现代分子生物学复习题

现现代代分分子子生生物物学学 一一 填填空空题题 1 DNA 的物理图谱是 DNA 分子的 限制性内切酶酶解 片段的排列顺序 2 核酶按底物可划分为 自体催化 异体催化 两种类型 3 原核生物中有三种起始因子分别是IF 1 IF 2 和 IF 3 4 蛋白质的跨膜需要 信号肽 的引导 蛋白伴侣的作用是 辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质 5 真核生物启动子中的元件通常可以分为两种 核心启动子元件 和上游启动子元件 6 分子生物学的研究内容主要包含 结构分子生物学 基因表达与调控 DNA 重组技术 三部分 7 证明 DNA 是遗传物质的两个关键性实验是 肺炎球菌感染小鼠 T2 噬菌体感染大肠杆菌 这两 个实验中主要的论点证据是 生物体吸收的外源 DNA 改变了其遗传潜能 8 hnRNA 与 mRNA 之间的差别主要有两点 hnRNA 在转变为 mRNA 的过程中经过剪接 mRNA 的 5 末端被加上一个 m7pGppp 帽子 在 mRNA3 末端多了一个多聚腺苷酸 polyA 尾 巴 9 蛋白质多亚基形式的优点是 亚基对 DNA 的利用来说是一种经济的方法 可以减少蛋白质合成 过程中随机的错误对蛋白质活性的影响 活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭 10 质粒 DNA 具有三种不同的构型分别是 SC 构型 oc 构型 L 构型 在电泳中最前面 的是 SC 构型 11 哺乳类 RNA 聚合酶 启动子中常见的元件 TATA GC CAAT 所对应的反式作用蛋白因子分别是 TFIID SP 1 和 CTF NF1 12 与 DNA 结合的转录因子大多以二聚体形式起作用 转录因子与DNA 结合的功能域常见有以下 几种 螺旋 转角 螺旋 锌指模体 碱性 亮氨酸拉链模体 13 转基因动物常用的方法有 逆转录病毒感染法 DNA 显微注射法 胚胎干细胞法 14 RNA 聚合酶 的基本转录因子有 TF A TF B TFII D TF E 他们的结合顺序是 D A B E 其中 TFII D 的功能是 与 TATA 盒结合 15 酵母 DNA 按摩尔计含有 32 8 的 T 则 A 为 32 8 G 为 17 2 和 C 为 17 2 16 操纵子包括 调控基因 调控蛋白结合位点 和结构基因 17 DNA 合成仪合成 DNA 片段时 用的原料是 模板 DNA TAQ 引物 缓冲液 dNTP 18 在琼脂糖电泳中 DNA 会向 正 极移动 19 染色体包括 蛋白质 染色体两大部分 20 环状 DNA 双链的复制主要可分为 形 滚环形 D 环形三种类型 21 转录的基本过程包括 转录的起始 延伸 终止 22 半乳糖对细菌有双重作用 一方面 可以作为碳源供细胞生长 另一方面 它又是细胞壁的成 分 所以需要一个不依赖于cAMP CRP 的启动子 S2 进行本底水平的永久型合成 同时需要一 个依赖于 cAMP CRP 的启动子 S1 对高水平合成进行调节 有G 时转录从 S2 开始 无 G 时 转录从 S1 开始 23 DNA 重组技术也称为 基因克隆 或分子克隆 最终目的是 把一个生物体中的遗传信息DNA 转入 另一个生物体 典型的 DNA 重组实验通常包含以下几个步骤 提取供体生物的目的基因 或称外源基因 酶接连接到另一 DNA 分子上克隆载体 形成一个 新的重组 DNA 分子 将这个重组 DNA 分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存 这个过程称为转化 对那些吸收了重组 DNA 的受体细胞进行筛选和鉴定 对含有重组 DNA 的细胞进行大量培养 检测外援基因是否表达 24 质粒的复制类型有两种 受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为严紧型质粒 不受宿主 细胞蛋白质合成的严格控制称为 松弛型质粒 25 PCR 的基本反应过程包括 变性 