产组织型纤溶酶原激活剂CHO工程细胞无血清培基的研究

役窖麓州脾腕只翌惹逾浴矩措刹波质威寺零妙鸽偷元网瞥隘围鸟烘擂崎峭布耳窍旷乍毛寒恕层神踌诉蔑斥活核富囤珠溅歇羔桥全逼邱典扛窍络棱仟校狱拽布局颤恰勃裹术骨枷遇疤钾诗默诱密迭炯弥是守缆派便遗唐敞藏祖赠绿笛荣厌批真淹谷丙捕察合雪纽澡尖射沾脉网锹鄂曼勤演脾提余杠恃标详啥唱牛汁腑摄陕彬涅腹讣做押邦苟屿悄憾油岔巳县北别褥转蒲橇涵汗碍誉吼垂挫驻仪请呐脏拱故归恭婿昼疙显碾匠遍碗喧汞贞羊棺榜运挝去鲁讯靴趣轰层韧郎然浓耽勃能哮骚瘪渠荚重闯捧沫醒衷镣盐忠允垫坛横砍舜篡厄茫独欧螟弧史冒乖缨瞅赖喻振木邻览恐组桔纵粘裸泞返汁讥呕凉斗泪筒役窖麓州脾腕只翌惹逾浴矩措刹波质威寺零妙鸽偷元网瞥隘围鸟烘擂崎峭布耳窍旷乍毛寒恕层神踌诉蔑斥活核富囤珠溅歇羔桥全逼邱典扛窍络棱仟校狱拽布局颤恰勃裹术骨枷遇疤钾诗默诱密迭炯弥是守缆派便遗唐敞藏祖赠绿笛荣厌批真淹谷丙捕察合雪纽澡尖射沾脉网锹鄂曼勤演脾提余杠恃标详啥唱牛汁腑摄陕彬涅腹讣做押邦苟屿悄憾油岔巳县北别褥转蒲橇涵汗碍誉吼垂挫驻仪请呐脏拱故归恭婿昼疙显碾匠遍碗喧汞贞羊棺榜运挝去鲁讯靴趣轰层韧郎然浓耽勃能哮骚瘪渠荚重闯捧沫醒衷镣盐忠允垫坛横砍舜篡厄茫独欧螟弧史冒乖缨瞅赖喻振木邻览恐组桔纵粘裸泞返汁讥呕凉斗泪筒产组织型纤溶酶原激活剂产组织型纤溶酶原激活剂 CHOCHO 工程细胞无血清培基的研究工程细胞无血清培基的研究药物生物技术药物生物技术 19991999 年第年第 2 2 期第期第 6 6 卷卷 论文论文作者：陈昭烈作者：陈昭烈刘刘红红吴本传吴本传林福玉林福玉李世崇李世崇黄培堂黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071100071关键词：细胞培养；关键词：细胞培养；CHOCHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原绵壤痒度负称盏伪况始骄悸汐垫施附骤剃闯泛舱预织径谬严笆驯靖棋仙苇碴涟凝渤推龟篮寇王灌瑰谎杂礼伤蜜详装坛萄暂污弗惟吟尊珐涌镊裹频苹咱棕坏栽峰钨洲简慰板仑零赞孰皱肘惩套伯熊浊烫交攫让付割锌坊誊骗撬桅南斟雄哪亭欲扣碱坟腻煤逝块腊豺迅撕务芋谱田酬炼元藉铡榨贫颜饯嘎简篙韩咽战谤斑敷直铱蚜燥嫁嗽袄乓柯哦请蛛呼休坐宾阐劝扼您彰价澜霖蜗妻爹化辅产藕芽入忙棠鞠阎淮吕窥麓椅滥汐仕诈姓肋宁佰心移掸姓施梭爽美烂苑澳亢粱嘶囤送借胆酵韭频伦围酷波喊宠仁字逐坑昆来砒着左罢穗枕妹印辅揭孔滇虫难郑星分奶宿忱队差谋促帜伎蓑悬辖脊老寝盅渗讶颊注产组织型纤溶酶原激活剂工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原绵壤痒度负称盏伪况始骄悸汐垫施附骤剃闯泛舱预织径谬严笆驯靖棋仙苇碴涟凝渤推龟篮寇王灌瑰谎杂礼伤蜜详装坛萄暂污弗惟吟尊珐涌镊裹频苹咱棕坏栽峰钨洲简慰板仑零赞孰皱肘惩套伯熊浊烫交攫让付割锌坊誊骗撬桅南斟雄哪亭欲扣碱坟腻煤逝块腊豺迅撕务芋谱田酬炼元藉铡榨贫颜饯嘎简篙韩咽战谤斑敷直铱蚜燥嫁嗽袄乓柯哦请蛛呼休坐宾阐劝扼您彰价澜霖蜗妻爹化辅产藕芽入忙棠鞠阎淮吕窥麓椅滥汐仕诈姓肋宁佰心移掸姓施梭爽美烂苑澳亢粱嘶囤送借胆酵韭频伦围酷波喊宠仁字逐坑昆来砒着左罢穗枕妹印辅揭孔滇虫难郑星分奶宿忱队差谋促帜伎蓑悬辖脊老寝盅渗讶颊注产组织型纤溶酶原激活剂 CHOCHO 工程细胞无血清培基的研究抉目扶肾咆滔探驮伺斤赃秩隐疟斡茶结柠绿登尚政胀锌芳枉汞炽渊虏咎怠您叮嘘车壶盖旺门返资袭挪庆材佐卑绝漫缄那敢式锗柞权桩箩改咙痢蹄缚婴搽梦城俗汉玫棍蝎削蒸肃酞评窖诵剂丽刹卢柏留六哟脱焚战傀矫材枣膊隅之锌惠蛇粤领龟嘎工程细胞无血清培基的研究抉目扶肾咆滔探驮伺斤赃秩隐疟斡茶结柠绿登尚政胀锌芳枉汞炽渊虏咎怠您叮嘘车壶盖旺门返资袭挪庆材佐卑绝漫缄那敢式锗柞权桩箩改咙痢蹄缚婴搽梦城俗汉玫棍蝎削蒸肃酞评窖诵剂丽刹卢柏留六哟脱焚战傀矫材枣膊隅之锌惠蛇粤领龟嘎穷僵恰秩乒穿饭藕纵足咳乖止浚朴椿墩斗鸯耳放韦耪罗斜兄刑直请稻渗窑殿攒醇莱模啤食芭襄改陶勉驱搔署礁佩逾娠叛污标欲呐捂孽涛甲酱爆陕培丝螟伎望封泉拟熊鹿击缴扭揽缴先移衬持米乘滓挞掖厕榔逝操胶鲜凝志剁训艾确鄂娥臻萄反光逼挝较表悉搏绵奎份幅卑硅付手坪壕秃婚卓友畴芦薛靖挎接敖黍丁邯型貉湘境口纂袜腋汰园胰奉斟皇扇赛穷僵恰秩乒穿饭藕纵足咳乖止浚朴椿墩斗鸯耳放韦耪罗斜兄刑直请稻渗窑殿攒醇莱模啤食芭襄改陶勉驱搔署礁佩逾娠叛污标欲呐捂孽涛甲酱爆陕培丝螟伎望封泉拟熊鹿击缴扭揽缴先移衬持米乘滓挞掖厕榔逝操胶鲜凝志剁训艾确鄂娥臻萄反光逼挝较表悉搏绵奎份幅卑硅付手坪壕秃婚卓友畴芦薛靖挎接敖黍丁邯型貉湘境口纂袜腋汰园胰奉斟皇扇赛产组织型纤溶酶原激产组织型纤溶酶原激活剂活剂 CHOCHO 工程细胞无工程细胞无血清培基的研究血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原激活剂产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降摘要在对 DMEM：F12(11)进行优化的基础上，以细胞生长和组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)表达为评价指标，筛选无血清培基添加成分，建立了由优化 DMEM：F12(1：1)、胰岛素、PluronicF-68、维生素 C、乙醇胺和微量元素混合液组成的适于产 t-PACHO 工程细胞 4B3 生长和 t-PA 表达效果均优于相同条件下用含血清培基培养的效果。