荧光偏振免疫分析PPT课件.ppt

均相酶免疫测定 沈富兵 用于小分子激素和半抗原 如药物 的测定 酶标记物与相应的抗原或抗体结合后 标记酶的活性会发生改变 不用分离结合和游离酶标记物 通过测定标记酶的活性的改变 而确定抗原或抗体的含量 原理 概述 最具代表性的两种技术 酶放大免疫测定技术EMITenzyme mutipliedimmunoassaytechnique 克隆酶供体免疫分析CEDIAclonedenzymedonorimmunoassay 酶放大免疫测定技术EMITenzyme mutipliedimmunoassaytechnique 酶 磷酸葡萄糖脱氢酶 底物 磷酸葡萄糖 磷酸葡萄糖 磷酸葡萄糖酸 辅酶 还原型辅酶 340nm处最大吸收峰 克隆酶供体免疫分析CEDIAclonedenzymedonorimmunoassay 荧光偏振免疫测定 fluorescencepolarizationimmunoassay FPIA 荧光抗体技术 检测组织或细胞中抗原时间分辨荧光免疫测定荧光免疫测定分析技术 检测体液中微量物质荧光偏振免疫测定 FPIA 荧光免疫分析法 荧光偏振免疫测定 fluorescencepolarizationimmunoassay FPIA 为一种均相荧光免疫测定方法 其利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光照射后 可吸收光能而产生另一单一平面的偏振发射荧光 该荧光强度与荧光标记物质在溶液中旋转的速度与分子大小呈反比 常采用抗原 抗体竞争反应原理 适用于小分子半抗原 如药物浓度 的检测 定义 原理 光的本质是电滋波 光是各个方向电滋波的混合物 当光线通过偏振滤光片后 形成只有一个方向的电滋波 称之为偏振光 荧光物质经单一平面的偏振光 蓝色光 485nm 激发后 可吸收光能跃入激发态 在其恢复至基态时 释放能量并发射出单一平面的偏振荧光 绿色光 525nm 550nm Y Y Y Y 产生强偏振荧光 产生偏振荧光吗 荧光偏振免疫分析的特征 AgF分子小 转动速度快 偏振荧光弱 AgF Ab分子大 转动速度慢 偏振荧光强 若待检抗原多 则AgF Ab少 AgF多 偏振荧光弱 待检抗原含量与偏振荧光强度成反比 Y Y Y Y FPIA的评价 操作简便 避免多次洗涤步骤 快速 各物质混匀 孵育数分钟后即可测定 环保 有颜色和浑浊的溶液不干扰检测结果 跨世纪全自动免疫发光系统 美国雅培制药有限公司诊断产品中国部 CAPTODAY调查结果 2003 全球自动化免疫系统接受最多的仪器 AxSYM 有近20000台 AxSYM 在全美的仪器拥有量最多 大于4000台 Source InformationDynamics2000 AxSYM分析项目的发展 目前在AxSYM上可提供的项目有超过80项使用的技术有MEIA FPIA IonCapture和REA AxSYM可提供之分析项目 肝炎 爱滋甲肝抗体 IgM甲肝抗体甲肝抗体 定量 乙肝表面抗原确证乙肝表面抗原乙肝表面抗体 定量 乙肝核心抗体乙肝核心抗体 IgM乙肝e抗原乙肝e抗原 定量 乙肝e抗体丙肝抗体 第三代 爱滋抗体艾滋抗原 抗体先天性疾病风疹病毒 IgG风疹病毒 IgM弓形体 IgG弓形体 IgM巨细胞病毒 IgG巨细胞病毒 IgM 肿瘤标志物甲胎蛋白癌胚抗原前列腺特异性抗原糖类抗原125糖类抗原153糖类抗原199游离前列腺特异性抗原总前列腺特异性抗原B 2微球蛋白Pepsinogen 甲状腺功能三碘甲状腺原氨酸甲状腺素游离三碘甲状腺原氨酸游离甲状腺素超敏促甲状腺素促甲状腺素3 0甲状腺摄取抗 TPO抗 TgPTH 生殖 内分泌总B人绒毛膜促性腺激素促黄体生成素促卵泡生成素雌二醇孕酮催乳素睾酮心血管急诊肌酸激酶 MASS 心肌钙蛋白 I心肌红蛋白同型胱胺酸酸BNP代谢铁蛋白胰岛素B12叶酸考的松 治疗药物地高辛茶碱普鲁卡因乙酰普鲁卡因酰胺奎尼丁卡马西平苯巴比妥丙戊酸洋地黄妥布霉素庆大霉素万古霉素环孢霉素 滥用药物苯妥英钠酒精三环类抗抑郁药醚沙酮安菲他明天使尘巴比妥类药物安定水杨酸盐药物可卡因鸦片类AMP METH大麻类药物 80余项 AxSYM简介 系统控制中心 纤维杯容器 样品中心 运行中心 供应中心 系统描述 系统控制中心 样品 测试放置清单结果浏览报告 选择结果动态时间显示和批处理结果病人结果打印结果保存和归档定标浏览LeveyJennings质控图库存监控自动 菜单操做保养 帮助屏幕 玻璃纤维杯用于MEIA方法的微粒子捕捉通过仪器上的纤维杯容器自动排放 纤维杯容器 可一次放置250个纤维杯用于MEIA方法的分析可连续放置 纤维杯的放置可任意方向 纤维杯 特性 表面玻璃纤维网中间强力吸水棉特制的分离杯 使固液相分离 立体冲洗彻底 大大提高了反应的特异性 样品中心 