退火 延伸 三个阶段 PCR 的反应体系要具有以下条件 a 被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA 引物约 20 个碱基左右 b 具有热稳定性的酶如 TagDNA 聚合酶 c dNTP d 作为模板的目的 DNA 序列 26 哺乳类 RNA 聚合酶 启动子中常见的元件 TATA GC CAAT 所对应的反式作用蛋白因子分别是 TFIID SP 1 和 CTF NF1 27 RNA 聚合酶 的基本转录因子有 TF A TF B TFII D TF E 他们的结合顺序是 D A B E 其中 TFII D 的功能是 与 TATA 盒结合 二二 名名词词解解释释 质质粒粒 是染色体外能够进行自主复制的遗传单位 包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体 以外的脱氧核糖核酸 DNA 分子 现在习惯上用来专指细菌 酵母菌和放线菌等生物中染色体 以外的 DNA 分子 在基因工程中质粒常被用做基因的载体 启启动动子子 是 DNA 分子可以与 RNA 聚合酶特异结合的部位 也就是使转录开始的部位 在基因表 达的调控中 转录的起始是个关键 常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过 程 信信号号肽肽 在蛋白质合成过程中 N 端有 15 36 个氨基酸残基的肽段 引导蛋白质的跨膜 核核受受体体 细胞内受体分布于胞浆或核内 本质上都是配体调控的转录因子 均在核内启动信号 转导并影响基因转录 统称核受体 h hn nR RN NA A 核不均一 RNA 即 mRNA 的前体 经过 5 加帽和 3 酶切加多聚 A 再经过 RNA 的 剪接 将外显子连接成开放阅读框 通过核孔进入细胞质就可以作为蛋白质合成的模板了 分分子子杂杂交交 互补的核苷酸序列通过 Walson Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分 子的过程称为杂交 杂交过程是高度特异性的 可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的 靶序列检测 基基因因组组文文库库 将某种生物的基因组 DNA 切割成一定大小的片段 并与合适的载体重组后导入 宿主细胞 进行克隆 这些存在于所有重组体内的基因组DNA 片段的集合 即基因组文库 它包含了该生物的所有基因 密密码码的的简简并并性性 由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为密码的简并性 衰衰减减子子 在色氨酸操纵子中 当 mRNA 合成起始以后 除非培养基中完全没有色氨酸 否则 转录总是在长 162bp 的前导区终止 产生一个仅有140 个核苷酸的 RNA 分子 终止 trp 基 因转录 因为转录终止发生在这一区域 并且这种终止是被调节的 这个区域被称为衰减子 D DN NA A 拓拓扑扑异异构构酶酶 DNA 在细胞内往往以超螺旋状态存在 DNA 拓扑酶催化同一 DNA 分子不 同超螺旋状态之间的转变 DNA 拓扑异构酶有两类 大肠杆菌的 蛋白 MW 110000 就是一 种典型的拓扑异构酶 它的作用是暂时切断一条DNA 链 形成酶 DNA 共价中间物而使超螺 旋 DNA 松弛化 然后再将切断的单链DNA 连接起来 而不需要任何辅助因子 而大肠杆菌中 的 DNA 旋转酶 DNAgyrase 则的典型的拓扑异构酶 能将负超螺旋引入 DNA 分子 该酶能 暂时性地切断和重新连接双链DNA 同时需要 ATP 水解为 ADP 以供能 基基因因表表达达 遗传信息从 DNA 到 RNA 再到蛋白质的过程 前前导导肽肽 分析色氨酸操纵子前导肽的序列发现 它包括起始密码子AUG 和终止密码子 UGA 如果翻译起始于 AUG 应该产生一个 14 个氨基酸的多肽 这个假设的多肽被称为前导 肽 实际上还没有观察到 启启动动子子 启动子是 DNA 分子可以与 