uro-A对 miRNA-27基因表达的影响抑制表达miR-27基因相对表达图 2-6. miR-27过 表达和抑制表达的情况下 2.5 M Uro-A对 PPAR-基因表达的影响PPAR-基因相对表达尿石素 A通过抑制 miR-27表达提高 PPAR-转录水平2.2 尿石素 A通过调控 miRNA-27促进过氧化物酶体增殖物激活受体 （ PPAR-）基因表达2 尿石素 A通过调控 MAPK信号通路对 ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响三、研究结果Thanks2.2 尿石素 A抑制 ERK 1/2、 SAPK/JNK和 p38信号通路关键蛋白的表达2 尿石素 A通过调控 MAPK信号通路对 ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响三、研究结果图 2-7. U0126和 Uro-A对 ERK 1/2、 P-ERK 1/2蛋白表达的影响 图 2-8. SP600126和 Uro-A对 SAPK/JNK、 P-SAPK/JNK蛋白表达的影响Thanks图 2-9. Uro-A对 p38和 p-p38蛋白表达的影响2.2 尿石素 A抑制 ERK 1/2、 SAPK/JNK和 p38信号通路关键蛋白的表达2 尿石素 A通过调控 MAPK信号通路对 ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响三、研究结果Uro-A能够 明显 抑制 50 g/m L ox-LDL激活的 ERK 1/2、 SAPK/JNK和 p38磷酸 化，并且和通路 抑制剂 U0126 及 SP600125具有 一定的协同作用。2.3 尿石素 A通过调控 ERK/PPAR-信号转导途径抑制 ICAM-1表达图 2-10. U0126和 2.5 M Uro-A对 PPAR-蛋白表达的影响 图 2-11. PPAR- siRNA和 2.5 M Uro-A对 ICAM-1 mRNA表达的影响尿石素 A调控ERK/PPAR/ICAM-1信号转导途径2 尿石素 A通过调控 MAPK信号通路对 ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应的影响三、研究结果降低炎症因子含量通过 miR-27途径调控 PPAR-抑制 ox-LDL诱导的 MAPK通路激活通过 ERK/PPAR途径调控 ICAM-1表达2.4 小结2 尿石素 A通过调控 MAPK信号通路对 ox-LDL