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毕业论文开题报告题 目 学生姓名 学号 所在院(系) 专业班级 指导教师 2012年 2月 22日题 目一、选题的目的及研究意义二、综述与本课题相关领域的研究现状、发展趋势、研究方法及应用领域等1研究现状多糖作为一类重要的生活物质，到目前为止，虽然只有云芝多糖、猪苓多糖、香菇多糖、裂褶多糖、茯苓多糖等少数应用于临床,但他们在抗肿瘤、抗凝血、抗突变、调血脂、抗衰老、抗病毒等方面疑难病症的治疗方面已经表现出广阔的前景。所以，为了提高多糖原有的活性或增加新活性，通过合适的方法对多糖的结构进行修饰是必要的。多糖是一类非特异性免疫增强化合物，能提高机体的免疫功能，增强抗病能力，有防老、防衰、防癌、抗癌以及防治肝炎的作用，受到人们的普遍重视，得到了相应的研究和开发。含硫多糖如硫酸软骨素，肝素等还有抗凝血、抗病毒等其他生物功能。通过化学改造能使这些多糖硫酸酯化合物的毒性更低，活性更高用浓硫酸法对黄精多糖进行硫酸酯化，产生硫酸化黄精多糖。然后利用 Fenton 反应产生羟自由基OH, 氧化邻苯三酚在微碱条件下自氧产生O-2, 分光光度法研究硫酸化黄精多糖体外清除活性氧自由基的作用，磷钼络合物法测定了硫酸酯化黄精多糖的总抗氧化活性。 2 研究方法 2.1黄精多糖的硫酸酯化 量取20ml的正丁醇，置于250ml的三颈瓶中，加入磁石后冰浴进行磁力搅拌，之后量取60ml的浓硫酸缓慢加入。再加入1g硫酸铵，等搅拌完全后缓慢加入4g黄精多糖，保持搅拌于0反应30min。反应液用NaOH中和后用离心机离心（6500rpm，15min），取上清液，用蒸馏水透析24h，期间需换水多次。之后将袋内溶液取出，减压旋转蒸发浓缩至50ml左右，加入5倍量无水乙醇，静置后离心（5000rpm，10min），取沉淀物，将其溶于水，再用蒸馏水透析24h。取袋内溶液进行干燥，得棕黄色的硫酸化黄精多糖。 2.2对羟基的清除 Fenton试剂之所以具有很强的氧化能力，是因为H202被Fe2+催化分解生成羟基自由基(OH)，并引发产生更多的其它自由基。该反应产生的羟自由基可使番红花红褪色。针对这一特点来研究诃子中多酚对羟自由基的清除能力。 取0.15 mol/L pH7.4的磷酸缓冲溶液1.0 mL,40g/mL番红花红1.0 mL,0.945 mmol/L EDTA-Fe()(新鲜配置)1.0 mL,不同浓度的样品溶液0.5 mL、3%H2O 21.0 mL(新鲜配置),混合后在37水浴中反应30 min后在520 nm处测定吸光度As。空白组以0.5mL蒸馏水代替样品测定吸光度A0,对照组以1.5 mL蒸馏水代替H2O2和样品测定吸光度A,用3.5 mL蒸馏水代替番红花红、EDTA-Fe()、H2O2、样品,1.0mL磷酸盐缓冲溶液,调零。并按下式计算清除率:清除率(%)=1002.3总抗氧化活性的测定磷钼络合物法磷钼络合物法的测定原理是Mo()被抗氧化物质还原生成绿色的Mo(V)络合物，其最大吸收波长为695 am。抗氧化物质活性越强，测定的吸光度值越大。此方法操作简单，所用试剂低廉、方法重现性好且适合多种溶剂提取试液抗氧化活性的测定。配制不同浓度的样品溶液。磷钼试剂是终浓度为0.6 mol/L浓硫酸、28 mmol/L磷酸钠和4 mmol/L钼酸铵的溶液。在10 mL比色管中,分别加入4 mL上述磷钼试剂液、0.4 mL样品液,95水浴中恒温90 min,在695 nm波长下测吸光度A。所有测定平行进行三次,取平均值。 2.4超氧阴离子自由基(O2)清除作用邻苯三酚自氧化一分光光度法被广泛应用于食品和药品行业的抗氧化剂初步筛选及各种活性物质清除超氧阴离子自由基(O2)的抗氧化功能评价。邻苯三酚自氧化过程为链式反应，可产生O2，其自身氧化产物的含量可用分光光度仪检测。在pH值90时，邻苯三酚自氧化速率与生成的O2的浓度呈正相关，故可通过紫外可见光分光光度仪来定量测定抗氧化剂在此体系中对O2的清除作用，间接评价抗氧化剂的抗氧化能力。取PH8.2Tris-Hcl缓冲液9mL于于25恒温水浴20min后，用微量注射器注入40微升25预热过的邻苯三酚溶液（45mmol/L邻苯三酚于10mmol/LHcl中）立即倒入比色管中，于温度25下每隔30秒测定一次吸光度（420nm自氧化速率控制在0.06/min左右），邻苯三酚自氧化3min后，加一滴Vc立即混匀，室温下放置5min后测定其在420nm下的吸光度即A0，可表示邻苯三酚的自氧化速率。在上述Tris-Hcl缓冲液中加入一定量的样品，再接上述方法测定邻苯三酚的自氧化速率得到A1，同时做一空白试剂A2，按下式计算：抑制率（%）=（A0-（A1-A2）/A01003.