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文档简介
实验六植物细胞骨架的光学显微镜观察,一实验目的1通过对洋葱内皮细胞的处理,掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。2掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架染色的方法。,二实验原理,细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构,成分有微丝、微管和中间纤维。TritonX-100可溶解抽提细胞中的蛋白质和脂质,但不破坏细胞骨架系统。戊二醛固定、考马斯亮蓝R250染色,光学显微镜观察网状结构的由微丝组成的细胞骨架。,三实验仪器、材料和试剂,1仪器、用具:普通光学显微镜等2材料:洋葱鳞茎3试剂:M-缓冲液6mmol/L磷酸缓冲液1%TritonX-1000.2%考马斯亮蓝R250,三实验仪器、材料和试剂,3试剂:3%戊二醛50%、70%、95%乙醇叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶,四实验方法(),1洋葱鳞茎内表皮(1cm大小)50ml烧杯(磷酸缓冲液)下沉2吸去缓冲液加1%TritonX-1002030分钟3吸去TritonX-100M-缓冲液洗3次/10分钟43%戊二醛固定0.5-1小时,四实验方法,5PH6.8磷酸缓冲液洗3次/10分钟60.2%考马斯亮蓝R250染色2030分钟7蒸馏水洗1-2次装片观察8制作永久切片,四实验方法(),取洋葱内皮1cm左右置于含PBS液的载玻片上湿润后,吸去PBS加2滴1%TritonX-100/M-缓冲液,5min吸去缓冲液,加3%戊二醛-PB溶液,固定30min加PBS洗2次,共3min加0.2%考马斯亮蓝R250染色30min用PBS洗2次,共2min,吸干镜检并绘图细胞骨架标本制作过程,五作业,1绘出植物细胞骨架微丝结构图。2分析和论述在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征。3为什么用TritonX-100的缓冲液处理材料?,植物细胞骨架微丝结构图,植物细胞骨架微丝结构图,植物细胞骨架微丝结构图,植物细胞骨架微丝结构图,植物细胞骨架微丝结构图,植物细胞骨架的形态特征,细胞骨架观察结果光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见(如图),细胞壁及其分界明显。1010倍镜下可粗略观察到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀,细胞核区域的纤维相对密集,蓝色浓重,甚至分辨不出网络结构,另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布;相邻细胞的密集程度基本一致,但有少数细胞有较大不同。,植物细胞骨架的形态特征,细胞骨架观察结果1040倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由线性纤维交织成,纤维间的结合点稍膨大。细胞边缘骨架较稀疏,但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的细胞质膜的轮廓,与细胞内部的纤维通过纵向的纤维相连。相邻细胞有纤维穿过胞间
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