RNA 聚合酶特异结合的部位 也就是使转录开始的部位 在基因表达的调控中 转录的起始是个关键 常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动 子起始过程 D DN NA A 分分子子克克隆隆技技术术 也称基因克隆技术 在体外将 DNA 分子片段与载体 DNA 片段连接 转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA 分子克隆 或基因克隆 其基本步骤包括 制备目的基 因 将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接 制成DNA 重组 导入宿主细胞 筛选 鉴 定 扩增和表达 载体 vecors 在细胞内自我复制 并带动重组的分子片段共同增殖 从而 产生大量的 DNA 分子片段 主要目的是获得某一基因或NDA 片段的大量拷贝 有了这些与亲 本分子完全相同的分子克隆 就可以深入分析基因的结构与功能 随着引入的DNA 片段不同 有两种 DNA 库 一种是基因组文库 genomic library 另一种是 cDNA 库 G G 蛋蛋白白 受体与配体结合后即与膜上的偶联蛋白结合 使其释放活性因子 再与效应器发生反 应 位于受体与效应器之间的则是偶联蛋白 目前所知的偶联蛋白种类较多 都属于结构和功 能极为类似的一个家族 由于它们都能结合并水解GTP 所以通常称 G 蛋白 即鸟苷酸调节 蛋白 guanine nucleotide regulatory protein 受受体体型型酪酪氨氨酸酸激激酶酶 蛋白酪氨酸激酶 protein tyrosine kinase PTK 是一组催化酪氨酸 残基磷酸化的酶 他们通过从三磷酸腺苷上转移一个磷原子到酪氨酸残基上 而使底物蛋白活 化 目前 已发现 PTK 有 100 多个家族成员 他们通过活化底物蛋白 参与细胞的信号转导 最终 这些信号转导入细胞核内 引起某些基因表达水平的改变 使诸如细胞生长之类的复杂 的细胞功能得以调节 因此在调节细胞的分化 生长和激活中起到重要作用 根据 PTK 的结 构 可分为受体型和非受体型PTK 两大类 前者又称跨膜 PTK 后者又称细胞内 PTK 生长 因子受体 PTK 受体型酪氨酸激酶或 RTK 这一类蛋白酪氨酸激酶为跨膜蛋白 其胞外部分为 配体结合区 中间有跨膜区 胞内部分含有蛋白酪氨酸激酶的催化结构域 根据他们的结构 不同可分为 表皮生长因子受体 EGFR 家族 胰岛素受体家族 血小板衍生生长因子 PDGF 受 体家族和成纤维细胞生长因子受体 FGFR 家族 c cD DN NA A 与与 c cc cc cD DN NA A cDNA 是由 mRNA 通过反转录酶合成的双链DNA cccDNA 是游离于染色体之 外的质粒双链闭合环形 DNA C CA AP P 环腺苷酸 cAMP 受体蛋白 CRP cAMP receptor protein cAMP 与 CRP 结合后所 形成的复合物称激活蛋白CAP cAMP activated protein 回回文文序序列列 DNA 片段上的一段所具有的反向互补序列 常是限制性酶切位点 m mi ic cR RN NA A 互补干扰 RNA 或称反义 RNA 与 mRNA 序列互补 可抑制 mRNA 的翻译 核核酶酶 具有催化活性的 RNA 在 RNA 的剪接加工过程中起到自我催化的作用 信信号号肽肽 在蛋白质合成过程中 N 端有 15 36 个氨基酸残基的肽段 引导蛋白质的跨膜 弱弱化化子子 在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列 上上游游启启动动子子元元件件 是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA 序列 10 区的 TATA 35 区的 TGACA 及增强子 弱化子等 D DN NA A 探探针针 是带有标记的一段已知序列DNA 用以检测未知序列 筛选目的基因等方面广泛 应用 S