梅毒的实验室诊断课.ppt

梅毒的实验室诊断 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒的实验室诊断 梅毒 Syphilis 是由苍白螺旋体 TreponemaPallidumTP 感染引起的一种慢性性传播疾病 本病表现复杂 病期长 几乎可侵犯全身各个器官 发展过程时隐时现 症状和体征呈多样化 自然感染过程 不治疗 可产生不同临床症状的一期 二期 三期梅毒 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 病原体 梅毒螺旋体特点1 小而细螺旋状 长6 14um 直径0 25 0 3um 有8 14规则 紧密螺旋 2 透明不容易着色 3 微需氧 1 3 人工培养不生长 4 繁殖方式为裂殖 5 对热敏感 骤冷超低温保存数年 复活后接种动物其毒性 活力 形态不变 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 致病机理 梅毒螺旋体 破损皮肤及粘膜感染 2 4周潜伏 感染局部螺旋体大量繁殖 硬下疳 经3 8周 症状自行消失 TP附近淋巴结 血液播散 全身组织和器官 二期梅毒 三期梅毒 心血管 神经等损害 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 传播途径 性传播 性接触是主要的传染途径未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 随着病期的延长 传染性越来越小 到感染后4年 通过性接触一般无传染性 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 传播途径 垂直传播 胎传在妊娠任何阶段 梅毒螺旋体均可通过胎盘传染 病期越长 传染性越小 早期梅毒的母亲 发生流产 死产 胎儿先天梅毒或新生儿死亡率高于晚期梅毒的母亲 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 传播途径 间接传播 污染物 输血 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 各期梅毒标本采集及检查方法 临床症状取材部位检查方法一期梅毒硬下疳 淋巴结暗视野检查血液血清学检查二期梅毒皮损 淋巴结暗视野检查血液血清学检查隐性梅毒血液血清学检查三期梅毒血液血清学检查神经梅毒血液 脑脊液血清学检查 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒实验室诊断方法 梅毒 病原体检查 血清学检查 暗视野检查法 镀银染色法 直接免疫荧光法 确证试验 FTA ABS TPHA TPPA TP ELISA TP RT19S IgM 初筛试验 VDRL USRRPR TRUST 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒实验室诊断方法 病原体 梅毒螺旋体 检查 一 暗视野检查二 直接荧光抗体检查三 涂片染色检查法 镀银染色 吉姆萨染色 墨汁负染色 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 病原体检查法 一 暗视野检查法原理 一期梅毒硬下疳 肿大淋巴结的淋巴液 二期梅毒皮肤粘膜损害 扁平疣 梅毒疹 梅毒孕妇羊水 7周 以上标本均有梅毒螺旋体存在 此时用暗视野显微镜检查能找到梅毒螺旋体 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 病原体检查法 检查方法1 皮损取材 在载玻片加一滴生理盐水 用棉拭子蘸取无菌生理盐水抹去皮损 硬下疳 溃疡 梅毒疹 扁平疣 表面污物 挤压皮损周围 用钝刀刮取组织液混入载玻片盐水中 加盖玻片后暗视野镜检 2 肿大淋巴结取材 酒精消毒淋巴结表面 用1ml无菌注射器配12号针头 吸取无菌生理盐水0 25 0 5ml 无菌操作穿刺淋巴结并注入盐水 再吸入注射器内 如此反复2 3次 取少量淋巴液于载玻片上 加盖玻片后暗视野镜检 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 病原体检查法 3 羊膜穿刺 梅毒孕妇的羊膜穿刺由专职人员操作 将取得的羊水直接滴于载玻片上加盖玻片暗视野镜检 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 病原体检查法 结果 暗视野镜检可观察到特征性的梅毒螺旋体 螺旋整齐 数目固定 8 14 白色透明折光性强 特征性运动方式 旋转运动 伸缩移行 弯曲前行 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 暗视野显微镜法直接镜检图像 1000 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 病原体检查法 临床意义 暗视野检查可作为梅毒诊断的确证试验 若发现有梅毒螺旋体 即可确诊为梅毒感染 此法特别适用于血清学试验阴性的早期梅毒诊断 尤其对早期有硬下疳 但梅毒血清反应尚未呈阳性者意义更大 3 暗视野检查是目前快速诊断先天性梅毒可靠的检查方法 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 非梅毒螺旋体血清试验 TRUST 注意事项 1 试剂保存 不能 以下冰冻 2 实验环境以23 29 为宜 用前试剂恢复室温 