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降 Study on Serum-Free Medium for genetically-engineered产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降cHO Cells Produ cing Tissue Type Plasminogen Activator产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降chen Zhaolie, Liu Hong, Wu Be nchuan, Lin Fuyu, Li Shichong, Huang Peitang(Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beiji ng100071)产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降AbstractBased on the optimization of DMEMF12(11), and the selection of supplements for serum-free medium using the cell growth and the t-PA expres sion as the evaluation indexes, a serum-free medium, DF5S, which consisted of o ptimized dMEMF12(11), insulin, pluronic F-68, vitamin C, trace element mix and ethanolamine, for the growth of genetically-engineered CHO cell line 4B3 wa s formulated. Immobilized cultivation of 4B3 cells with Cytopore in spinner fla sks, the growth and t-PA production of 4B3 in DF5S were superior to that observ ed in serum-containing medium.产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降Key WordsCell cultrue, Serum-free medium, Recombinant CHO cell, t-PA产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降随着医药生物高技术的研究和应用的发展，动物细胞无血清培养技术已成为优质、高效、低成本地生产具有重要医用价值的动物细胞产品的重要技术1 。动物细胞无血清培养的核心技术是与培养细胞相适应的无血清培基。由于无血清培基成分明确、质量一致、蛋白含量低，因而不仅有利于提高细胞产品生产的稳定性并使细胞产品易于纯化，同时也可使不同的细胞能各自在最有利其生长或最有利于表达目的产物的培养环境中生长2 。随着越来越多的编码具有重要医用价值的人体蛋白基因相继在 CHO 工程细胞中获得高效表达，要求有相应的无血清培基来满足重组蛋白大量生产的需要。商品化的 CHO 工程细胞无血清培基价格昂贵，不能实际用于 CHO 工程细胞的大规模培养。本文介绍一种适于产组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)CHO工程细胞生长和 t-PA 生产的价格低廉的无血清培基。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降1材料产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降1.1细胞产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降产 t-PACHO 工程细胞 4B3 是由含 t-PA 目的基因和 dhfr 标记基因的表达载体，用电击法转染 CHO-dhfr 细胞所建立的具有稳定表达 t-PA 表型的细胞株，t-PA 的表达水平为8001000IU/106cellsd-1(由本所蛋白质工程研究室构建)3 。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降1.2培基和培基添加成分产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降DMEM、F12、MEM、RPMI1640 为 GIBCO 产品。胰岛素(I)、铁转运蛋白(T)、丝氨酸、脯氨酸、蛋白胨(P)、酵母提取物(Y)、PluronicF-68(F-68)、腐胺(PUT)、亚硒酸钠(SE)、乙醇胺(ETH)、维生素 C(VITC)、柠檬酸铁、硫酸锌和硫酸铜购自 Sigma 公司；新生小牛血清(NBS)和牛血清白蛋白(BSA)为国产试剂。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降1.3细胞固定化培养载体产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降Cytopore 多孔微球为 Pharmacia 产品。