检测方法验证和确认程序

内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 1目的 PURPOSE 本规程规定了 XXXXXXX 药业有限公司检测方法验证和确认程序 格式和要求 2范围 SCOPE 2 1本规程适用于 XXXXXXXX 药业有限公司 QC 实验室的检测方法的确认 2 2本规程适用于美国药典 国家处方集 欧洲药典或其它药典中记载的检测方 法 和来自于公司内部或外部的已经验证的检测方法 2 3本规程注重在鉴别 纯度和含量的检测方法 2 4本规程将作为 2 3 提及的检测方法验证的常规指引 也适用于最常用的检 测方法的验证 如 2 4 1 鉴别测试 2 4 2 有关物质和降解产物的含量的定量测试 2 4 3 控制有关物质和降解产物的限度测试 2 4 4原料药 起始物料 中间体及其他物料的含量测定 2 5微生物和生物检测方法不在本规程范围内 3参考 REFERENCE 3 1ICH Q2 R1 分析方法验证的文本及方法学 3 2现行美国药典药典方法的验证 3 3现行美国药典药典方法的确认 3 4ICHQ7 原料药的良好质量管理规范 2000 年 11 月 3 5FDA 行业指南 分析方法和方法验证 2000 年 8 月 4职责 RESPONSIBILITIES 4 1QC 负责人或指定人员负责参与本规程的起草 审阅 修订和更新 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 4 2QA 负责人或指定人员负责本规程的审核和保证其被正确地 准确地执行 4 3QC 负责市售产品的检测方法验证 确认这些方法在实际条件下适用于本 实验室的测试 4 4QC 负责人或指定人员负责审核确认方案和确认报告 4 5QC 负责正确地记录实验数据 4 6QC 负责归纳数据 撰写报告并递交给 QC 负责人或指定人员审阅 4 7QC QA 负责人或其指定人员负责审核并审计所有实验室相关文件及规程 以确保其准确和有效 4 8质量部负责批准本规程及验证 确认方案和验证 确认报告 5定义 DEFINITION 5 1检测方法使用者 使用检测方法的部门 实验室或人员 5 2系统适用性 它是用来验证系统能满足预期分析的测试 当适用时 系统适用性应在方 法用于检测或分析样品之前执行 指定的数据 比如响应值和保留时间的 相对标准偏差 RSD 拖尾因子 分离度和理论塔板等 将从重复进样得 到 5 3检测方法 指进行检测的方式 应详细描述进行每个检测实验所必需的步骤 它可以 包括 试剂 对照品及样品溶液的配制 仪器的参数 标准曲线的绘制 计算公式的运用 可接受标准等 5 4检测方法验证 为了证明所使用的检测方法 新的或改进过的 与其预期目的相适应而进 行的一系列实验 5 5对照品和样品溶液稳定性 用来评价对照品和供试品的稳定性而进行的检测 5 6原料药 任何用于药品生产的物质或混合物 并在药品生产的过程中成为药物的活 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 性成分 这类物质提供药物活性或其他的直接效应应用于诊断 治疗 缓 和 处理或预防疾病 或影响身体的机结构或功能 5 7鉴别测试 鉴别试验旨在确认样品中的一种被测物的特性 通常将样品的性质 如光 谱 色谱行为 化学反应等 与参比对照品的性质进行比对 5 8杂质检查 指样品中杂货的定量检测或限度检测 两种检测均是为了准确反映样品的 纯度 定量试验所需验证的项目与限度试验相比是不同的 5 9含量测定 指测定样品中被分析物的含量 5 10 专属性 指在可能存在某些干扰组分 如杂质 降解物 基质等 时 对被分析物 准确可靠测定的能力 5 11 精密度 指在规定条件下对均质样品多次取样进行一系列检测 检测结果的接近程 度 离散程度 5 12 重复性 指在同样的操作条件下 较短时间间隔内的精密度 5 13 中间精密度 指实验室内部条件改变 如 不同日期 不同分析者 不同仪器等情况下 的精密度 5 14 重现性 指不同实验室之间的精密度 合作研究 通常用于方法学的标准化 5 15 检测限 LOD 指样品中的被分析物能够被检测到的最低量 