氧氟沙星葡萄糖注射液的无菌检查进行方法学验证

10 3 6 1 试验目的 对氧氟沙星葡萄糖注射液的无菌检查进行方法学验证及对供试品进行 无菌检查 10 3 6 2 试验仪器及药品 10 3 6 2 1 试验仪器 HT 1300 超净工作台 苏净集团苏州安泰空气技术有限公司 生化培养箱 广东医疗器械厂 HTY 智能集菌器 杭州高得医疗器械有限公司 KSF 集菌培养器 杭州高得医疗器械有限公司 10 3 6 2 2 供试品和试剂 10 3 6 2 2 1 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基 用于好氧菌和厌氧菌 改良马丁培养基 用于真菌 改良马丁琼脂培养基 营养肉汤培养基 均由中国生物制品检定所提供 10 3 6 2 2 2 菌种 均由中国生物制品检定所提供 菌种名称 菌株编号 对应培养基 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus CMCC 26 003 硫乙醇酸盐流体培养基 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa CMCC 10 104 硫乙醇酸盐流体培养基 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis CMCC 63 501 硫乙醇酸盐流体培养基 生孢梭菌 Clostridium sporogenes CMCC 64 961 硫乙醇酸盐流体培养基 白色念珠菌 Candida albicans CMCC F 98 001 改良马丁培养基 黑曲霉菌 Aspergillus niger CMCC F 98 003 改良马丁培养基 10 3 6 2 2 3 供试品 氧氟沙星葡萄糖注射液 本公司自制 规格 100ml 0 2g 批号 0502011 0502021 0502031 10 3 6 2 2 4 稀释液 冲洗液及溶解液的制备 0 1 蛋白胨水溶液 取蛋白胨 1 0g 加水 1000ml 微温溶解 滤清 调节 pH 值至 7 1 0 2 分装 灭菌 0 9 无菌氯化钠注射液 取 0 9 氯化钠注射液 500ml 瓶 1 瓶 灭菌保存 10 3 6 3 培养基的系统适用性检查 10 3 6 3 1 无菌性检查 每批培养基随机取 6 瓶 在各自条件下培养 14 天 逐日观察 结果均无好氧菌 厌氧菌 和真菌生长 符合无菌要求 10 3 6 3 2 灵敏度检查 10 3 6 3 2 1 菌液制备 10 3 6 3 2 1 1 接种金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养 肉汤培养基中 33 0 5 培养 18h 用 0 9 无菌氯化钠溶液稀释成 1 103 1 104 1 105 1 106 1 107 再分别取 1ml 于培养基中 在 33 0 5 生化培养箱培养 48h 计数 选择 1ml 含菌数少于 100cfu 菌落形成单位 的菌悬液 10 3 6 3 2 1 2 接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中 33 0 5 培养 24h 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中 26 0 5 培养 48h 上述培养 物用 0 9 无菌氯化钠溶液稀释成 1 103 1 104 1 105 1 106 1 107 再分别 取 1ml 于培养基中 分别在 33 0 5 生化培养箱 48 h 和 26 0 5 生化培养箱培养 72h 计数 选择 1ml 含菌数少于 100cfu 菌落形成单位 的菌悬液 10 3 6 3 2 1 3 接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁培养琼脂斜面培养基上 26 0 5 培养 7 天 加入 5ml0 9 无菌氯化钠溶液 将孢子洗脱 然后吸出孢子悬液至无菌试管 中 用 0 9 的无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子数小于 100cfu 菌落形成单位 的孢子 悬液 10 3 6 3 2 2 培养基接种 在无菌条件下 依照 中国药典 2005 年版二部附录 H 无 菌检查法项下具体步骤操作 细菌培养 3 天 真菌培养 5 天 逐日观察 结果见下表 培养基的灵敏度试验结果 培养基 菌种 培养天数 结果 乙醇酸盐流体培养基 12ml 支 金黄色葡萄球菌 3 生长良好 3 生长良好 铜绿假单胞菌 3 生长良好 3 生长良好 枯草芽孢杆菌 3 生长良好 3 生长良好 生孢梭菌 3 生长良好 3 生长良好 空白对照 3 无菌生长 改良马丁培养基 9ml 支 白色念珠菌 5 生长良好 5 生长良好 黑曲霉菌 5 生长良好 5 生长良好 空白对照 5 无菌生长 结果表明 培养基的灵敏度符合规定 10 3 6 4 方法验证试验 10 3 6 4 1 菌液制备 同灵敏度试验试验项下菌液制备 10 3 6 4 2 方法及结果 检查方法 用 15ml0 1 蛋白胨水溶液润湿滤膜 然后取氧氟沙星葡萄糖注射液 30 支 通过集菌培养器的滤器过滤 均分在 6 个滤器中 每个滤器再用 0 1 蛋白胨水溶液 100ml 次冲洗 共 5 次 在最后一次的冲洗液中分别加入小于 100cfu 的试验菌 过滤 根据试验菌的要求将硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基加入滤筒内 另取一装有 同体积培养基的容器 加入等量试验菌 作为对照组 按规定培养 3 天 各批样品同法 操作 结果见下表 菌种 批号 出现微生物生长的最长时间 天 供试品组 阳性对照组 金黄色葡萄球菌 0502011 2 0502021 2 0502031 2 铜绿假单胞菌 0502011 2 0502021 2 0502031 2 枯草芽孢杆菌 0502011 2 0502021 2 0502031 2 生孢梭菌 0502011 2 0502021 2 0502031 2 白色念珠菌 0502011 3 0502021 3 0502031 3 黑曲霉菌 0502011 3 0502021 3 0502031 3 结果表明 各验证菌在含供试品的培养基中生长良好 且同一微生物在含供试品的培养 基中与在阳性对照中的生长时间没有明显的差异 说明该供试品的该检验量在该检验条 件下无明显抑菌作用 即本法适用于供试品的无菌检查 10 3 6 5 供试品无菌检查 10 3 6 5 1 试验方法 同验证方法 但观察时间为 14 天 供试品组 氧氟沙星葡萄糖注射液 10 支 阳性对照组 氧氟沙星葡萄糖注射液 5 支 金黄色葡萄球菌 小于 100cfu 阴性对照组 1 硫乙醇酸盐流体培养基 除供试品用等量 0 1 蛋白胨水溶液取代外 其余相同 阴性对照组 2 改良马丁培养基 除供试品用等量 0 1 蛋白胨水溶液取代外 其余相 同 各批样品同法操作 10 3 6 5 2 结果 培养基 批号 样品管 菌生长情况 硫乙醇酸盐流体培养基 0502011 供试品管 无菌生长 阳性对照管 菌生长良好 0502021 供试品管 无菌生长 阳