胡承如何做好临床科学研究

如何做好临床科学研究,胡承 上海市糖尿病研究所上海市糖尿病重点实验室上海市糖尿病临床医学中心上海交通大学附属第六人民医院,科研的基本步骤,选 题,观察和实验,设 计,数据整理和分析,论文撰写投稿,选题的主要来源,阅读文献，发现的问题-了解本领域已知的知识-发现本领域未解决的问题从研究过程或临床实践中发现问题,问题一,如何通过检索掌握研究前沿方向,文献阅读,某一方面的研究以前都有什么人做过？结论是什么？同一研究领域是否用了不同的方法展开研究，哪种方法更合理？或者更普遍？现在人们对这方面的研究有什么最新进展和认识？同一研究领域的重点文献、最新文献和经典文献？同一研究领域的主要发表期刊是什么？,文献查阅十分重要！,三大检索数据库,EI,ISTP,SCI/SSCI,收录检索技巧及核心期刊投稿导引,全基因组关联研究（GWAS）,验证研究（独立的大样本量病例-对照人群）,在全基因组范围检测关联信号，计算各位点与疾病共同出现的概率2005年开始运用于复杂疾病的遗传学研究2007年第一次运用于2型糖尿病的遗传学研究，在Nature、Science连续发表5篇学术论文,大样本病例-对照人群,高通量SNP芯片检测,W,1. 输入关键词,2. 检索,利用Web of knowledge了解学科动态,3. 创建引文分析报告,利用Web of knowledge了解学科动态,按引用次数排名，重要文献,利用Web of knowledge了解学科动态,本课题组在这一领域论文,从2007年开始中国人2型糖尿病的GWAS及相关研究,2009,2010,2011,2012,DiabetologiaDiabetologiaPLOS ONE,PLOS ONEPLOS ONE参与JAMA,DiabetesClin Phar & Ther参与Nat Genet,Nat GenetDiabetesDiabetologia,DiabetesDiabetologia,2013,问题二,如何检索阅读相关的文献,阅读方式,每周（天/月）读固定的杂志,定期集中检索阅读,VS,阅读面,推荐阅读杂志（以糖尿病研究为例）：综合期刊：Nature、Science、Cell、NEJM、JAMA、Lancet、BMJ、PLOS Med等顶级专业期刊：Diabetes、Diabetologia、Diabetes Care、JCEM、 Cell Metabolism、Lancet Diabetes Endocrinology等密切相关生物学期刊：Nature子刊、Am J Hum Genet、PLOS Genet、Hum Genet、EJHG等相关医学期刊：Circulation、J Am Soc Nephrol、Hepatology等相关生物学期刊：PLOS Biol、JBC、Mol Cell、Genes Dev、Cell Res等,有效阅读文献,自己的结论,比较,（仅供参考）,不要漏了在线发表文件（尤其是顶级期刊）,Alerts,选好题后,思考研究的必要性、可行性,糖尿病易感性的种族异质性,Diabetes Care 1991, 15:252,有必要在不同种族中开展2型糖尿病遗传学研究,中国人群 vs 欧裔人群,中国人群,欧裔人群,相较欧裔人群，中国汉族人群在较低的肥胖程度下即可发生糖尿病，在增加相同体重的情况下发生2型糖尿病的几率更高。,中国汉族人群中心性肥胖更明显,中国汉族人群较早出现细胞功能衰竭,Torrns JI, et al. Diabetes Care, 2004,Yoon KH, et al. Lancet., 2006,Chan JC, et al. JAMA, 2009,Lear SA, et al. Am J Clin Nutr, 2007,Lee JW, et al. Diabetes Care, 2011,科研的基本步骤,选 题,观察和实验,设 计,数据整理和分析,论文撰写投稿,研究心得,合理的实验设计是成功的一半,人群研究设计方案,研究质量,难度,单中心,多中心,大样本,小样本,横断面,前瞻,精确指标,简易指标,计算样本量,生物统计学方法-Quanto （遗传研究）-SAS-PS: Power and Sample Size Calculation-其它 参考既往研究,没有充足的样本量. God bless U！,了解你的资源,3. 住院糖尿病患者N5000精细临床性状,Jia W, et al. Diabetologia (2007)Jia W, et al. NDT (2009),4. 药物治疗随访队列罗格列酮（n=105）瑞格列奈（n=104）单药治疗随访1年,可行性：完善的样本库及分析测试平台,严格的样本选取方案,住院病人数据库,流行病学数据库,Jia W, et al. Diabetologia (2007),对照组,病例组,严格的质控设计,基因型数据质控分析,确保数据的正确性、准确性,约1015%的成本用于保证数据的可靠性,SNP位点检出率（70%）,研究心得,注意利用精确临床数据从多角度进行挖掘,主要临床变量收集,对照组-身高、体重、腰围、臀围、血压等-OGTT空腹及2h血糖、胰岛素-计算HOMA-B、HOMA-IR，估算糖刺激后1相、2相胰岛素分泌病例组-部分患者中开展精氨酸试验，估算潜在的胰岛细胞功能,Stumvoll M, et al. Diabetes Care (2001),Yasuda K et al and Unoki et al. Nature Genetics (2008),第一个关于T2D的东亚人群GWAS日本人群 