但不必要准确定量 5 16 定量限 LOQ 指在适当的准确性和精密度下 能够定量测定的样品中被分析物的最低量 5 17 线性 指在给定的范围内检测结果与样品中被分析物的浓度 量 成比例关系的 能力 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 5 18 准确度 指真实值或认可的参考值与测量值之间的相近程度 准确度有时也称真实 度 5 19 范围 指样品中被分析物的浓度 量 上限和浓度 量 下限之间的一个区间 并已证实在此区间内 该检测方法具有适当的精密度 准确性和线性 5 20 耐用性 指在实验参数被故意地发生细小改变时 检测不受影响的能力 用以说明 所验证的方法在正常使用时的可靠性 5 21 加标 向标准品 样品或空白剂中加入已知量的已知物质 用于确定检测方法的 性能或进行仪器的校验 5 22 响应因子 分析物产生的信号与产生该信号的分析物的量的比值 5 23 可接受标准 测试结果可接受的数值限度 范围或其它合适的度量标准 5 24 相关系数 R 研究变量之间线性相关程度的量 5 25 信噪比 S N 5 26 纠正与预防措施 CAPA 6程序 RROCEDURE 6 1检测方法使用者应该经过培训 具有相应的经验和知识 以理解检测方法 并能够执行它 确认应当由使用者执行 其结果将为检测方法能像预期的 那样地执行增加信心 6 2检测方法确认和验证的目的是说明该方法适用于其拟定用途 它包括试验 过程中计划的 系统的和记录的数据 以证明方法能满足其拟定分析用途 的要求 6 2 1于药典检测方法 如果确认不成功 并且经药典人员的协助也未能 解决问题 则可断定此方法不适合在该实验室用于该样品 然后 可能有必要按照药典或相关法规开发和验证一个替代的方法 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 6 2 2 确认的要求应该基于方法的复杂性和应用此法的物质的复杂性两方面 来进行的评估 只有那些适合特定方法的确认特性才需要做评估 确 认程序的程度与层次取决于使用者的培训经历及经验水平 方法种类 和与其相关的设备 仪器 具体的方法步骤 和 或被测的物质 6 2 3 除非有迹象表明基本药典方法不适合检测该样品 日常执行的基本药 典检测方法无需确认 基本药典检测方法的例子包括但不限于 干燥 失重 炽灼残渣 多种湿化学方法比如酸度 简单仪器方法比如 pH 值测定等 6 2 4 检测方法验证的进行程度应能反映检测的目的和生产工艺所处的阶段 6 2 5 非药典检测方法的建立和现行方法的改变必须进行验证 6 2 6 SOP QC 025 A01 显示了检测方法验证的流程 6 3在检测临床试验批次的样品时 虽然检测方法可能尚未验证 但检测方法 须具有科学性 并应显示检测方法的适用性 6 3 1 应提供验证结果的表格概要 例如 专属性 线性 范围 准确度 精密度 LOD 和 LOQ 的结果或数值 6 3 2 此时不需要提供完整的验证报告 可在放行检测同时进行分析方法验 证 6 4检测方法确认和验证方案 6 4 1 在确认或验证工作开展前需有已经批准的确认或验证方案 方案内容 应包括但不限于下列项目 6 4 1 1 目的 PURPOSE 应包括 背景介绍和方法描述 6 4 1 2 范围 SCOPE 6 4 1 3 参考 REFERENE 6 4 1 4 职责 RESPONSIBILITIES 6 4 1 5 定义 DEFINITION 6 4 1 6 方法学 METHODOLOGY 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 程序部分应列出确认特性 6 4 1 7 偏差 DEVIATION 6 4 1 8 附件 ATTACHMENTS 6 4 1 9 修订历史 DOCUMENT REVISE HISTORY 6 4 2 确认和验证中所有的原始记录和得到的结果必须记录在执行方案或已 编号的检测记录本上 以方便与其它文件的相互查询 6 4 3 确认和验证过程中若有偏差 需按偏差处理相关规程和调查方法相关 规程执行 6 4 4 检测方法根据变化需决定是否要进行再次验证 再次验证也需依据本 