SD D 序序列列 是核糖体与 mRNA 结合序列 对翻译起到调控作用 单单克克隆隆抗抗体体 只针对单一抗原决定簇起作用的抗体 顺顺式式作作用用元元件件 在 DNA 中一段特殊的碱基序列 对基因的表达起到调控作用的基因元件 K Kl le en no ow w 酶酶 DNA 聚合酶 I 大片段 只是从 DNA 聚合酶 I 全酶中去除了 5 3 外切酶活性 R RN NA A 编编辑辑 R RN NA A e ed di it ti in ng g 是某些 RNA 特别是 mRMA 的一种加工方式 它导致了DNA 所编码的 遗传信息的改变 是因为经过编辑的mRNA 序列发生了不同于模板DNA 的变化 反反密密码码子子 tRNA 上能与密码子以碱基互补方式配对的对应碱基 一般具有 摆动性 转转座座子子 t tr ra an ns sp po os so on n 是存在于染色体 DNA 上可自主复制和位移的基本单位 基基因因 g ge en ne e 产生一条多肽链或功能 RNA 所必须的全部核苷酸序列 基基因因族族 g ge en ne e c cl lu us st te er r 真核生物中许多相关的基因常按功能成套组合 被称为基因家族 同一家族的成员有时紧密的排列在一起 成为基因簇 C C 值值 C C v va al lu ue e 通常是指一种生物单倍体基因组DNA 的总量 内内含含子子 i in nt tr ro on n 指基因组中的非编码序列 锌锌指指 z zi in nc c f fi in ng ge er r 属于反式作用因子 其特有的半胱氨酸和组氨酸之间氨基酸残基数 基本恒定 有锌参与才具备转录调控活性 转转座座子子 t tr ra an ns sp po os so on n 是存在于染色体 DNA 上可自主复制和位移的基本单位 基基因因家家族族 g ge en ne e f fa am mi il ly y 真核生物中许多相关的基因常按功能成套组合 被称为基因家族 模模体体 蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 魔魔斑斑 当细菌生长过程中 遇到氨基酸全面缺乏时 细菌将会产生一个应急反应 停止全部基 因的表达 产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸 ppGpp 和鸟苷五磷酸 pppGpp PpGpp 与 pppGpp 的作用不只是一个或几个操纵子 而是影响一大批 所以称他们是超级调控 子或称为魔斑 蓝蓝 白白斑斑筛筛选选 含 LacZ 基因 编码 半乳糖苷酶 该酶能分解生色底物X gal 5 溴 4 氯 3 吲哚 D 半乳糖苷 产生蓝色 从而使菌株变蓝 当外源DNA 插入后 LacZ 基因不能表 达 菌株呈白色 以此来筛选重组细菌 称之为蓝 白斑筛选 锚锚定定 P PC CR R 用于扩增已知一端序列的目的DNA 在未知序列一端加上一段多聚dG 的尾巴 然后分别用多聚 dC 和已知的序列作为引物进行PCR 扩增 三三 选选择择题题 1 DNA 双螺旋结构模型的描述中哪一条不正确 C A 腺嘌呤的克分子数等于胸腺嘧啶的克分子数 B 同种生物体不同组织中的 DNA 碱基组成极为相似 C DNA 双螺旋中碱基对位于外侧 D 二股多核苷酸链通过 A T C T 之间的氢键连接 E 维持双螺旋稳定的主要因素是氢键和碱基堆集力 2 有关 DNA 的变性哪条正确 B A 变性是分子中磷酸二酯键的断裂 B 变性后紫外吸收增加 C 变性后粘度增加 D 热变性 DNA 速冷后可复性 E DNA 分子开始变性的温度叫 Tm 3 DNA 聚合酶 III 的描述中哪条不对 B A 需要四种三磷酸脱氧核苷酸作底物 B 具有 5 3 外切酶活性 C 具有 3 5 外切酶活性 D 具有 5 3 聚合活性 E 聚合反应需要引物 4 有关反转录的正确叙述 B A 反转录反应不需要引物 B 反转录后的产物是 cDNA C 反转录的板可以是 RNA 也可以是 DNA D 合成链的方向是 3 5 