半定量RT-PCR和定量RT-PCR的区别_第1页
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半定量 和定量 的区别半定量 和定量 的区别 定量 PCR 较半定量准确 可实时定量 理论上有 1 个 copy 的差别就能区分开 如果你 只想看看大致趋势 半定量不失为一种快速的方法 现在一些高级别的刊物上还有半定量 的结果 如 plant cell plant physiology genome biology 等 半定量反转录 聚合酶链反应 semi quantitatie reerse transcription and polymerase Chain reaction SqRT PCR 是近年来常用的一种简捷 特异的定量 RNA 测定方法 通过 mRNA 反转录成 cDNA 再进行 PCR 扩增 并测定 PCR 产物的数量 可以推测样品中特异 mRNA 的相对数量 以半定量 RT PCR 为基础建立起来的 mRNA 含量测定技术 较含内标化 的 RT PCR 定量测定的 mRNA 的方法更为简便可行 这种方法不另设 内标准 排除了俩对 不同引物之间的相互抑制和灵敏读差异 而且具有明显的剂量 效益关系和良好的重复性 步骤 1 抽提 RNA 2 反转录获得 cDNA 3 以 cDNA 为模板做 PCR 注意 步骤 1 RNA 抽提质量一定要好 注意污染 内参的选择 常用的有 actin 和 GAPDH 俩中 步骤 3 半定量 RT PCR 应该再两管中进行 既内参和目的基因各一管 这样 便于控制 做图的时候可以放在一各泳道里跑 指数期和平台期一定要摸清楚 定量 quantitatie reerse transcription and polymerase Chain reaction qRT PCR 是在用一步法或两步法 在 PCR 反应体系中加入荧光基团 利用荧光信号积累实时监测整 个 PCR 进程 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 有相对定量和绝对定量 两种分析方法 绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目 即通常所说的拷贝 数 相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例 而不需要知 道它们在每个样本中的拷贝数 另外 与传统的 PCR 技术相比 Real time Q PCR 的不足之 处是 1 由于运用了封闭的检测 减少了扩增后电泳的检测步骤 因此也就不能监测扩 增产物的大小 2 因为荧光素种类以及检测光源的局限性 从而相对地限制了 real time Q PCR 的复合式 multi
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