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文档简介
生物多肽工艺流程生物多肽工艺流程 一 固相肽合成 1 投料 树脂加入固相合成仪 加入 DCM 溶胀 抽干后加入 DMF 洗涤 洗涤结束抽干备用 2 缩合 将氨基酸用一定体积的 DMF 溶解 加入缩合剂活化后投入固 相合成仪 补充 DMF 至反应浓度 搅拌反应 3 脱除保护基 以 Kaiser 试剂检测反应程度 反应结束后抽干溶剂 DMF 洗涤 加入 PIP DMF 溶液脱除保护基 以 Kaiser 试剂检测反应程度 反应完毕抽干溶剂 DMF 洗涤 准备加入下一个氨基酸 4 缩合循环 按照树脂序列依次连接氨基酸 按照 脱保护 洗涤 活化氨基酸 投料缩合 洗涤 步骤进行缩合循环操作 按照氨 基酸序列完成剩余 n 个氨基酸的缩合 5 出料 合成结束之后用 IPA 和 DCM 交叉洗涤树脂 完成树脂收缩收 缩 出料至不锈钢托盘 6 树脂干燥 树脂在真空干燥箱中室温干燥 干燥完毕称重 计算收 率 7 有机废液回收 集中处理 8 清场 操作结束后操作人员及时清场 二 树脂裂解 1 配液 按照裂解液成分比例配置裂解液 并提前置冰柜中冷藏保存 2 投料 肽树脂加入反应釜中 加入预冷的裂解液 搅拌反应 3 出料 裂解结束后放出反应液 抽滤除去树脂并以 TFA 洗涤 4 浓缩 裂解液转入旋转蒸发仪室温浓缩至小体积 5 析出 浓缩后的反应液倾入预冷的甲基叔丁基醚 简称醚 中 搅拌 使析出大量固体 6 离心 浊液离心 并用预冷的醚洗涤 7 粗肽干燥 涤完成的粗肽转至真空干燥箱中室温干燥 8 有机废液回收 集中处理 9 清场 操作结束后操作人员及时清场 三 多肽 HPLC 纯化 1 溶解 操作人员将粗肽溶解 调节 PH 至工艺规定范围 2 过滤 滤去粗肽溶液中不溶物 过滤 ACN 和纯化水 3 配制纯化液 根据工艺内容配制 A 相 乙腈 和 B 相 水 4 纯化 在制备型液相上进行纯化 分别接收流份 5 检验及返工 对制备流份进行检查 合并合格流份 其他部分根据 需要再次纯化 6 废弃流动相按有机废液回收 集中处理 四 浓缩过滤冻干 1 浓缩 合并滤液旋蒸除去有机溶剂 有机废液回收 集中处理 2 过滤 浓缩后水相无菌过滤 3 冻干 滤液置冻干机中 设定升温程序冻干 4 出箱 出料 加内包 五 质量检查 入库 工艺流程图如下所示 溶胀 去保护 氨基酸活化 偶联 树脂裂解沉淀多太粗品 离心 过滤 干燥 粗品检验合格 粗品溶解 HPLC纯化继续纯化流分 半成品 合并合格流分 HPLC转盐 检验 按多肽序列重复直至连接完成 以此三步为一周期 树 脂 裂 解 固 相 肽 合 成 浓缩 过滤 冷冻干燥 包装 质量检查 旋旋转转蒸蒸发发 冷冷冻冻干干燥燥 封封口口机机 浓 缩 过 滤 冻 干
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