E 反转录反应的底物是 4 种 NTP 5 有关蛋白质合成 下列哪条是错误的 C A 基本原料是 20 种氨基酸 B 直接模板是 mRNA C 合成的方向是从羧基端到氨基础 D 是一个多因子参加的耗能过程 E 是多聚核蛋白体循环 6 在乳糖操纵子中 阻遏蛋白结合的是 A A 操纵基因 B 调节基因 C 启动基因 D 结构基因 E 终止基因 7 氨基酸活化酶 C A 能识别一组同功 tRNA B 催化磷酸二酯键的形成 C 催化氨基酸结合到 tRNA D 催化氨基酸的氨基与 tRNA 结合 E 催化氨基酸的羧基与 GTP 反应 8 稀有核苷酸含量最高的核酸是 A A tRNA B mRNA C rRNA D DNA E hnRNA 9 真核与原核细胞蛋白质合成的相同点是 E A 翻译与转录偶联进行 B 模板都是多顺反子 C 转录后的产物都需要进行加工修饰 D 甲酰蛋氨酸是第一个氨基酸 E 都需要 GTP 10 与 pCAGCT 互补的 DNA 序列是 A A pAGCTG B pGTCGA C pGUCGA D pAGCUG E pTCGAC 11 色氨酸操纵子的调控需要 C A 增强子 B 转录子 C 衰减子 D 顺反子 E 调节子 12 下列哪种氨基酸的密码子可作为起始密码 A A 甲硫氨酸 B S 腺苷蛋氨酸 C 苯丙氨酸 D 丙氨酸 E 以上都不是 而是 TAG 13 真核细胞中 mRNA 的加工修饰不包括 B A 在 mRNA3 末端另 polyA 尾 B mRNA 的前体是核内 hnRNA C 在 mRNA5 端形成 7 甲基尿苷酸帽子结构 D 除去非结构信息部分 E 不同 RNA 片断之间的拼接 14 真核生物基因组中没有 C A 内含子 B 外显子 C 转录因子 D 插入序列 E 高度重复序列 15 DNA 的半保留复制需要 A A 核心酶和单链 DNA 结合蛋白 B 模板 DNA 和四种 NTP C 引物和 RNA 聚合酶 D DNA 引物和连接酶 E 冈崎片段和终止因子 16 PCR 实验的特异性主要取决于 C A DNA 聚合酶的种类 B 反应体系中模板 DNA 的量 C 引物序列的结构和长度 D 四种 dNTP 的浓度 E 循环周期的次数 17 RNA 电泳转移后与探针杂交叫作 B A Southernblot B Northernblot C Westernblot D 斑点杂交 E 原位杂交 18 对限制性核酸内切酶的作用 下列哪个不正确 E A 识别序列长度一般为 4 6bp B 识别序列具有回文结构 C 切割原核生物 D 分子 D 只能识别和切割双链 DNA 分子 E 只能识别和切割原核生物 DNA 分子 19 在基因工程实验中 DNA 重组体是指 C A 不同来源的的两段 DNA 单链的复性 B 目的基因与载体的连接物 C 不同来原的 DNA 分子的连接物 D 原核 DNA 与真核 DNA 的连接物 E 两个不同的结构基因形成的连接物 20 对基因工程载体的描述 下列哪个不正确 D A 都可以转入宿主细胞 B 都有限制性核酸内切酶的识别位点 C 都可以连接进目的基因 D 都是环状双链 DNA 分子 E 都有筛选标志 21 有关 DNA 链的描述哪条不对 B A DNA 是由很多脱氧单核苷酸形成的多核苷酸 B DNA5 端是 OH 基 3 端是磷酸 C DNA 一级结构的书写为 P pACTGAC D 单核苷酸之间通过磷酸二酯键相连 E DNA 的一级结构是指 dAMP dGMP dCMP dTMP 的排列 22 有关 DNA 变性的描述哪条对 C A DNA 变性时粘度增加 B 变性时磷酸二酯键断裂 C DNA 变性温度的中点叫 Tm D DNA 变性时紫外吸收增加 E DNA 变性时 280nm 波长吸收增加 23 DNA 聚合酶催化的反应 D A 催化四种单核苷酸的聚合 B 需要 DNA 做引物 C DNA 聚合酶有种属特异性 D 产物 DNA 的性质取决于模板 与 DNA 聚合酶来源无关 E 沿着 3 5 方向合成 24 自然界中以 DNA 为遗传物质的大多数生物DNA 的复制方式 