SOP 执行 包括方案和报告的批准 下列变化情况需进行再次验证 6 4 4 1 相关指南变化 例如 ICH 或药典 6 4 4 2 原料药的合成工艺变化 6 4 4 3 检测方法和 或设备变化 6 5检测方法确认和验证报告 Test Method Validation and verification Report 6 5 1 确认和验证方案完成后必须准备相应的方法确认和验证报告 并由质 量部批准生效 6 5 2 推荐的方法验证报告中可以包括下列内容 6 5 2 1总结 SUMMARY OF RESULTS 6 5 2 2目的 PURPOSE 6 5 2 3范围 SCOPE 6 5 2 4物料和设备 MATERIAL ANDEQUIPMENT 6 5 2 5方法 METHOD 6 5 2 6结果和讨论 RESULTSAND DISCUSSIONS 结果部分应包括验证项目 可接受标准和结果等 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 6 5 2 7偏差 DEVIATION 任何偏差均应进行调查和报告 6 5 2 8结论 CONCLUSTION 6 5 2 9建议 RECOMMENDATIONS 6 5 2 10参考 REFERENCE 6 5 2 11附件 ATTACHMENTS 可以包括所有参与人员的资格或培训记录 仪器校验证书 试剂检验报告单 实验记录 原始数据 图谱和结果的一 览表等 6 5 2 12修订历史 DOCUMENT REVISE HISTORY 6 6检验方法确认需确认的特性 通常所要求的确认特性包括但不限于下表中提及的 表 1 进行检测方法确认要求确认的特性 分析方法的类型 Type of analytical procedures 杂质检测 Testing for impurities 含量分析 Assay 特性 Characteristics鉴别 Identification定量检测 Quantitative test 限度检测 Limit test 含量 效价 Content Potency 准确度 Accuracy 专属性 Specificity 重复性 Repeatability 中间精密度 Intermediate precision 检测限 LOD 定量限 LOQ 系统适用性 System suitability 注 表明通常不需评估的特性 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 表明通常需评估的特性 缺乏该项目的分析方法 应由其他分析方法来补充 表明有些情况下需要 6 7检测方法验证需验证的特性 6 7 1 验证的程度取决于相应的验证方案中规定的检测的性质及其用途 6 7 2 检测方法验证常用的验证特性包括但不限于表 2 内容 表 2 检测方法验证所需的验证特性 检测方法类型 Type of test methods 有关物质和降解物测试 Testing for related compounds and degradants 特性 Characteristics 鉴别 Identification 定量测试 Quantitative test 限度测试 Limit tests 含量 仅限测试 Assay measurement only 专属性 Specificity 线性 Linearity 范围 Range 准确度 Accuracy 重复性 Repeatability 中间精密度 Intermediate precision 精密度 Precision 重现性 Reproducibility 检测限 LOD 定量限 LOQ 耐用性 Robustness 系统适用性 如有 Systems Suitability if any 注 表示该特性通常不需评估 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 表示该特性通常需评估 当一种检测方法不能满足专属性的要求时 可由其他辅助检测方法作补充 如果已经评价了重现性 就不需要再评价中间精密度 基于检测的性质可能需要 依据所研究方法的类型 