流式细胞仪的临床应用

流式细胞仪的应用,流式细胞仪的检测范围,检测范围：凡细胞内能进行荧光标记的成分或变化都可用流式细胞仪进行检测。,细胞结构,细胞功能, 2012 Mindray Confidential,3,生物学颗粒的概念,生物学颗粒包括大的免疫复合物、DNA、RNA、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细菌、霉菌、染色体、真核细胞、杂交细胞、聚集细胞、人工合成微球等。,流式细胞仪在生命科学领域的应用,制药工业药物筛选，疫苗研究,生物学研究遗传，生殖，微生物，细胞生物，毒理，分子生物,环境研究湖泊、海洋生态研究,临床研究血液，肿瘤，药理，免疫,农业畜牧业选种，育种,食品工业,主要项目：淋巴细胞亚群分析HLA-B27检测白血病免疫分型 急性白血病、慢性淋巴增生性疾病（CLD)/淋巴瘤造血干细胞分析 造血干细胞相对计数； 造血干细胞绝对计数；阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）诊断 CD55/CD59检测血小板相关分析 血小板计数、血小板免疫表型分析细胞周期与DNA倍体分析,流式细胞仪的临床应用, 2012 Mindray Confidential,6,一、淋巴细胞亚群分析, 2012 Mindray Confidential,7,白细胞分化抗原和CD分子,白细胞分化抗原（leukocyte differentiation antigen）：指血细胞在分化成熟为不同谱系、分化不同阶段及活化过程中，出现或消失的表面标记分子；,CD分子（cluster of differentiation ）：将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原，且其编码基因和表达的细胞种类都已被明确鉴定的分化抗原，统一编号命名称为CD分子，目前至少发现有350种；, 2012 Mindray Confidential,8,淋巴细胞亚群分析相关CD分子, 2012 Mindray Confidential,9,淋巴细胞分类,根据淋巴细胞功能，可将淋巴细胞分为：T淋巴细胞（CD3+），主要与细胞免疫应答相关；B淋巴细胞（CD3-CD19+），主要与体液免疫应答相关；NK淋巴细胞（CD3-CD16+CD56+），主要介导靶细胞的杀伤作用；,根据细胞表面抗原表达，可将T淋巴细胞分为：T辅助/诱导淋巴细胞（CD3 + CD4 + ）；T抑制/细胞毒淋巴细胞（ CD3 + CD8 + ）；（CD3 + CD4 + ） / （ CD3 + CD8 + ）比值，主要用于评价自身免疫功能状态 ；, 2012 Mindray Confidential,10,淋巴细胞亚群分析的临床应用,淋巴细胞亚群分析可以了解机体在不同条件下的免疫功能状态，主要包括细胞免疫功能和体液免疫功能。在临床上，主要用于对免疫系统造成明显干扰的相关疾病（如病毒感染、恶性肿瘤、自身免疫病、免疫缺陷病、器官移植和造血干细胞移植后的免疫功能监控等等）的辅助诊断，分析疾病的发病机理，监控疾病的病程进展，观测疗效及监测预后等等。, 2012 Mindray Confidential,11,淋巴细胞亚群分析在肿瘤内科中的应用, 2012 Mindray Confidential,12,淋巴细胞亚群分析在风湿免疫科中的应用, 2012 Mindray Confidential,13,淋巴细胞亚群分析在器官移植中的应用,急性排斥反应是器官移植的第一大障碍；动态观测受者淋巴细胞亚群变化特点，对判断急性排斥反应和估计移植后感染等预后具有重要意义；当CD4+ / CD8+比值持续升高且大于1.2时应当考虑排斥发生；当CD4+ / CD8+比值持续降低表明移植后出现感染；若CD4+ / CD8+比值小于0.2时，应立即停用免疫抑制剂；, 2012 Mindray Confidential,14,常见疾病的淋巴细胞亚群变化, 2012 Mindray Confidential,15,淋巴细胞亚群预期值,注：迈瑞TBNK试剂检测来源于北京年龄分布在1865岁之间的健康个体样本；, 2012 Mindray Confidential,16,二、HLA-B27检测, 2012 Mindray Confidential,17,血清阴性脊柱关节病,是一类具有以下共同特征的疾病：类风湿因子（RA）阴性；有家族聚集现象；皆可影响脊柱，都有不同程度的骶髂关节炎，也可影响外周关节，下肢关节多于上肢关节，且呈不对称性；与革兰氏阴性杆菌有一定相关性：强直性脊柱炎与肠道肺炎克雷白杆菌相关；Reiter综合征与沙眼衣原体、福氏痢疾杆菌相关；反应性关节炎与沙门杆菌、痢疾杆菌、耶尔森菌和HP相关；与HLA-B27表达不同程度相关；。, 2012 Mindray Confidential,18,HLA-B27相关的疾病, 2012 Mindray Confidential,19,强直性脊柱炎,强直性脊柱炎（AS）定义：一种慢性、进行性和炎性疾病，也是血清阴性脊柱关节病（SpA）中最具代表性的疾病。主要累计骶髂关节、脊柱、脊柱软组织及四肢关节，表现为椎间盘纤维环和纤维环结缔组织的骨化，椎间动关节和四肢关节滑膜的炎症和增生，严重者可失去劳动能力。,实验室检查： CRP升高血沉加快HLA-B27阳性内风湿因子阴性, 2012 Mindray Confidential,20,HLA-B27检测阳性可显著增加正确诊断AS的几率，阴性则为排除AS的诊断提供了有力的证据；,淋巴细胞HLA-B27检测在AS中的诊断价值, 2012 Mindray Confidential,21,HLA-B27的实验室检测,微量淋巴细胞毒实验（MLCT）酶联反应吸附实验（ELISA）引物特异性聚合酶联反应（PCR-SSP）流式细胞术（FCM）, 2012 Mindray Confidential,22,三、PNH检测, 2012 Mindray Confidential,23,PNH概述,阵发性睡眠性血红蛋白尿（Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria）：是一种获得性造血干细胞异常性疾病，临床主要表现为造血功能异常，慢性溶血性贫血，夜间血红蛋白尿等等；,细胞膜GPI锚链蛋白缺失；,流式细胞术已经取代Ham实验，蔗糖溶血实验等传统筛查实验，成为诊断PNH的“金标准”；, 2012 Mindray Confidential,24,PNH的流式诊断,正常人红细胞、粒细胞和血小板CD59/CD55表达完全阳性；, 2012 Mindray Confidential,25,四、细胞周期和DNA倍体分析, 2012 Mindray Confidential,26,细胞周期和DNA倍体分析与肿瘤诊断,DNA异倍体的出现是癌前病变发生癌变的一个重要标志；细胞的增殖能力的大小也可反映肿瘤的生物学特征；利用流式细胞仪进行细胞周期分析和DNA倍性分析