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文档简介

1 目的目的 规范单克隆抗体标记荧光 APC 快速标记法 标准操作程序 2 适用范围适用范围 适用于本公司抗体标记荧光 APC 快速标记法 操作 3 术语和定义术语和定义 别藻蓝蛋白 allophycocyanin APC 由藻蓝胆素与蛋白质结合而成 APC 具有荧光性 伴随着非常高的光吸收和高量子效 率 4 职责和权限职责和权限 实验员负责实施本规范 主管负责人监督执行 5 实验试剂实验试剂 5 1 溶液配制溶液配制 0 01mol L PBS 溶液配制溶液配制 0 01 mol L Phosphate Buffered Saline pH 7 40 试剂名称试剂名称配方量配方量批号批号用量用量 Water1L NaCl MW 58 44 0 799g KH2PO4 MW 136 09 0 2g KCl MW 74 55 0 2g Na2HPO4 12H2O MW 358 14 2 89g 调节 pH 7 40 后 加水定容至 1 0L 再调节 pH 至 7 40 过滤备用 Storage Buffer pH 7 40 试剂名称试剂名称配方量配方量批号批号用量用量 0 01mol L PBS BSA0 5 NaN3 0 1 调节 pH 7 40 后 加水定容至 1 0L 再调节至 pH 7 40 5 2 其他试剂其他试剂 试剂名称试剂名称厂家厂家批号批号 活化液 modifier 淬灭剂 quencher APC 荧光素 6 操作流程操作流程 6 1 抗体活化抗体活化 将抗体用 0 01mol L PBS 稀释为 1mg mL 加入 mL 活化液 体积比为抗体溶液 反应活化液 10 1 旋涡振荡器混匀后 室温避光反应 10min 6 2 与与 APC 反应形成共轭物反应形成共轭物 将抗体混合液 步骤 6 1 加入 mg APC 荧光素中 加入量 抗体与荧光素质量比为 1 1 在室温条件下避光反应 3 小时 反应开始时间 至结束时间 或 2 8 度条件下避光过夜 6 3 荧光淬灭荧光淬灭 向共轭物 步骤 6 2 中加入 mL 淬灭剂 淬灭剂添加量按抗体体积 淬灭剂体积 10 1 添加 混匀后 室温孵育 30 分钟 去除游离的荧光素的荧光效应 淬灭开始时间 至结束时间 6 4 层析层析 将共轭物 步骤 6 3 层析柱分离 进一步去除游离的荧光素或抗体 6 5 保存保存 收集得到的标记抗体
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