在开发阶段考虑评估耐用性 下述下述 6 8 6 17 对具体验证特性进行逐个描述 以对每一种检测方法的各种验证特性对具体验证特性进行逐个描述 以对每一种检测方法的各种验证特性 提供指导和提供指导和 或建议 或建议 6 8专属性 用于证明专属性的方式取决与检测方法的预期目的 一般一种检测方法不 太可能对某一特定的被分析物具有专属性 完全辨别 在这种情况下 推荐使用两种或多种检测方法的组合以达到所需的辨别程度 6 8 1 鉴别的专属性试验 6 8 1 1合适的鉴别测试应能区别出可能存在的结构相似的化合物 6 8 1 2通过对从含有被分析物的样品中得到的正结果 可以通过 与已知参比物比较 和对不含被分析物的样品中得到的 负结果来证明方法的分辨能力 6 8 1 3对与分析物结构相似或相近的物质进行鉴别试验 证明没 有得到正响应 6 8 2 含量和杂质检查的专属性试验 6 8 2 1可获得的有关物质和降解物 对含量测定来说 专属性应能辨别被分析物与有关物质 和降解产物 实际操作中可以在纯物质中加入适当量的 有关物质和降解物 与未加有关物质和降解物的样品测 定结果相比较 以证明其含量测定结果不受这些物质的 影响 对有关物质测试 可以向原料药中加入含有适当量的有 关物质 通过证明这些有关物质之间能相互分离 并也 能与样品基质中其他组分分离 以此来证明测试方法的 辨别能力 6 8 2 2无法获得的有关物质和降解物 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 如果有关物质或降解物的对照品不能得到 专属性可以 通过将含一定量的有关物质或降解产物的样品测定结果 与另一种成熟的方法测定结果比较 例如与药典方法或 已经验证的其他方法 独立的方法 进行比较 必要时 应包括对强力破坏试验条件下 即光 热 湿度 酸 碱破坏及氧化条件下 获得的样品的测定 对于含量 需要比较两种方法的结果 对于杂质检查 需要比较杂质的概况 峰的纯度试验对显示被测物色谱峰是单个还是多个成分 是很有用的 如二极管阵列 6 8 2 3对色谱方法 应用典型的色谱图来证明专属性 并在图上 恰当地标出每一种成分 其他分离技术也应有类似的考虑 6 8 2 4在色谱方法中 应在一定程度上考察临界分离 对临界分 离 可用两个洗脱程度最接近的化合物的分离度来证明其 专属性 6 9线性 Linearity 测试线性的目的是为了证明整个分析系统 包括检测器和数据采集 有线 性的响应和 或在相应的分析物浓度范围内直接成正比 6 9 1 线性关系是在检测方法的范围内 见第 6 10 节 对方法进行评价 可用所建议的检测方法 直接对原料药 用标准储备溶液稀释 进行 测定 以证明其线性 对于低浓度的溶液 可通过稀释储备液配制 6 9 2 线性应通过目测一组信号与被分析物的浓度或含量做图的关系来评价 6 9 2 1如果有线性关系 可用适当的统计方法对测试结果进行评 估 如用最小二乘法计算回归线 6 9 2 2由线性回归估算所测得的数据本身有助于数学评价线性的 程度 6 9 2 3一些检测方法无论经过何种转换都不显示线性 在这种情 况下 分析的响应值应用样品中被分析物的浓度 含量 的适当函数来表示 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 6 9 3 应提交回归线的相关系数 y 轴上的截距 回归线的斜率 还应提交 数据图表 也可包括其他的统计参数 另外 分析真值与回归线的偏 差也有助于对线性作评价 6 9 4 为建立线性 建议至少用 5 个浓度 若用其他方法则应证明其合理性 6 10 范围 6 10 1 特定的范围一般是从线性研究中得到的 并由检测方法期望的应用 目 的决定 6 10 2 范围是通过检测方法在指定的范围内或在范围的极限时都达到可接 受程度的准确性 精密度来建立的 6 10 3 应考虑如下的最小规定范围 6 10 3 1对原料药的含量测定 通常至少应涵盖测试浓度的 80 120 内 6 10 3 2对于有关物质测定 应至少涵盖有关物质的报告限至标准 的 120 6 10 3 3对已知有异常功效的 有毒的或有意外药理作用的有关物 质 其检测限和定量限应与该有关物质必须被控制的水平 