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文档简介

任务二 大肠杆菌染色体DNA的提取 1 一 实验目的 1 掌握制备大肠杆菌染色体DNA的方法2 为PCR扩增目的基因的实验准备好模板 2 二 实验原理 大肠杆菌染色体DNA的制备首先收集对数生长期的细胞 然后用SDS破裂细胞 破细胞后 蛋白质经蛋白酶消化 酚 氯仿除去 最后用乙醇沉淀核酸 RNA经RNA酶消化除去 最终获得了染色体DNA 3 三 实验准备 1 菌株大肠杆菌DH5 2 仪器离心机3 器皿玻璃离心管 10mL 移液管 10mL 5mL 微量取样器 烧杯 玻璃棒 试管 三角瓶 4 4 试剂 1 LB完全肉汤培养液 1 胰蛋白胨 0 5 酵母粉 0 1 NaClpH7 4 2 SET溶液 20 蔗糖 50mmol LTris HCl pH7 6 50mmol LEDTA 3 20 SDS 4 酚 氯仿 5 乙醇 6 RNase溶液 7 蛋白酶K20mg ml 5 四 实验步骤 1 细胞收集 已培养好的菌液收集于10mL的离心管中8000rpm离心5min去上清 留沉淀菌体 6 2 细胞裂解 沉淀菌体加入溶菌酶液 8mg溶菌酶 1mLSET 加1mL20 SDS 使细胞裂解50 L20mg mL蛋白酶 混匀5000rpm离心10min 弃沉淀 7 3 DNA分离 取上清加等体积的酚 氯仿 混匀3500rpm离心10min取上清加入2倍体积的乙醇沉淀核酸3500rpm离心10min弃上清
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