选修一 2-2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

选修一 2 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1 选择作用 选择作用 2 用稀释涂布平板法对微生物进行计数 用稀释涂布平板法对微生物进行计数 一 研究思路一 研究思路 1 筛选菌株筛选菌株 尿素是一种重要的农业 肥 但不能直接被农作物吸收利用 只有当土壤中的细菌将尿素分 解成 之后 才能被植物利用 土壤中的细菌之所以能分解尿素 是因为它们能合成 反应式为 1 实验室中微生物筛选的原理 人为提供有利于 生长的条件 包括营养 pH 等 同时 或 其他微生物生长 2 选择培养基 在微生物学中 将允许 的微生物生长 同时 或 其他种类 微生物生长的培养基 称做 思考 1 分解尿素的细菌的培养基配方中 为微 生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质 答 碳源 氮源 思考 2 此配方有什么特点 该培养基对微生物 是否有选择作用 如果有 是如何进行选择的 答 特点 3 选择培养基的类型 利用培养基的特定化学成分分离特定微生物 通过某些特殊环境分离微生物 通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的 依据某些微生物对某种物质的抗性 辨一辨 下列例子属于哪一种类型的选择培养基 当尿素是唯一氮源时 可抑制不能利用尿素的微生物生长 使能够利用尿素的微生物生存 从而分离出能分解尿素的微生物 利用培养基的 分离特定微生物 在高温环境中可分离得到耐高温的微生物 其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存 通过某些 分离微生物 培养基中若缺乏有机碳源 则异养微生物无法生存 而自养微生物可利用空气中的 CO2制造 有机物 通过改变培养基的 达到分离微生物的目的 在培养基中加入青霉素 可抑制细菌 放线菌的生长 从而分离得到酵母菌和霉菌 依据某些微生物对某种物质的 2 统计菌落数目统计菌落数目 1 常用来统计样品中活菌数目的方法是 即当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的 通过统计平板上的 就能推测出样品中大约含有多少活菌 为了保证结果准确 一般选择菌落数在 的平板进行计数 计算公式 该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数 这是因为当两个或多个细胞在一起时 平 板上观察到的只是 菌落 2 也是测定微生物数量的常用方法 3 如何统计菌落数 见探究案 3 设置对照设置对照 1 设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响 提高实验结果的 2 对照实验是指除了 的条件以外 其他条件都 的实验 其作用是比照 排除任何其他可能原因的干扰 证明确实是 的条件引起相应的结果 3 设置对照组的 4 种方法 空白对照 条件对照 自身对照和相互对照 了解 二 实验设计二 实验设计 实验设计包括对实验方案 所需仪器 材料 用具和药品 具体的 以及时间安排 等的综合考虑和安排 某土壤样品中细菌的分离与计数实验的操作步骤如下 1 土壤取样土壤取样 土壤中的微生物 70 90 是 绝大多数分布在距地表 的近 性的潮湿土 壤中 2 样品的稀释样品的稀释 样品的 将直接影响平板上生长的菌落数目 通常选用一定稀释范围的样品液进行 培养 以保证获得菌落数在 之间 适于计数的平板 测定土壤中细菌的数量 一般选 用 倍的稀释液进行平板培养 第一次实验时 可将稀释范围放宽一点 以保 证能从中选择出适于计数的平板 3 微生物的培养与观察微生物的培养与观察 不同种类的微生物 往往需要不同的培养 和培养 细菌一般在 的温 度下培养 1 2 d 放线菌一般在 25 28 的温度下培养 而霉菌一般在 的温 度下培养 3 4 d 每隔 统计一次菌落数目 选取 时的记录作为结果 以防止因 而导致遗漏菌落的数目 一般来说 在一定的培养条件下 相同的培养基 温度及培养时间 同种微生物表现出 菌落的特征包括菌落的 和 等方面 三 对分离得到的分解尿素的细菌的鉴定三 对分离得到的分解尿素的细菌的鉴定 1 检测检测 pH 的变化的变化 在细菌分解尿素的化学反应中 细菌合成的 将尿素分解成了 氨会使培养基的碱 性 pH 因此 可以通过检测培养基 的变化来判断该化学反应是否发生 2 利用指示剂利用指示剂 在以 为 氮源的培养基中加入 指示剂 培养某种细菌后 如果 pH 升高 指 示剂将变 说明该种细菌能够 探究案 探究 如何统计菌落数目 三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数 在对应稀释倍数为 106的培养 基中 得到以下三个结果 甲同学在该浓度下涂布了一个平板 统计的菌落数为 290 故细菌数为 2 9 109 乙同学在该浓度下涂布了一个平板和一个空白平板 统计的菌落数为 230 和 0 根据公式 计算得出细菌数为 2