襄阳市规模化蛋鸡场细菌性混合感染的诊治.doc

襄阳市规模化蛋鸡场细菌性混合感染的诊治 陕西农业科学襄阳市规模化蛋鸡场细菌性混合感染的诊治周华林。 熊江林。 (1襄阳职业技术学院生物工程学院，湖北襄阳441050；2鄂西北畜禽疾病诊断中心，湖北襄樊441021；3浙江大学动物科学学院，浙江杭州310058)摘要在湖北省襄阳市12家规模化蛋鸡场采集48只典型病鸡，经细菌分离鉴定为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合感染。 应用纸片扩散法对两种细菌混合液进行药敏试验，结果表明强力霉素在11家受检鸡场高度敏感，丁胺卡那、粘杆菌素、乙酰甲喹、庆大霉素和恩诺沙星分别在 10、 9、 9、8和6家受检鸡场高度敏感。 将筛选的高度敏感药物通过饮水、拌料和肌肉注射三种途径给药，结果显示三种给药途径的治疗效率分别为9O、8O和95。 结论本地区规模化鸡场呈现混合细菌感染，不同药物敏感性差异较大，且给药途径对药物疗效存在影响。 关键词蛋鸡；细菌；混合感染xx年8月5日到9月27日，湖北省襄阳市12家规模化蛋鸡场发生金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合感染，病死率高，对本地区蛋鸡生产业造成重大损失。 实验室采集典型病死蛋鸡进行细菌分离和药敏试验，筛选出高度敏感性药物，应用于发病鸡场保健治疗，约10d左右时间即控制疫情。 1临床及病理剖检综合各养殖户主诉，主要临床表现发病蛋鸡场每天死亡率为8961296，产蛋率由发病初的95，经10日后降至75。 发病蛋鸡临床表现精神极度萎顿，食欲废绝，拉绿色稀便，有的张口伸颈呼吸，发出呼噜噜的喘鸣声。 使用各种土霉素、阿莫西林等多种抗生素拌料，并未明显改善群体病情。 本中心对发病的12家规模化蛋鸡场，采集48只病死鸡，每场4只。 病鸡解剖病理表现部分鸡只卵黄破裂坠人腹腔，形成卵黄性腹膜炎；部分鸡只卵巢呈黄绿色坏死，输卵管断裂，卵巢萎缩；部分鸡只输卵管内存在一个完整的鸡蛋，将鸡蛋取出打碎，蛋黄溶解，蛋白呈绿色恶臭，脾脏充血肿大，其它组织无肉眼可见病变。 采集活鸡的食管和泄殖腔棉拭纸，分别进行新城疫和禽流感RTPCR诊断(北京世纪元亨动物防疫技术有限公司提供)，结果显示均为阴性，检测结果反映这12家蛋鸡场新城疫、禽流感疫苗免疫效果较好，与本地区两种疫苗整体免疫水平报道2细菌分离及鉴定21细菌分离纯化无菌采集卵黄，脾脏，气管黏液及肝脏等病料。 在生物安全柜中，使用无菌接种环蘸取病料划线接种于血液培养基、麦康凯培养基和SS培养基上(上海盛思生化科技有限公司提供)。 将接种有病料的培养基置于37恒温培养箱中，18h后进行观察。 细菌培养结果显示，在血液培养基上出现白色或黄色、圆形、隆起、光滑、湿润、边缘整齐、大小不一的菌落(直径12mm)，部分菌落呈现G溶血；在麦康凯培养基上长出紫红色、圆形隆起、湿润、光滑、边缘整齐的菌落(1mm左右)。 在SS培养基上生长出少量乳白色、圆形、光滑、湿润和边缘整齐的菌落(1mm左右)。 挑取特征性菌落进行革兰氏染色，结果显示两类细菌一类为阳性，成葡萄串状球形菌；另一类为阴性，中等大小，形态不一的小杆菌。 根据培养基上菌落生长和染色特征，初步定为大肠杆菌和葡萄球菌，分别纯化培养。 22细菌生化鉴定分离的革兰氏阴性杆菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、甘露醇和杨苷产酸产气，蔗糖阴性；吲哚试验阳性，H2S、MR和VP试验阴性，三糖铁琼脂培养试验显示为黄色，具有运动力。 根据生化鉴定和上述培养特征，确定分离的阴性杆菌为大肠杆菌。 xx1019作者简介周华林(1978一)，湖北襄阳人，硕士，讲师，执业兽医师，从事动物病理和动物传染病的教研工作。 周华林等襄阳市规模化蛋鸡场细菌性混合感染的诊治分离的革兰氏阳性球菌发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气；MR、VP试验阳性。 血浆凝固酶试验和耐热核酸酶试验阳性。 根据生化鉴定和上述培养特征，确定分离的阳性球菌为金黄色葡萄球菌。 23动物攻毒实验使用生理盐水将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的纯培物制成菌液，分别经腹腔接种10只小白鼠，另设1O只小白鼠进行对照。 两组实验小白鼠精神沉郁，体温升高，采食量大幅减少，而对照组小白鼠健康存活。 接种金黄色葡萄球菌的小白鼠2452h均死亡，解剖发现肝脏、肾脏、脾脏等脏器肿胀充血，腹腔有炎性渗出物，浑浊。 接种大肠杆菌的小白鼠1O一30h均死亡，解剖发现肝脏严重出血或呈现暗红色，脾和肾表面有出血点，肠黏膜有出血、水肿现象，肠内容物稀薄有气泡。 从死亡小白鼠的心血、肝、脾和腹腔液都能分离到上述两种细菌。 