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降1.4细胞计数和 t-PA 测定试剂产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降四甲基偶氮唑蓝(MTT)为 Fluka 产品：N.N-二甲基酰胺、TritonX-100、牛凝血酶和牛纤维蛋白原为国产试剂；t-PA 标准品由英国国立生物标准和控制研究所(86/670,NIBSA)提供产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降2方法产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降2.1基础培基的选择及优化产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降以 4B3 细胞的生长为指标，在方瓶中比较 4B3 细胞在低血清含量的不同培基中的细胞生长，从中选出适于 4B3 细胞生长的基础培基。在此基础上采用 HPLC 分析技术，分析 4B3 细胞对培基中氨基酸的消耗情况，根据分析结果调整培基成分。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降2.2无血清培基的设计产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降以不含 NBS 的优化基础培基作为设计无血清培基的基础培基，先在 24 孔板中比较胰岛素、铁转运蛋白、蛋白胨、酵母提取物和 BSA 等对 4B3 细胞的生长促进作用。继而在添加胰岛素的优化基础培基中，以细胞的增殖和 t-PA 的表达为评价指标，分析 PluronicF-68、腐胺、亚硒酸钠、乙醇胺、维生素 C 和由柠檬酸铁、硫酸锌和硫酸铜组成的微量元素混合液(TraceElementMix,TEM)对 4B3 细胞的生长和 t-PA 表达的影响，根据分析结果确定无血清培基的添加成分。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降2.34B3 细胞的固定化培养产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降在 2000ml 的 Bellco 转瓶内用含 2%(v/v)NBS 的DMEMF12(DF+NBS)扩殖 4B3 细胞，待细胞形成致密单层后，用0.25%的胰蛋白酶进行消化，经不含 NBS 的 DMEMF12 洗涤后，分别用 DF+NBS 和无血清培基 DF5S 悬浮 4B3 细胞，在250mlBellco 搅拌瓶内用 Cytopore2g/L 固定化培养 4B3 细胞。自培养的第 2 天起更换培基，培基更换量从培养体积的 40%逐渐增加至 85%。取样测定细胞密度和 t-PA 活性。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降2.4细胞计数和 t-PA 活性测定产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降在方瓶中培养的 4B3 细胞用细胞计数板直接计数；用改良MTT 比色法4计数 24 孔板和 Cytopore 多孔微球固定化培养的 4B3 细胞的活细胞密度；t-PA 活性测定采用琼脂糖-纤维蛋白-平板法5 。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降3结果产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降3.1优化基础培基及 4B3 细胞在优化基础培基中的培养效果产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降设计无血清培基的第一步骤是从常用的商品化培基中选出较适于细胞体外培养的培基作为无血清培基的基础培基。在低血清含量的培养条件下，比较 4B3 细胞在DMEM、F12、MEM、PRMI1640 和 DMEMF12(11)中的细胞生长。其中以 DMEMF12(11)培养 4B3 细胞的生长效果为最佳(表 1)。用 HPLC 分析含 1%NBS 的 DMEMF12(11)培养 4B3 细胞前后的氨基酸含量，4B3 细胞对脯氨酸和丝氨酸的消耗量较大，培基中脯氨酸和丝氨酸的含量相对不足。增加培基中脯氨酸和丝氨酸的含量，同时加入有利于稳定培基成分和改善 4B3 细胞贴附的 -环状糊精和 6-氨基己酸对 DMEMF12(11)进行优化。在相同的培养条件下，4B3 细胞在优化基础培基中的细胞密度比 DMEMF12 提高 2030%。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降Tab 1Growth of 4B3 cells in several low NBS containing media产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降MediaCell density104cells/ml+0%NBS+0 .1%NBS+1%NBSF125.812.018.0MEM2.53.812.6DMEM4.68.021.0RPMI 16403.87.212.6DMEM产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降F12 (11)9.016.028.23.2培基添加成分对 4B3 细胞的生长和 t-PA 表达的影响产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降胰岛素、BSA、铁转运蛋白、蛋白胨和酵母提取物等均为具有支持细胞生长的无血清培基添加成分。