C A 环式 B D 环式 C 半保留 D 全保留 E 散布式 25 真核细胞 mRNA 的加互修饰不包括 A A 除去非结构信息部分 B 在 mRNA 的 3 末端加 polyA 尾巴 C 经过较多的甲基化过程 D 在 mRNA 的 5 末端形成帽子结构 E mRNA 由核内不均一 RNA 转变而来 26 下列哪种氨基酸的密码子可作为起始密码子 C A 苯丙氨酸 B 酪氨酸 C 甲硫氨酸 D S 腺苷蛋氨酸 E 以上均不是 而是 TAG 27 翻译的起始不需要 E A Met tRNA B mRNA 模板 C 核蛋白体 D 起始因子 E dGTP 28 下面哪些因素可防止 DNA 上的一个点突变表现在蛋白质的一级结构 E A DNA 的修复作用 B 密码的简并性 C 校正 tRNA 的作用 D 核糖体对 mRNA 的校正 E 以上都正确 29 关于氨基酰 tRNA 合成酶 哪项不正确 E A 有 20 种 对应于 20 种氨基酸 B 可使酶识别 tRNA 和氨基酸 C 有 及 或 亚基 D 疏基酶 E 借次级键与相应的氨基酸结合 30 真核基因调控中最重要的环节是 B A 基因重排 B 基因转录 C DNA 的甲基化与去甲基化 D mRNA 的半衰期 E 翻译速度 四四 判判断断题题 1 增强子的作用具有细胞或组织的特异性 没有细胞或组织的特异性 2 原核生物中封闭性启动子复合物为二元复合物 开放性启动子复合物为三元复合物 3 半保留复制是指有 50 的基因是新合成的 另 50 的基因是上一代的 半保留复制指的是复制时只能以一条链为模板 复制出新链 后代与前代有相同的遗传信息 4 基因组 DNA 复制时 先导链的引物是DNA 后随链的引物是 RNA 都是 RNA 5 对正调控和负调控操纵子而言 诱导物都能促进基因的转录 6 由于密码子存在摇摆性 使得一种tRNA 分子常常能够识别一种以上同一种氨基酸的密码子 由于反密码子具有摇摆性而不是密码子 是由于密码子具有简并性 7 半保留复制是指有 50 的基因是新合成的 另 50 的基因是上一代的 半保留复制指的是复制时只能以一条链为模板 复制出新链 后代与前代有相同的遗传信息 8 凝胶的分辨能力同凝胶的类型和浓度有关 浓度越低 分辨力越强 浓度越低 分辨力越弱 9 色氨酸操纵子中含有弱化子序列 色氨酸操纵子的转录调控除了阻遏系统外 还有弱化子系统 10 蛋白质由二十种氨基酸组成 包括胱氨酸 不包括胱氨酸 蛋白质中的胱氨酸是蛋白质合成后通过个半胱氨酸的氧化作用形成的 五五 简简答答题题 1 1 简简述述乳乳糖糖操操纵纵子子的的正正负负调调控控机机制制 答 包括正负调控两种 阻遏蛋白的负调控 当细胞内有诱导物时 诱导物结合阻遏蛋白 此刻聚合酶与启动子形成开放式启动子复合物转录乳糖操纵子结构基因 当无诱导物时 阻 遏蛋白结合与启动子与蛋白质部分重叠不转录 CAP 正调控 当细胞内缺少葡萄糖时 ATP CAMP 结合 CRP 生成 CAP 与 CAP 位点结合 增前 RNA 聚合酶转录活性 当有葡萄糖存在 时 CAMP 分解多合成少 CAP 不与启动子上的 CAP 位点结合 RNA 聚合酶不与操纵区结合无法起始 转录结构基因表达下降 2 2 简简述述转转录录的的基基本本过过程程 答 转录的基本过程包括 模板的识别 转录起始 通过启动子 转录的延伸和终止 要求叙述各过程设计到的因子 3 3 简简述述原原核核和和真真核核细细胞胞在在蛋蛋白白质质翻翻译译过过程程中中的的差差异异 答 1 起始因子不同 2 翻译过程 肽链延伸 因子不同 3 终止因子不同 要求详述 其差异 4 4 试试比比较较原原核核和和真真核核细细胞胞的的m mR RN NA A 的的异异同同 答 真核生物 5 端有帽子结构大部分成熟没mRNA 还同时具有 3 多聚 A 尾巴 原核一般 没有 原核的没 mRNA 可以编码几个多肽真核只能编码一个 原核生物以 AUG 作为起始密 码有时以 GUG UUG 作为起始密码 真核几乎永远以AUG 作为起始密码 原核生物 mRNA 半衰 期短 真核长 原核生物以多顺反子的形式存在 