由此证明所分离的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均为致病菌。 3药敏试验31试验方法无菌采集卵黄，脾脏，气管黏液及肝脏等组织，使用灭菌镊子夹取病料，均匀涂抹在普通营养琼脂平皿上，每个营养琼脂平皿上都要接种上述病料。 然后将镊子于酒精灯火焰上灭菌冷却，夹片，外周可等距离贴4片，每种药物做3个重复，置于37C培养18h后测量药片抑菌圈直径。 同种药物3个药片抑菌圈的平均值为该药物的抑菌圈直径。 15种药敏纸片名称、药片浓度和判定标准参考周华林，等 (xx)文中的方法3。 32试验结果药敏试验表明，在15种受试药物中，高敏比例大于50的药物为强力霉素、丁胺卡那、乙酰甲喹、粘杆菌素、庆大霉素和恩诺沙星，占受试药物的40，其中强力霉素抑菌作用最强，高敏比例为9O；耐药比例大于50的药物为新霉素、左氧氟沙星、替米考星、土霉素、阿莫西林和头孢噻呋，占受试药物的40，其中替米考星、土霉素和阿莫西林等最弱，高敏比例为0。 4临床防治效果将1800只生病蛋鸡均分为九个组进行动物临床实验。 药物选用强力霉素、丁胺卡那和粘杆菌素，经饮水、拌料和肌肉注射三种途径给药，剂量按商品说明书推荐的15倍进行，试验时问5d。 结果如表1。 可知，不同药物、给药途径对本病治愈效果和产蛋率提升存在一定差异，治愈率、产蛋率最高分别为97和88，见于强力霉素肌注组。 在肌注给药途径中，强力霉素最好；在拌料给药途径中，丁胺卡那霉素较好；在饮水给药途径中，粘杆菌素最好。 产生这种差异的原因可能在取药敏片贴到平皿培养基表面，在平皿中央贴一于药动学上存在差异，有待进一步研究。 表1三种药物的三种给药途径的试验设计及结果5小结与讨论 (1)根据本次药敏试验和临床用药对比，注射给药效果好但工作量大，可对于病情严重的鸡只采用连续注射器进行肌肉注射。 鉴于发病初期蛋鸡大多采食量下降，而饮水量有所增加，可采用饮水途径给药，待病鸡采食量上升，改换另外高度敏感的药物进行拌料给药。 通过这种给药方式，既能确保治疗效果，也可减轻工作强度。 (2)影响药物作用的因素除了本次设计的药物种类和给药途径外，还有药物的使用剂量、药物的配伍和环境因素等多方面4，有待进一步进行研究。 (3)研究首次报道襄阳市规模化蛋鸡场大肠杆菌和葡萄球菌混合感染。 经实地调研发现，襄阳市蛋鸡场大肠杆菌和葡萄球菌感染时有发生，细菌易产生耐药性，原因主要在于长期不合理使用抗菌药物，如饲料中盲目添加较高剂量的抗生素保健，治疗过程中不进行药敏试验，频繁(每(下转第206页)陕西农业科学不考虑xx和xx年的增长率。 1999xx年实际接待游客人数与理论容量比较、-，嘲摊25OO500+接待游客人数+旅游容量12345678910ll12月份图11999xx年华山风景区实际接待游客与理论旅游容量比较从表 3、图1可以看出，1999年以来华山风景区接待游客人数呈现出波动状上升现象，但却都远低于华山旅游容量的理论值，且对景区环境的利用率较低，各年份接待游客严重不饱和，xx年环境利用率最高时利用率也只达到7O92，这些都说明客源市场开拓不足已经成为制约华山风景区旅游业发展的重要依据。 32结论与讨论通过对上述资料的分析可知，华山风景区旅游人数接待量远小于理论旅游容量，在不同程度上造成了旅游资源的闲置与浪费；但旅游接待人数呈上升趋势，说明当地的旅游资源潜力巨大，旅游业的发展前景非常好。 因此，在华山旅游发展过程中，应加强旅游宣传，提高旅游服务质量，发展特色生态旅游以进一步开拓客源市场、吸引更多的游客；同时，还应结合旅游环境容量，通过价格杠杆等方式调节游客的时空分布。 ，。 ，、-。 一，-、(上接第155页)参考文献rl-赵红红苏州旅游环境容量问题初探F-J-城市规划，1983， (3)46532保继刚颐和园旅游环境容量研究I-J中国环境科学，1987， (2)32381-3崔风军论旅游环境承载力J经济地理，1995，15 (1)105-109r4-1保继刚，楚义芳旅游地理学(修订版)I-M北京高等教育出版社，1999145148，1511525董杰等钟山风景名胜区旅游环境容量初探J西南师范大学学报(自然科学版)，xx，29 (6)1121146张晓慧，陈强楼观台森林公园旅游环境容量研究J-t西北林学院学报xx，26 (2)2072117郎和琳生态旅游开发的动力学模型及其应用J西南师范大学学报(自然科学版)，2000，25 (2)1861918李玉新靳乐山，徐福英乡村旅游专业合作社成员满意度研究J西北农林科技大学(社会科学版)，xx，13 (1)99一lO4一，、，、，一，、，12d)更换抗生素等滥用抗菌药物现象很普遍。 有待相关研究机构推广实验室药敏方法，指导养殖户科学用药。 (4)由于本病部分临床及解剖状与禽流感、新城疫类似，可通过RTPCR进行鉴别诊断，试验诊断为阴性鸡场。 参考文献I-1周华林，熊江林，王长义，等鄂西北地区规模化鸡场新城疫抗体水平监测I-J中