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人源化抗体的制备策略有哪些,1,-,目录,一、嵌合抗体,二、CDR移植的人源化抗体,三、完全人源化抗体,1.抗体库技术,2.转基因小鼠技术,2,-,一、嵌合抗体,应用DNA重组技术将小鼠抗体基因上的可变区与人抗体基因的恒定区重组,再将重组后的基因导入骨髓瘤细胞中表达。根据所用的载体质粒标记基因产物,选用适当的抗生素或制剂进行筛选,再用与传统技术相似的方法克隆出分泌人鼠嵌合抗体的细胞株。,二、CDR移植的人源化抗体,鼠源性抗体V区中的FR仍残留一定的免疫原性,这种抗体还远非真正的人源化抗体,有些还能产生很强的抗独特型反应。为减少鼠源成分,人们进一步用人的FR替代鼠FR,形成更为完全的人源化抗体,即除了3个CDR是鼠源的外,其余全部是人源结构,又称CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)或改型抗体(reshapedantibody)。,3,-,三、完全人源化抗体,1.抗体库技术噬菌体抗体库技术的产生依赖于3项实验技术的发展:一是PCR技术的发展使人们可以用一组引物(免疫球蛋白可变区中骨架部分的保守序列),通过RT-PCR直接从B淋巴细胞总RNA克隆出全套免疫球蛋白可变区基因,从而使抗体库的构建简单易行;二是噬菌体展示技术(即将抗体通过与噬菌体外壳蛋白融合表达在噬菌体的表面,进而经亲和富集法筛选表达有特异活性的抗体)的建立,实现了基因型和表型的统一,提供了高效率的筛选系统,这是噬菌体抗体库技术的核心;三是从大肠杆菌分泌表达有结合功能的免疫球蛋白分子片段。,噬菌体抗体库将基因型和表型统一于一体,将选择能力与扩增能力偶联起来,具有强大的筛选功能,能够在体外模拟体内的抗体生成过程,使抗体工程技术进入了一个新的时代。噬菌体抗体库技术的发展使体外不经过免疫获得抗体成为可能。由于它发生于体外,因此不依赖体内抗原识别和提呈系统,在理论上可以产生抗任何物质的抗体。目前噬菌体抗体库技术也存在不足之处,如从未经免疫动物的抗体库获得的抗体亲和力不高、受外源基因转化率的限制、抗体库的库容不足以涵盖一些动物的抗体多样性等。因此,大容量抗体库是获得高亲和力抗体和针对稀有抗原抗体的关键。,4,-,2转基因小鼠技术,通过基因敲除技术使小鼠自身的基因失活并导入新基因,创造出携带人体抗体重、轻链基因簇,而自身抗体基因失活的转基因小鼠。这种转人抗体基因小鼠(humanantibodymouse,HuMab)所携带的人DNA片段具有完备的功能,可以有效地进行同种型转换和亲和力成熟。,转基因小鼠制备的人抗体,其功效优于其他技术生产的抗正常人体蛋白单抗。小鼠识别抗原和动员抗原的抗体系统仍保持完整,容易把人体蛋白识别为异物。此外,由于抗体是体内产生的,经历了正常装配和成熟过程,从而保证成品具有较高的靶结合亲和力。但转基因小鼠也存在一些缺陷,即转基因通常有体细胞突变和其他独特的序列,导致不完整的人序列;而且,由于抗体是在
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