应用领域自由基是生物组织代谢的产物，当体内自由基产生过多或自身防御系统薄弱时，会导致大量膜内多不饱和脂肪酸发生过氧化作用，最终导致多种炎症、变态性疾病、脏器损伤、衰老等一系列病变的发生。适当引入外源性抗氧化剂，可以减缓或改善自由基引起的疾病。因此，寻找高效、 低毒清除氧自由基的抗氧化剂已成为近年来研究的热点。目前,有很多报道表明,被修饰后的多糖类具有良好的清除自由基的作用，且被修饰后的多糖能有效的降低毒性及副作用。 有研究表明,自由基的存在能引起生物膜脂质的过氧化作用,从而导致脂质过氧化作用的积聚;还有研究表明,过量的紫外辐射,特别是UVA/B的辐射,能产生活性氧分子(ROS) ，且硫酸化黄精多糖对这些活性氧分子具有的清除作用，实验为硫酸化黄精多糖在抗氧化作用方面的应用做了铺垫。三、对本课题将要解决的主要问题及解决问题的思路与方法、拟采用的研究方法（技术路线）或设计（实验）方案进行说明，论文要写出相应的写作提纲1、 本课题主要解决方法是选用哪几个指标来判定硫酸化黄精多糖的抗氧化活性及体外清除自由基作用，因为每一种指标都有几种不同的方法来测定，因此选定指标后要确定选用哪种方法，除此之外必须确定合适的样品浓度。 2、 制作硫酸化黄精多糖的过程中最大的问题是透析袋及浓硫酸的使用，透析袋使用需要进行前期处理，后期使用也要及其小心，实验过程中需要带手套操作。 3、根据实验需要及实验室现有的条件，本次利用 Fenton 反应产生羟自由基OH, 氧化邻苯三酚在微碱条件下自氧产生O-2, 分光光度法研究硫酸化黄精多糖体外清除活性氧自由基的作用，磷钼络合物法测定了硫酸化黄精多糖的总抗氧化活性。样品的浓度的确定先做预实验，根据与实验的结果设定不同的样品浓度梯度，在选取最合适的样品浓度梯度进行试验。4、论文主要包括摘要、关键字、引言、实验材料和仪器、实验方法与过程、实验结果、讨论与分析几部分。四、检索与本课题有关参考文献资料的简要说明1田庚元,李寿桐,宋麦丽等.牛膝多糖硫酸酯的合成及其抗病毒活性J,药学学报.1995,30(2):107-111.2Guiseley KB.Some novel methods and results in the sulfation of polysaccharides.In:Schweiger RG,ed.Carbohydrate Sulfates.ACS Symp.Ser.1978,77:148-162.3Wdfrom ML,Juliano BO.Chondroitin sulfate modifications .Sulfated and N-deacetylated preparations.J Am Chem Svc,1960,82:2588.4徐向荣,王文华,李华斌.比色法测定Fenton反应产生的羟自由基及其应用J.科技期刊.1999(1):1-5.5王巨存,邢国胜,胡文铎,等.有机锗Ge- 132对氧自由基和由羟自由基诱导的脂质过氧化的影响J.中国药学杂志.1994,29(1):23- 24.6韩少华,朱靖博,王妍妍.邻苯三酚自氧化法测定抗氧化活性的方法研究J.中国酿造.2009(6):155-157.7袁建锋,蔡恒,单咸旸,等.一株芽孢杆菌胞外多糖的分离纯化及其抗氧化性测定N.微生物学通报.2009,36(10):1466-1470.8黄海兰,赵祖亮,王斌贵. 磷钼络合物法与-胡萝卜素-亚油酸法测定海藻脂类成分抗氧化活性的比较A.中国油脂.2005,30(3):32-34.9李荣,姜子涛,马丽.月桂精油抗氧化性能及清除自由基能力的研究B.中国调味品.2009,34(11):58-62.10张泽庆,张静,张宏艳等.硫酸酯化防风多糖的制备及抗氧化作用研究J.中草药,2009,40(8):1208-1211侯双菊;黄精多糖的提取工艺及提取液树脂法脱色的研究D;合肥工业大学;2006年11Xing R,Liu S,Yu HH,et al.Preparation ofhigh-molecular weight and high-sulfate content chitosansand their potential antioxidant activity in vitro.Carbohy-drate Polymers,2005,61:148-154.12Dissett DL,Chatterjee R,Hannon DP.Photoprotective ef-fect of superoxide-scavenging antioxidants against ultra-violet radiation-induced chronic skin damage in the hair-less mouse.Photodermatology ,Photoimmunology&Photomedicine,1990,7:56-62.五、毕业论文进程安排20