自动开盖器 连续 随机和急诊模式 反应杯 试剂盒 样品架 样品中心 样品中心 样品转盘由6个样品架组成 可放置90个原试管 血清管 样品杯 在系统中可连续加样急诊项目少于11分钟出结果条码可识别样品架和样品管可条形码识别样品和样品架位置 便于联网和避免人为误放位置 样品中心 试剂转盘可放置20个试剂盒 每盒100测试总计2000上机测试试剂试剂可在仪器上连续放置336小时上机试剂可连续放置 试剂盒 特性 试剂盒独立包装 无须配置仪器自动开盖 避免蒸发和污染条形码自动识别种类和位置试剂盒有优秀的稳定性 样品中心 反应杯转盘可放置90个反应杯并可随时补充反应杯可随时加入而不需按暂停系统操作 RV反应杯 Kitting技术不同的分析项目有 不同原理 FPIA ICIA 不同方法 夹心法 竞争法 不同步骤 1步法 2步法 3步法 不同反应时间和清洗量将大包装试剂 样品分装到每个RV反应杯中 分析软件来控制整个反应过程 获得最完美地测试结果 样品中心 特殊的清洗站 特殊的探针 运行中心 FPIA光路 MEIA光路 纤维杯放落器 运行中心探针 运行中心转盘 1号液喷嘴 3号液喷嘴 运行中心 特殊的注射器 光路系统 运行中心 Kitting运行步骤此步骤将样品和所需试剂加入反应杯反应杯被送入运行中心转盘进行余下步骤的操作运行转盘FPIA法的清洗 反应和读数在此转盘进行 此转盘含有36个位置 一旦MEIA分样步骤完成 样品被放入纤维杯 在纤维杯转盘进行清洗 加入底物 读数 所有的MEIA分析在此进行 此转盘含有32个位置分析结束后反应杯和纤维杯被自动扔入固体废物箱 供应中心 2号液 4号液 3号液 1号液 废液和废物 供应中心 库存的管理上机的大瓶试剂为通用试剂 例如 MUP 离子液 MEIA缓冲液 微粒子洗液 FPIA缓冲液 洗液系统控制中心对库存进行跟踪和更新废物的管理分为液体和固体废物 十分容易的废物处理可直接进行废液的排放上机可维持8小时 标准品 特性 半定量 单点Index定标定量 2点Master和6点Standard定标多种选择 标准曲线稳定时间长 同时可保存4个不同批号标准曲线 节省试剂 无须配置 质控品 特点 半定量 阴 阳性质控定量 高 中 低质控多项质控可供应全面的质控配套 稳定的质控可作为动态跟踪的依据 L J质控图可全面监控系统和试剂状态 无须配置 AxSYM日常操作 简单三步 仪器自动完成所有工作 开启电源 5 8分钟自检 进入主菜单 启动 选择主菜单F3 STARTUP READY状态 清除固体和液体废物和更新记录 更新库存 纤维杯库存更新 仪器的启动 仪器的启动 1 2 3 号缓冲液更新 冲洗管路 探针内部清洗 样品检测 仪器的关闭 探针内部清洗 关机 AxSYM日常保养 探针外部清洗 冲洗站清洗 1 号注液器清洗 清洁过滤网 每周保养 FPIA和MEIA的光路检查 清洁样品篮和样品管托架 清洁运行中心转盘和纤维杯转盘 每周保养 仪器功能特点 双向选择能力 为将来扩充为LAS系统提供平台读条码能力 避免人为误放 可随意放置样品和试剂自动稀释功能 可成批 任意和单独选择 扩展可检出范围自动转测功能 为临床诊断提供更多依据 并减少病人负担自动重测功能 避免错误结果触摸式屏幕 提供更方便的操作模式试剂 消耗品 废物跟踪 了如执掌 随时添加随时添加试剂 消耗品 保证仪器可连续运行 仪器功能特点 试剂盒自动开盖 避免试剂蒸发和交叉污染 提供更可靠结果试剂自动振荡混匀 防止试剂不均试剂自动切换 节省试剂 使用方便定标点数 1点 2点和6点 多种选择 节省试剂储存标准曲线数量 4条不同批号 前后交接 避免浪费试剂前处理步骤 无 节省劳力 避免误差质控 每日监控 L J质控图可全面监控系统和试剂状态 其它特性 清洗模式 按项目的不同选择不同的冲洗模式以达到最佳冲洗效果清洗方式 磷酸缓冲液清洗内部结构设计为最大剪切力的探针清洗 特殊清洗站设计使探针内外壁清洗携带率表现 6 106IU L HCG交叉测定于阴性标本时携带率 1 IU L 2g L重组HBsAg交叉测定于阴性标本时携带率 0 1 g L每日维护保养时间 3分钟仪器自动完成 试剂特点 稳定性 标准曲线稳定时间 同一批号的试剂试剂开启后稳定时间 2 8 尽效期试剂可否长期上机 可以 且无冰箱试剂有效期 一般至少6个月 最长可达1年精密度 按NCCLS的EP5 T2标准小于5 CV灵敏度 极佳的灵敏度 HBsAg可测0 17ng ml hTSH 功能灵敏度可达0 01 IU ml AxSYM总结 快速之检测能力 每小时80 120个测试 出结果时间8 30分钟灵活之分析模式 可随机 连续和急诊取样弹性之工作流程 可按实验室的自然工作流程公认之技术原理 MEIA FPIA和ICIA技术广泛之检测项目 肝炎 爱滋 肿瘤 性激素 甲状腺 代谢类 先天性疾病 药物