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实 验 五 病原性球菌,实验目的：,熟悉几种常见病原性球菌的形态染色特点。 掌握血浆凝固酶试验的原理、方法、意义。 掌握抗“0”试验的原理、方法及临床意义。,一、常见病原性球菌形态染色的观察（示教）（细菌的形态；革兰染色性；排列方式）二、血浆凝固酶试验（示教)三、抗“0”试验(操作),实验内容：,球菌革兰染色标本片 葡萄球菌培养物、兔血浆、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯、火柴、蜡笔 待测病人血清、抗“O”试剂（溶血素“O”、ASO胶乳）、反应板、搅拌棒,实验用品：,一、病原性球菌形态特征的观察,又称为化脓性球菌根据革兰染色性的不同可分成革兰阳性： 葡萄球菌 链球菌 肺炎链球菌革兰阴性： 脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌,革兰染色阳性球菌，葡萄串状排列无鞭毛，不形成芽胞，右上图：革兰染色 右下图：扫描电镜,形态与染色,葡萄球菌,革兰染色阳性球菌，呈链状排列 无鞭毛， 不形成芽胞， 右上图：革兰染色 右下图：扫描电镜,形态与染色,链球菌,形态与染色,肺炎链球菌,革兰染色阳性球菌，菌体呈矛头状，成双排列，宽端相对，尖端向外。无鞭毛不形成芽胞有毒株有荚膜,革兰染色阴性双球菌 呈肾形，成双排列 感染急性期 位于中性粒细胞内,形态与染色,奈瑟菌属,二、血浆凝固酶实验,血浆纤维蛋白原,纤维蛋白,血浆凝固酶,附着于细菌表面,玻片上形成凝块（结合型）试管中血浆发生凝固（游离型）,致病性葡萄球菌,原理,（1）取洁净玻片一张，玻片分为左右两区并做好标记，于一端加生理盐水一滴，另一端加兔血浆一滴。 （2）用接种环取金黄色葡萄球菌苔一环，在玻片一端生理盐水中研磨混匀，接种环灭菌后再取金黄色葡萄球菌苔一环，在另一端兔血浆中研磨均匀。 （3）立即观察结果。,血浆凝固酶实验方法（玻片法）,结果：细菌在生理盐水无凝集而在血浆中聚集成团块或无法混匀，为血浆凝固酶试验阳性,血浆凝固酶实验注意事项,血浆多挑几环（一滴的量）；菌落不能太多。要做阴性对照，有一部分葡萄球菌有自凝现象。最好用抗凝的兔血浆 ，兔血浆凝块结实，凝固速度快 ；兔血浆应放4冰箱保存。意义：血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标，致病性葡萄球菌为阳性。,链球菌溶血素,链球菌溶血素O（SLO）,链球菌溶血素S（SLS）,抗原性强，产生抗O抗体，该抗体在感染链球菌2-3周 至病后1年内可检出； 正常参考值：成人200IU/ml 阳性 无凝集出现 ASO200IU/ml 阴性注意事项： 1.试剂使用前先预置达室温，且要摇匀。 2.加试剂时，要保证液滴大小一致。 3.试剂盒贮存于2-10，切勿冰冻。,抗“O”试验意义,1.抗体滴度 200IU/ml以上，新近有可能反复感染过乙型溶血型链球菌2.作为风湿活动期、风湿性关节炎、风心病、急性肾小球肾炎的辅助诊断。,思考题,临床协助风湿热诊断常采用试验 ，活动性风湿热患者血清中该抗体一
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