筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选.ppt

2 2 2动物细胞融合与单克隆抗体 1 概念 动物细胞融合也称细胞杂交 是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程 一 动物细胞融合 2 原理 膜的流动性 一 动物细胞融合 3 结果 形成杂交细胞 杂交细胞 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞 4 诱导方法 聚乙二醇 PEG 灭活的病毒 电激等 5 过程 3 过程 细胞相互凝集 膜上蛋白质分子和脂质分子重新排布 细胞膜打开 细胞发生融合 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜的糖蛋白发生作用 使细胞相互凝集 6 优点 突破了有性杂交的局限 使远缘杂交成为可能 7 应用 用于研究细胞遗传 细胞免疫 肿瘤和生物新品种培养等的重要手段 最重要的用途 制备单克隆抗体 2 动植物细胞在结构上有何区别 这与它们杂交或融合过程有什么影响 3 植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些 离心 振动 电激等物理方法 PEG等化学方法 问题讨论 动物细胞无细胞壁 动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁 植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体 动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗 不能 只能得到杂交细胞 4 动物细胞融合能利用上述两类方法吗 还有其他方法吗 能 还可以利用灭活的病毒 生物方法 进行诱导 问题讨论 动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同 相同 都是细胞膜的流动性 问题讨论 6 为什么要用灭活的病毒 病毒一般对生物体是有伤害的 仙台病毒 物理或化学方法 丧失感染活性 保留融合活性 获得杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 8 植物 动物细胞融合的比较 抗体是由何种细胞产生的 2 抗体是如何产生的 二 单克隆抗体 一 获得抗体的传统方法 1 方法 向动物体内反复注射某种抗原 使动物产生抗体 从动物血清中分离所需抗体 2 缺点 产量少 纯度低 特异性差 3 解决问题的设想 免疫反应过程中 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 克隆单一的B淋巴细胞 形成细胞群 获得大量的单一抗体 4 面临的新问题 一个B淋巴细胞不可能在体外培养条件下无限增殖的 1 如何获得化学性质单一 特异性强的抗体 问题讨论 提示 1 什么样的细胞可以产生抗体 2 什么样的细胞可以无限增殖 2 瘤细胞和癌细胞有何区别 共同点 两者都有无限增殖的能力不同点 瘤细胞不能转移 1 设计方案 一个B淋巴细胞 只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞 能无限增殖 杂种细胞 二 单克隆抗体的制备 2 单克隆抗体制备过程 细胞融合 筛选 足够数量的 能产生特定抗体的细胞群 单克隆抗体 选择性培养基 诱导其融合的方法有哪些 单克隆抗体的制备 单克隆抗体的制备 BBBB瘤瘤瘤瘤 细胞融合后培养液中有几种细胞 思考 杂交瘤细胞 制备过程中应用哪些细胞工程技术手段 细胞融合技术 细胞培养技术 3 单克隆抗体的概念 化学性质单一 特异性强的抗体 4 单克隆抗体的优点 特异性强 灵敏度高 并可大量制备 诊断疾病 识别作用 如同位素标记单克隆抗体 可诊断肿瘤 心血管畸形等 三 单克隆抗体的应用 优点 准确 高效 简易 快速 用于治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗 也可运载药物 如 生物导弹 导向作用 作为载体 生物导弹 单克隆抗体 药物 用于治疗肿瘤 位置准确 疗效高 副作用小 小结 两个过程 动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程 三个 一 一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒 一个新细胞 杂交瘤细胞 一个优势 单克隆抗体特异性强 灵敏度高的优势 单克隆抗体 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法 设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案 制备单克隆抗体 B细胞 抗体 细胞融合 灭活病毒 双亲细胞 分泌抗体 无限增殖 原代 传代 50 世界上第一只克隆羊 多莉 的培育过程如图所示 请据图回答 乙 甲 a b c d e f 1 图中的甲为苏格兰绵羊 乙为多莉羊 那么 a和b是通过 分裂形成的 其DNA含量是体细胞的 c肯定是 细胞 乙的遗传性状与提供 的绵羊一致 减数 一半 体 细胞核 乙 甲 a b c d e f 2 产生甲和乙的过程分别是 和 3 在形成乙是的过程中 需要将d的细胞核取出 将c细胞核移入d细胞内 此技术叫 所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是 4 绵羊的白色对黑色为显色 若甲是白色绵羊 要判断它是否纯合体 选用与它交配的绵羊最好是 有性生殖 克隆 核移植 卵细胞大 易于操作 卵细胞具有继续分化的潜能 黑毛 乙 甲 a b c d e f 5 在产生多莉羊时 需将e细胞形成的早期胚胎移入另一头母羊 f 子宫里 这种技术在细胞工程中叫 6 继植物组织培养后 克隆绵羊的培育成