肌酸磷酸激酶同功酶(CK-MB) DGKC速率法

项 目肌酸磷酸激酶同功酶 肌酸磷酸激酶同功酶 CK MB 方 法DGKC 速率法速率法 目目 录录 1 检测原理 2 标本采集与处理 2 1 受检者的准备 2 2 静脉采血 2 3 抗凝剂 2 4 标本处理 3 试剂 3 1 试剂 3 2 校准血清 3 3 试剂 校准血清的稳定性 4 仪器 5 操作 6 计算 7 操作性能 7 1 精密度 7 2 准确度 7 3 灵敏度 7 4 可报告范围 7 5 特异性 7 6 干扰 8 参考值 9 临床意义 附录 A 参数 1 检测原理检测原理 试剂中加入抑制 CK M 的抗体 它能完全抑制 CK M 亚基的活性而不影响 CK B 亚基的活性 所得结 果乘以 2 即得 CK MB 的活性 CK 肌酸磷酸 ADP 肌酸 ATP HK ATP 葡萄糖 葡萄糖 6 磷酸 ADP G6PDH 葡萄糖 6 磷酸 NADP 6 磷酸葡萄糖酸 H NADPH 2 本采集与处理 本采集与处理 2 1 受检者的准备 受检者的准备 病人空腹 12h 不饮酒 24h 后采集血样 体检对象抽血前应有两周的的正常状况 孕妇应在产后或终 止哺乳 3 个月后检验 此外 有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录 2 2 静脉采血 静脉采血 除非是卧床的病人 一般在采血时取坐位 体位影响水分在血管内外的分布 会影响测试项目的浓度 在采血前至少应静坐 5 分钟 一般从肘静脉取血 使用止血带的时间不超过 1 分钟 穿刺成功后立即松 开止血带 2 3 抗凝剂 抗凝剂 血浆使用肝素或 EDTANa2 1mg mL 作为抗凝剂 2 4 标本处理 标本处理 血标本室温放置 30min 45min 后离心分离血清或血浆 在两小时内检测完毕 如两小时内不能检测 完毕 将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖 2 8 保存 3 试剂 试剂 3 1 试剂 试剂 本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司 CK MB 试剂盒 为液体双试剂 各组分如下 组 成 R1 R2 4 1 混合后溶液的浓度 咪唑缓冲液 100mmol L PH 6 7 醋酸镁10mmoll L N 乙烯半胱氨酸 NAC 20mmol L EDTA 2mmol L NADP 2mmol L 葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 G 6 PDH 1500U L 己糖激酶 HK 2500U L 抑制 CK MM 的人抗体 2000U L 葡萄糖20mmol L 肌酸磷酸30mmol L 二腺苷 5 磷酸 10umol L AMP 5mmol L ADP 2mmol L 3 2 校准血清 校准血清 使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的 CKMB 校准血清 校准频次 校准频次 空白定标 每日需做试剂空白定标 全点定标 试剂换批号使用时或质控结果超过规定的 2SD 范围 需要全点定标 3 3 试剂 校准血清的稳定性 试剂 校准血清的稳定性 原包装试剂储存在 2 8 至标签所示失效日期 18 22 稳定 28 天 试剂应避免污染 当试剂空白吸光度高于 0 5 时 试剂按照失效处理 CKMB 校准血清在 2 8 储存至标签所示失效日期 复溶后 20 保存 可稳定一个月 只可冻融一 次 避免反复冻融 参见校准血清说明书 4 仪器 仪器 KONELAB 30 型号仪器 性能 波长 340nm 仪器测定吸光度的灵敏度应达到 0 001ABS 以上 5 操作 操作 样品为血清或肝素 EDTA 抗凝血浆 本法为速率法 参数见后附 附录 A 试剂参数设置 定标操作以及样本检测常规操作 见仪器操作规程 6 计算 计算 A min Vt 1000 CK MB U L A min F e Vs d 式中 A min 每分钟吸光度变化率 e 18 5 摩尔吸光系数 Vt 反应液总体积 ml d 1 比色杯光径 cm 1000 变化因数 Vs 标本体积 ml 7 操作性能 操作性能 7 1 精密度 精密度 批内 CV 0 55 批间 CV 4 51 7 2 准确度 准确度 检测结果的相对不准确度 10 7 3 灵敏度 灵敏度 肌酸磷酸激酶同功酶浓度为 500U L 时 吸光度变化率 A340nm min 为 0 054 0 066 7 4 可报告范围 可报告范围 血清与试剂用量之比为 1 25 时 测定上限为 1000U L 7 5 特异性 特异性 测量值在给定值的 90 110 范围内 7 6 干扰 干扰 内源性干扰物溶血为 1000mg ml 脂血 2000mg ml 黄疸 30mg ml 抗坏血酸 300mg ml 对测试结 果无明显影响 8 参考值 参考值 0 24U L 9 临床意义 临床意义 肌酸激酶同工酶在诊断急性心肌梗塞时有特异性 结合心肌酶图谱 有助于心肌梗塞的诊断 在急性 心肌梗塞胸痛发作后 血清 CPK MB 上升 24 小时达高峰 至 48 小时消失 若 CPK MB 再度上升 提示有心肌梗塞复发 血清 CK MB 测定的最重要意义在于诊断急性心肌梗塞 急性心肌梗塞胸痛发作 后 4 6 小时 病人血清 CK MB 先于总活性开始升高 12 36 小时达峰值 多在 72 小时内恢复正常 其最高值达对照组 4 9 22 倍以上 如果梗塞后 3 4 天 CK MB 仍持续不降 表明心肌梗塞仍在继续进 行 如果已下降的 CK MB 再次升高则提示原梗塞部位病变扩展或有新的梗塞病灶 如果胸痛患者在 48 小时内尚未出现 CK MB 升高 或小于总活性的 2 即可排除急性心肌梗塞的诊断 临床上常以 CK MB 超过 CK 总活性的 3 离子交换柱层析法 或 10 免疫抑制法 作为急性心肌梗塞的诊断依据 用 C K MB 诊断急性心肌梗塞时必须注意无论是 CK MB 的绝对活性或占总活性百