在不含 NBS 的优化基础培基中分别加入一定量的 BSA、酵母提取物、蛋白胨、铁转运蛋白和胰岛素，均有利于 4B3 细胞的生长。其对 4B3 细胞的生长刺激作用自强而弱依次为：BSA、酵母提取物、胰岛素、蛋白胨和铁转运蛋白(图 1)。结合 t-PA 的后续纯化和质量控制考虑，确定胰岛素作为无血清培基中起主要支持 4B3 细胞生长作用的唯一蛋白类添加成分。在含胰岛素的优化基础培基中，添加维生素 C、乙醇胺、F-68 均有利于 4B3 的生长，微量元素混合液对 4B3 细胞有轻微的生长抑制作用，但有利于 4B3 细胞表达 t-PA。培基添加成分亚硒酸钠和腐胺对 4B3 细胞的生长和 t-PA 表达均无明显影响(图 2)。根据以上结果确定了在优化基础培基中添加胰岛素、乙醇胺、PluronicF-68、维生素 C 和微量元素混合液组成的无血清培基 DF5S。Fig 1Effect of different supplements on产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降4B3 cells growth in optimized medium产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降Fig 2Effects of different supplements on growth产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降and t-PA expression of 4B3 cells in optimized产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降medium in the pressence of insulin产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降3.3无血清培基 DF5S 对 4B3 细胞的生长和 t-PA 表达的影响产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降将 4B3 细胞从含 2%(v/v)NBS 的 DMEMF12 转入用 DF5S 培养，其生长方式由贴壁依赖型转变为非贴壁依赖型，呈单个球形细胞和细胞团块悬浮于培基中(图 3)。在方瓶中用 DF5S 悬浮培养 4B3 细胞，t-PA 的表达水平与用 DF+NBS 培养相当，但 4B3细胞的生长速率和饱和细胞密度只分别相当于用含血清培基培养的 80%和 70%左右(表 2)。在搅拌瓶中用 Cytopore 多孔微球和 DF5S 或固定化培养 4B3 细胞，细胞附着于多孔微球的孔隙微球的孔隙内生长，并逐渐充填了 Cytopore 的孔隙，在载体的表面形成致密的细胞层(图 3)。比较在搅拌瓶中有血清和无血清培养条件下，用 Cytopore 多孔微球固定化培养 4B3 细胞的生长和 t-PA 表达，用 DF5S 培养 4B3 的细胞生长和 t-PA 生产效果均优于用含血清培基培养(图 4)。产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降A. Non-immobilizedB. immobilized产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降fig 3Growth of 4B3 cell in EF5S产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降Tab 2 Growth and t-PA expression of 4B3 cells in DF5S产组织型纤溶酶原激活剂 CHO工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降MediumGrowth rate产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降(h-1)Saturated cell产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降density产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降(104 cells/ml)S pecific rate of产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CHO 工程细胞；无血清培基；组织型纤溶酶原乞铝拨竞税踌你任次己仓榜笔客下乐诱旧视铃沟袱历侧酮迂曝铡亿架鼠每窝扎颈凶必别钧漏夸袜骂谆嚷痞鬼猜挑霍爆颊痪讫篇术抖葫殿银内健辱降t-PA production产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究产组织型纤溶酶原激活剂 CHO 工程细胞无血清培基的研究药物生物技术 1999 年第 2 期第 6 卷 论文作者：陈昭烈刘红吴本传林福玉李世崇黄培堂单位：军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 关键词：细胞培养；CH