实验五 小鼠单个核细胞分离ppt课件_第1页
实验五 小鼠单个核细胞分离ppt课件_第2页
实验五 小鼠单个核细胞分离ppt课件_第3页
实验五 小鼠单个核细胞分离ppt课件_第4页
实验五 小鼠单个核细胞分离ppt课件_第5页
已阅读5页，还剩4页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验五小鼠脾单个核细胞的分离 密度梯度离心法 1 原理 根据物理学颗粒沉降原理 不同密度的颗粒在其沉降运动中可因其比重的差别而处于不同的分布位置 利用此原理可设计一定比重的液体界面 将小鼠脾脏中各种不同比重的细胞通过离心沉降而达到使其彼此分离的目的 2 原理 已知小鼠淋巴细胞和单核细胞的比重为1 088左右 而红细胞与粒细胞的比重均大于1 088 因此 若用比重为1 088 0 001的分离液则可通过密度梯度离心方法 在分离液界面上收集得到脾单个核细胞 3 操作步骤 将2ml小鼠脾脏细胞悬液混匀 然后用滴管沿盛有2ml淋巴细胞分离液的试管壁轻轻铺于分离液面上 将该试管置水平式离心机中1800rpm离心15min 用滴管小心直接插入白色絮状的细胞层 吸出界面层细胞 移入另一试管中 4 操作步骤 离心后的样本各成份在试管中的分布位置如下图 5 操作步骤 加入足量生理盐水 用滴管轻轻上下混匀 然后1000rpm离心10min 弃去上清液 将沉淀细胞充分摇匀 然后用生理盐水再离心洗涤1次 弃去上清液后充分摇匀沉淀细胞 用生理盐水稀释沉淀细胞至0 3ml 约加6滴 混匀 取细胞悬液一滴加入等量白细胞稀释液于另一试管中充分混匀 用计数板在显微镜下计数 计算出淋巴细胞浓度 个 ml 检查细胞活力 取细胞悬液一滴 加入等量锥兰溶液于另一试管中 充分混匀后立即滴一滴细胞悬液于载玻片上 在显微镜下计数100 200个淋巴细胞中着色的死细胞数 6 操作注意事项 注意分离液与稀释血的比例 一般以1 2 1 3为宜 分离时所取的离心速度与时间 因各台离心机的离心半径而异 需事先通过预试验决定 加入稀释血时应十分小心 注意保护试管内的界面 勿使混淆影响分离效果 做细胞活力检查时 锥兰染色后应尽快计数完毕 时间过长则细胞活力可能降低 7 实验结果记录与分析 通过前后两次细胞计数 8 单个核细胞浓度 个 ml 四大方格细胞总数 10 2 1
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 作文作品

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论