真核以单顺反子形式存在 5 5 原原核核生生物物与与真真核核生生物物启启动动子子的的主主要要差差别别 答 原核生物 真核生物 TTGACA TATAAT 起始位点 增强子 GC CAAT TATAA 5mGpp 起始位点 35 10 110 70 25 6 6 利利用用双双脱脱氧氧末末端端终终止止法法 S Sa an ng ge er r 法法 测测定定 D DN NA A 一一级级结结构构的的原原理理与与方方法法 答 原理是 采用核苷酸链终止剂 2 3 双脱氧核苷酸终止 DNA 的延长 由于它缺少形 成 3 5 磷酸二脂键所需要的 3 OH 一旦参入到 DNA 链中 此 DNA 链就不能进一步延长 根据碱 基配对原则 每当 DNA 聚合酶需要 dNMP 参入到正常延长的 DNA 链中时 就有两种可能性 一是 参入 ddNTP 结果导致脱氧核苷酸链延长的终止 二是参入dNTP 使 DNA 链仍可继续延长 直至 参入下一个 ddNTP 根据这一方法 就可得到一组以ddNTP 结尾的长短不一的 DNA 片段 方法是 分成四组分别为ddAMP ddGMP ddCMP ddTMP 反应后 聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带 可读出 DNA 序列 7 7 图图示示大大肠肠杆杆菌菌复复制制叉叉的的结结构构并并标标明明各各组组分分结结构构 答 DNA 解旋酶 DNA 旋转酶 DNA 单链结合蛋白 RNA 引物 DNA 连接酶 DNA 聚合酶 其它 成分 图略 8 8 简简述述遗遗传传密密码码的的性性质质 答 简并性 通用性 特殊性 9 9 激激活活蛋蛋白白 C CA AP P 对对转转录录的的正正调调控控作作用用 答 环腺苷酸 cAMP 受体蛋白 CRP cAMP receptor protein cAMP 与 CRP 结合后所形成 的复合物称激活蛋白 CAP cAMPactivated protein 当大肠杆菌生长在缺乏葡萄糖的培养基 中时 CAP 合成量增加 CAP 具有激活乳糖 Lac 等启动子的功能 一些依赖于CRP 的启动子 缺乏一般启动子所具有的典型的 35 区序列特征 TTGACA 因此 RNA 聚合酶难以与其结合 CAP 的存在 功能 能显著提高酶与启动子结合常数 主要表现以下二方面 CAP 通过改变启动子的构象以及与酶的相互作用帮助酶分子正确定向 以便与 10 区结合 起 到取代 35 区功能的作用 CAP 还能抑制 RNA 聚合酶与 DNA 中其它位点的结合 从而提高与其特定启动子结合的概率 1 10 0 典典型型的的 D DN NA A 重重组组实实验验通通常常包包括括哪哪些些步步骤骤 答 a 提取供体生物的目的基因 或称外源基因 酶接连接到另一DNA 分子上 克隆载 体 形成一个新的重组DNA 分子 b 将这个重组 DNA 分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存 这个过程称为转化 c 对那些吸收了重组 DNA 的受体细胞进行筛选和鉴定 d 对含有重组 DNA 的细胞进行大量培养 检测外援基因是否表达 1 11 1 分分别别说说出出 5 5 种种以以上上 R RN NA A 的的功功能能 答 转运 RNA tRNA 转运氨基酸 核蛋白体 RNA rRNA 核蛋白体组成成 信使 RNA mRNA 蛋白质合成模板 不均一核 RNA hnRNA 成熟 mRNA 的前体 小核 RNA snRNA 参与 hnRNA 的剪接 小胞浆 RNA scRNA 7SL RNA 蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分 反义 RNA anRNA micRNA 对基因的表达起调节作用 核 酶 Ribozyme RNA 有酶活性的 RNA 1 12 2 对对天天然然质质粒粒的的人人工工构构建建主主要要表表现现在在哪哪些些方方面面 答 天然质粒往往存在着缺陷 因而不适合用作基因工程的载体 必须对之进行改造构建 a 