环境三致物的生物检测

环境三致物的生物检测,环境三致物：指能致畸、致癌、致突变的物质,特点：时间短、成本低、结果可靠,项目九蚕豆根尖微核监测技术,一、蚕豆根尖微核技术的原理,让我们复习一下细胞有丝分裂的过程吧,有丝分裂各时期,植物细胞的有丝分裂,有丝分列各期图像,项目九蚕豆根尖微核监测技术,一、蚕豆根尖微核技术的原理,蚕豆根尖细胞在进行有丝分裂过程中，染色体经常发生断裂，但一般情况下，断裂可以自行愈合，如果受到有害因子的攻击，染色体就不能愈合，甚至增加断裂，形成染色体片段，这些染色体片段由于缺乏着丝点而不能到达细胞的两极，而留在细胞质中，一旦新细胞核形成，这些片段就形成大小不同的小核，即微核。因此，我们可以根据微核率的高低说明诱变物的强弱。,项目九蚕豆根尖微核监测技术,二、受试生物材料,松滋青皮豆，或其他蚕豆品种,1.蚕豆浸种催芽,25，浸泡2630h,浸种,催芽：用纱布松松包裹吸涨的种子置解剖盘内，保持湿度，在25的温箱中催芽1230h。待种子初生根露出23mm，再选取发芽良好的种子，放入铺满薄层湿脱脂棉的解剖盘内，仍在25下催芽3648h，当大部分种子的初生根长至23cm时，即可用于处理,三、试验步骤,项目九蚕豆根尖微核监测技术,2.处理根尖,每一处理选取68粒初生根生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，让被测液浸泡住根尖即可，用自来水（或蒸馏水）作对照处理，方法相同。处理时间为46h。,3.根尖细胞恢复培养,将处理后的种子，用自来水（或蒸馏水）浸洗3次，每次23min，然后把洗净的种子再放入湿脱脂棉盘中，按前述培养条件恢复培养2224h,项目九蚕豆根尖微核监测技术,4.根尖细胞的固定,将恢复后的种子，从根尖顶端切下lcm长幼根放入青霉素空瓶中，加卡诺氏液固定24h,5.孚尔根（Feulgen）染色,(1)固定好的幼根，在青霉素瓶中用蒸馏水浸洗2次，每次5min,(2)吸净残水，再加5mol/LHCI将幼根泡住，连瓶放入28水浴锅中水解幼根25min左右，至幼根被软化即可,(3)用蒸馏水浸洗幼根2次，每次5min,项目九蚕豆根尖微核监测技术,(4)在暗室或遮光的条件下加席夫（Schiff）试剂，染色14h,(5)除去染液，用SO2洗涤液浸洗幼根2次，每次5min,(6)用蒸馏水浸洗1次，5min,(7)将幼根放入新换的蒸馏水中，置4的冰箱内保存，可供随时制片之用。,6.制片,45%醋酸,压片法,项目九蚕豆根尖微核监测技术,7.镜检及微核识别标准,大小是主核大小的1/3以下，并与主核分离；形状为圆形、椭圆形或不规则形；着色与主核相当或稍浅,每一处理观察3个根尖，每个根尖随机计数1000个细胞中的微核数,项目九蚕豆根尖微核监测技术,五、实验数据的统计处理和污染程度的划分,（一）数据处理,1.按以下公式计算各测试样品（包括对照组）的微核千分率（MCN）,2.如果被监测的样品不多，可直接用各样品MCN率平均值与对照比较（t检验），从差异的显著性判断水质污染与否,项目九蚕豆根尖微核监测技术,3.如果被检测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看各样品的MCN平均值与对照的差异显著性。,（二）结果评价,1.利用“MCN”进行评价,30重污染,项目九蚕豆根尖微核监测