3 试剂在效期内使用 怀疑试剂失效 需用试剂阴 阳对照及已知阴 阳标本对照 4 用旋转式摇床 不能用平衡式振荡仪 5 试验要用纯血清 以防假阴性 6 血清加抗原后要充分混匀分开 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 非梅毒螺旋体血清试验 TRUST 7 试验完毕立即观察结果 否则影响结果准确性 8 定性阳性者 确诊治疗前应作定量试验 一是可以了解患者抗体滴度 便于复查作比较 以判断疗效和预后观察 二可以避免 前带现象 9 初筛试验阳性 应做确证试验以排除生物学假阳性 10 AIDS合并感染梅毒 梅毒血清可阴性 应作暗视野检查螺旋体 同时做HIV检查 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TPPA 一 TPPA 梅毒螺旋体明胶凝集试验 原理 TP Ag 明胶颗粒 Ab 血清 洋红色凝集 肉眼观察 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TPPA 方法 定性 定量试验 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TPPA 结果 定性试验2 4 颗粒凝集覆盖整个孔底 边缘粗糙呈膜状 1 颗粒凝集呈多边性粗糙大环状 颗粒浓集于孔底呈小环状 颗粒聚集于孔中央 边缘光滑呈小红点 定量试验出现阳性反应的最高稀释度作为最终滴度 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TPPA 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TPPA 临床意义 1 确证试验阳性可诊断梅毒感染 一种是现症感染者 另一种是治愈者 2 由于特异性梅毒螺旋体抗体可终生阳性 因此不能用来作为疗效观察及治愈的判断标准 一般只作定性试验 根据临床需要才做定量试验 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TPPA 注意事项 1 反应板要清洁干净 遐免假阳性 2 要用U形板不能用V形板 遐免假阴性 3 试剂保存 不能 以下冰冻 4 反应温度以18 30 为宜 用前试剂恢复至室温 5 试剂要在有效期内使用 不同批号不要混用 6 血清要分纯 不能混有血液有形成分 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TPPA 7 如未致敏颗粒出现凝集 应做吸收试验或改用其它方法 8 对于可疑阳性结果 1 80 建议作连续观察或暗视野检查 9 AIDS合并感染梅毒 血清学试验可阴性 应作暗视野检查螺旋体 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TPPA 方法学评价 优点 1 试剂稳定 批间差小2 结果判读清晰明确3 敏感性和特异性较TPHA进一步提高不足 结果判定主观 较难实现自动化 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 FTA ABS 二 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验 FTA ABS TP Ag TP Ab 灭活吸收后血清 37 x30分钟 TP Ag Ab PBS洗涤 TP Ag Ab IgG FITC 37 x30分钟 TP Ag Ab IgG FITC PBS洗涤 封片 荧光镜检 莱果绿色荧光 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM FTA ABSIgG抗体阳性 400 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM FTA ABSIgM抗体阳性 400 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 FTA ABS 方法学评价 FTA ABS是所有螺旋体试验中最敏感的方法 特异性也很高 被认为是检测梅毒的 金标准 且该试验可分开检测IgM和IgG 但由于该试验需有优质的荧光显微镜和技术熟练的操作人员才能得到准确的结果 故常不被临床实验室作为常规方法开展 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TP IgM 三 梅毒IgM抗体血清学检测临床应用 梅毒螺旋体感染人体 机体体液免疫系统最早产生的抗梅毒螺旋体特异性抗体是IgM 然后才是IgG IgM抗体滴度水平经治疗下降较快并可转阴性 一期梅毒3个月阴转率100 二期梅毒9个月阴转率100 早期潜伏期梅毒2年阴转率100 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TP IgM 因此 未经治疗患者IgM抗体阳性可能是活动性梅毒的表现 另外 由于IgM聚合体分子量较大 是IgG的5倍 不能通过某些屏障 因此对某些疑难病例的诊断具有重要意义 IgM检测主要应用于以下方面 2011 8 31 WWW ZHCCDC COM 梅毒螺旋体血清试验 TP IgM 先天性梅毒的诊断 IgM不能通过胎盘屏障 新生儿血清中IgM阳性 说明怀孕期间胎儿已被母体梅毒螺旋体感染而产生IgM抗体 早期梅毒诊断 IgM产生最早 理论上当其它血清试验阴性时 初筛试验 确证试验 IgG 可早期检测出IgM抗