相对应 在研制阶段进行杂质检查方法验证时 有必要根据建议 可能 的限度来考虑范围 6 10 3 4如果用一个实验同时进行含量测定和纯度检查 且仅使用 100 的标准 线性范围应至少涵盖从杂质的报告水平至含 量标准的 120 6 11 准确度 应在检测方法规定的范围内建立准确度 6 11 1 原料药含量 Drug Substance Assay 有多种方法可用于测定准确度 6 11 1 1用该检测方法去测定已知纯度的被分析物 例如 标准物 质 6 11 1 2将建议采用的检测方法的结果与另一种成熟的 准确度已 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 经确定和 或定义了的检测方法 独立的方法 的结果相比 较 6 11 1 3准确度可以在精密度 线性和专属性建立后 推论而得 6 11 2 有关物质 定量 6 11 2 1准确度应通过分析加入了已知量有关物质的样品的方式来 评价 6 11 2 2在不能获得某种有关物质和 或 降解产物的样品情况下 可以考虑与另一种独立的方法测得的结果相比较 6 11 2 3应明确单个或总的有关物质是如何测定 例如 在任何情 况下 可用与主要被分析物所占的重量百分比或面积百分 比 6 11 3 建议的数据 6 11 3 1准确度的评价应至少涵盖所规定的线性范围的 3 种浓度水 平的 不少于 9 次的测定 例如 按完整检测步骤对 3 种 浓度分别测定 3 次 6 11 3 2加入已知量的原料药或有关物质 回收率应报告百分回收 率 与已知加入量的结果进行比较 6 11 3 3用检测方法分析已知纯度的样品 标准物质 回收率应 报告测得的平均值与可接受的真实值之间的差异及其置信 区间 6 11 3 4将检测方法与另一种已良好定性的方法 参照方法 进行 比较 回收率应报告测得的平均值与用参照方法测得的结 果之间的差异及其置信区间 6 12 精密度 Precision 精密度包括重复性 中间精密度 重现性 6 12 1 重复性 Repeatability 6 12 1 1至少测试 6 份 100 浓度的样品溶液或 9 份覆盖方法规定范 围的样品溶液 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 6 12 1 2推荐使用真实样品 并对每个重复分析进行完全的测试 6 12 1 3可用有代表性的样品进行含量的重复性测试 6 12 1 4如果是有关物质测试 仅在无法得到含某种有关物质的样 品时可向样品中加入有关物质 或者 可使用强制降解样 品或未加样的原料药样品 6 12 2 中间精密度 6 12 2 1应确定随机事件对检测方法精密度的影响 6 12 2 2影响因素通常指不同的日期 不同的分析员 不同的设备 等 这些因素不需要进行单独的评估 6 12 2 3中间精密度可在影响因素变化时重复测试得到 6 12 2 4不需要单独考虑这些影响 例如 可通过 2 名分析员在 不同的日期或用不同的设备重复重复性或线性或准确度试 验 以得到精密度 6 12 3 重现性 重现性通过在不同实验室间进行测试的平均值进行评估 6 12 4 建议的数据 在研究每一种精密度时 都应报告标准偏差 相对标准偏差 变异系 数 和置信区间 6 13 检测限和定量限 6 13 1 检测限的测定是通过对一系列已知浓度分析物的样品进行分析 并 以能可靠地测得被分析物的最小量来建立 6 13 2 定量限的测定一般通过对一系列含有已知浓度被分析物的样品分析 在准确度和精密度都符合要求的情况下 来确定被分析物能被定量测 得的最小量 6 13 3 根据信噪比 S N 测定 6 13 3 1该方法仅适用于出现基线噪音的检测方法 例如色谱法 6 13 3 2信噪比的测定是通过比较含有已知低浓度被分析物的样品 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 与空白样品的测定信号 来建立检测限和定量限 6 13 3 3对于估计 LOD 信噪比在 3 1 或 2 1 之间通常是可接受 的 对于估计 LOQ 典型的信噪比为 10 1 6 13 4 根据响应值的标准差和斜率 6 13 4 