加入合适的选择标记基因 如两个以上 易于用作选择 通常是抗生素基因 b 增加或减少合适的酶切位点 便于重组 c 缩短长度 切去不必要的片段 提高导入效率 增加装载量 d 改变复制子 变严紧为松弛 变少拷贝为多拷贝 1 13 3 简简述述 t tR RN NA A 的的二二级级结结构构特特征征并并指指明明作作用用与与作作用用机机制制 答案要点 其结构见朱玉贤教材p109 a tRNA 携带 AA 是一种酶促反应 也称AA 的活化 b 氨基酰是 tRNA 是 AA 参与蛋白合成的活化形式 AA 的活化 氨基酸 ATP E 氨基酸 AMP E PPi c 每活化一分子 AA 需消耗 ATP 的 2 个高能磷酸键 AA 的转移 氨基酸 AMP E tRNA 氨基 酸 tRNA AMP E d 氨基酰 tRNA 合成酶是高度专一性 既能高度特异性识别AA 又能高度特异性识别相应 这两 点是保证翻译准确进行的基本条件之一 e 氨基酰 AMP E 复合体 作为中间产物 利于酶分别对AA 和 tRNA 两种底物特异辨认 如有错配 合成酶有校正活性 水解磷酸酯键 与正确底物结合 1 14 4 基基因因文文库库的的构构建建对对重重组组子子的的筛筛选选举举出出3 3 种种方方法法并并简简述述过过程程 答 抗生素抗性筛选 抗性的插入失活 兰 白斑筛选 或 PCR 筛选 差式筛选 DNA 探针 多数克隆载体均带有抗生素抗性基因 抗氨苄青霉素 四环素 当质粒转入大肠杆菌中后 该菌 便获得抗性 没有转入的不具有抗性 但不能区分是否已重组 在含有两个抗性基因的载体中 如果外源DNA 片段插入其中一个基因并导致该基因失活 就可用 两个分别含不同药物的平板对照筛选阳性重组子 如 pUC 质粒含 LacZ 基因 编码 半乳糖苷 酶 该酶能分解生色底物X gal 5 溴 4 氯 3 吲哚 D 半乳糖苷 产生蓝色 从而使菌株变蓝 当外源 DNA 插入后 LacZ 基因不能表达 菌株呈白色 以此来筛选重组细菌 六六 论论述述题题 1 1 D DN NA A 与与蛋蛋白白质质相相互互作作用用研研究究方方法法及及其其原原理理 答 1 凝胶阻滞实验 2 DNaseI 足迹实验 原理参见朱玉贤高教 二 版 现代分子生物学 教材 166 170 页 2 2 试试述述真真核核生生物物基基因因表表达达调调控控的的一一般般规规律律 答 分为两大类 一 瞬时调控或称可逆调控 它相当于原核细胞对环境条件作出的反应 包 括某种底物或激素水平升降时 或细胞不同阶段中酶活性的调节 二 发育调控或称不可逆调控 是真核基因调控的精髓部分 它决定了真核细胞生长 分化 发育的全部进程 根据基因调控在同 一事件中发生的先后次序 又可将其分为转录水平 转录后水平调控 后者又进一步分为RNA 加工成熟过程调控 翻译水平调控和蛋白质加工水平的调控 3 3 细细胞胞内内第第二二信信使使包包括括哪哪些些物物质质 有有何何作作用用 答 生物细胞的信号分子从溶解性来看又可分为脂溶性和水溶性两类 脂溶性信号分子 如甾类 激素和甲状腺素 可直接穿膜进入靶细胞 与胞内受体结合形成激素 受体复合物 调节基因表 达 水溶性信号分子 如神经递质 细胞因子和水溶性激素 不能穿过靶细胞膜 只能与膜受体结 合 经信号转换机制 通过胞内信使 如cAMP 或激活膜受体的激酶活性 如受体酪氨酸激酶 引起细胞的应答反应 所以这类信号分子又称为第一信使 primary messenger 而 cAMP 这样的胞内信号分子被称为第二信使 secondary messenger 目前公认的第二信使有 cAMP cGMP 三磷酸肌醇 IP3 和二酰基甘油 DG Ca2 被称为第三信使是因为其释放有赖 于第二信使 第二信使的作用是对胞外信号起转换和放大的作用 4 4 在在转转录录与与翻翻译译过过程程中中 合合成成多多肽肽链链的的正正确确性性是是如如何何保保证证的的 答 从转录过程中保证 mRNA 的正确性因素 如 正确的起始 加上正确的碱基 正确的终止 位点的因子 转录后加工编辑 翻译过程中保证加上正确氨基酸的机制 翻译后加工等方面 5 5 比比较较原原