2008.8,KCNQ1与2型糖尿病相关性的发现,例子,Hu C, et al. Diabetologia (2009),: adjusted for age, gender and BMI under an additive genetic model,各SNP与2型糖尿病的关系,CC,CT,TT,CC,CT,TT,p=0.0471,p=0.0156,0,0,50,100,150,200,250,50,100,150,Time (min),Time (min),Insulin levels,C-peptide levels,Acute insulin response,Acute C-peptide response,风险等位基因C与糖尿病患者细胞功能相关,Hu C, et al. Diabetologia (2009),KCNQ1与糖尿病患者细胞功能相关,结合既有工作基础发现新的科学问题,RBP4研究,例1,血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）与腹内脂肪及胰岛素抵抗相关,Jia et al. JCEM, 2007,中心法则：DNA - RNA -Protein,Hu C et al. Diabetic Medicine, 2008,RBP4基因上的SNP通过影响基因转录，引起个体间血清RBP4的浓度差异，参与2型糖尿病的发生,?,KCNQ1与瑞格列奈疗效与2hPG改善的相关性,例2,KCNQ1基因变异是否影响口服降糖药物疗效（促泌剂）,现有工作基础KCNQ1可能通过影响胰岛素分泌参与2型糖尿病发病Hu C et al. Diabetologia, 2009,Yu W et al. Clin Pharmacol Ther, 2011,临床现象不同患者对口服降糖药物的反应存在较大差异,rs2237892,Plog-rank=0.0383,KCNQ1与瑞格列奈疗效,与2hPG改善的相关性,W Yu, Hu C, et al. Clin Pharmacol Ther (2011),研究心得,结合以往研究深入剖析研究结果,小样本初步发现KCNQ1与BMI相关,入选人群（年龄19）,上海地区（n=6668）,T2D（n=3259）,NGT（n=3409）,T2D（n=5962）,NGT （n=644）,BMI、腰围、腰臀比其它临床指标,香港地区（n=6606）,KCNQ1与BMI相关性研究,例子,rs2237892,Yu W, et al. Diabetologia 2012,KCNQ1与肥胖的相关性,研究心得,注意科学成果的时效性,Yasuda K et al and Unoki et al. Nature Genetics (2008),第一个关于T2D的东亚人群GWAS日本人群 2008.8,KCNQ1与2型糖尿病相关性的发现,例子,2008年8月日本人GWAS结果在线发表 (Nature Genetics) 2008年11月 完成实验 2008年12月投稿 2009年3月在线发表 2009年7月正式发表 Hu C et al. Diabetologia. 2009 (IF= 6.973),KCNQ1与中国人群T2DM相关性,论文引用次数,动作慢的教训,血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）与腹内脂肪及胰岛素抵抗相关,研究心得,重视不同独立样本对初期结果的验证,假阳性害人害己,假阳性-样本选择、测试分析、统计分析、概率验证试验结果能-提高学术价值-对本人负责-对同行负责,一个错误的结论可能将后续研究引入歧途，浪费大量人力、财力！,总样本量：30,000病例 VS 60,000对照累计10余个人群独立验证,中国人群2型糖尿病GWAS研究设计,Ma RC, Hu C, et al. Diabetologia, 2013, 56:12911305,定位了中国人2型糖尿病新的易感基因PAX4，该基因参与胰腺发育，其效应在东亚人群中一致,发现PAX4基因是2型糖尿病的易感基因,检测4个基因区域55个SNP,Stage 2,验证样本,检测前期发现与糖尿病微血管病变最相关的SNP,Hu CJia W. Diabetes, 2011 60(11):3085-9,中国人2型糖尿病微血管病变遗传学研究设计,CPVL/CHN2位点与糖尿病视网膜病变,1.0,1.2,1.4,1.6,DN+DR vs DN,Odds ratio,DR vs control,CPVL/CHN2 rs39059,FRMD3 rs10868025,1.0,1.2,1.4,1.6,CPVL/CHN2 rs39059与糖尿病视网膜病变相关,209 例 DR vs 381例 无DR, Over 5y T2DM,未见到4个区域与糖尿病肾病的相关性,Hu CJia W. Diabetes, 2011 60(11):3085-9,研究心得,不要忽视阴性结果,失败是成功之母,假阴性结果-试验设计（e.g. 统计学效力不足）-分析测试 （e.g. 分析方法不可靠）-数据分析 （e.g. 统计学方法选择错误）-真实的阴性结果-对既有认识/结果的否定,正确认识假阴性结果是成功的前提,具有科学价值,1892例T2DM患者，1808例对照DUSP12/ATF6区域19个SNP（98%覆盖率）,结果：DUSP12-ATF6基因多态性与中国人群T2DM无显著相关性,提示：DUSP12-ATF6并非T2DM致病基因,Hu C et al. BMC Med Genet, 2011