1该方法适用于滴定 紫外和原子吸收光谱法等 6 13 4 2检测限和定量限判定方法如下 LOD 3 3 S LOQ 10 S 以上公式中 是响应值的标准差 S 是校正曲线的斜率 斜率 S 可从被分析物的校正曲线来估算 的值可用下面的 方法估算 a 基于空白的标准差 通过分析适当数量的空白样品 然 后计算其响应值的标准差 测出分析背景响应值的大小 b 基于校正曲线 研究含有检测限或定量限范围内的被分 析物的样品以得到特定的标准曲线 回归线的剩余标准 差或回归线的 y 轴截距标准偏差都可作为标准偏差 6 13 5 建议的数据 6 13 5 1必须提供检测限 定量限和测定检测限 定量限的方法 6 13 5 2如果检测限是根据信噪比得来的 应提供相关的色谱图作 为证明 6 13 5 3如果是通过计算或外推法得到检测限的估算值 可对一系 列接近或等于检测限度样品的逐个检测来论证这一估算值 6 13 5 4可通过分析适当数量 已知浓度的接近或等于定量限的样 品来证明定量限 6 14 耐用性 需测试此参数的方法包括含量和纯度 6 14 1 依据所研究的检测方法的类型 应在开发检测方法阶段评估耐用性 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 6 14 1 1与所描述的方法比较 以一系列变动的条件来分析相应的 溶液进行评估 6 14 1 2通过分析一系列被处理过的试液来评估 6 14 2 耐用性评估的结果应是建立一系列的系统适用性参数 如分离度试 验 以确保在任何时候使用该检测方法都是有效的 6 14 3 应展示典型的图谱 6 14 4 对于液相色谱 典型的变量是流动相的 pH 温度和流速 流动相的 组成 不同批号或不同供应商的色谱柱等 6 14 5 对于气相色谱 典型的变量是不同批号或不同供应商的色谱柱 温 度和流速 6 14 6 如果样品制备时需过滤 应证明过滤前后样品的一致性 6 14 7 如果样品需要超声和 或混合时 应评估样品制备时的超声和 或混合 时间 6 14 8 当溶液放置时间超过 24 小时或指定时间时 应评估检测方法的分析 物的溶液稳定性 6 15 稳定性指示性质 6 15 1 在对稳定性指示方法进行验证时应评估稳定性指示方法 强制降解 应包括表 3 中列出的空白剂 活性成分和配方颗粒的强迫降解条件 表 3 稳定性指示分析的强降解条件 处理 Treatment 极端强降解条件 Extreme stressed condition 酸 Acid 样品 2N HCl 回流4小时 Sample 2N HCl reflux 4 hours 碱 Base 样品 2N NaOH 回流4小时 Sample 2N NaOH reflux 4 hours 氧化剂 Oxidative 样品 3 H2O2 室温 24小时 Sample 3 H2O2 room temperature 24 hours 热 Thermal 样品 干燥 烘箱内105 加热 5天 Sample dry heat in oven at 105 5 days 热 湿度 Thermal Humidity 样品 顶空湿度饱和 MSH 烘箱内90 48小时 Sample Moisture Saturated Headspace oven at 90 48 hours 湿度样品 干燥器内加水 室温 5天 内部文件内部文件 标题 SOP QC 025 00 检测方法验证和确认程序培训讲义 处理 Treatment 极端强降解条件 Extreme stressed condition HumiditySample desiccators with water room temperature 5 days 阳光测试 Sun test 样品 UV 5天 Sample UV 5 days 样品 干燥 UV下5天 Sample dry under UV 5 days 样品溶液 UV下 5天 无色烧瓶 Sample solution under UV 5 days clear flask 光稳定性 Photo stability 样品溶液 UV下 5天 棕色烧瓶 Sample solution under UV 5 days amber