专题五DNA的粗提取与鉴定PPT课件VIP

1，1，5.1 DNA的粗提和鉴定，- 2，1 .试着粗提植物和动物组织的DNA，了解DNA的物理化学性质。 2 .了解DNA粗提和鉴定的原理。 课题目标(b )，-，3，1 .提取DNA的方法： (1)DNA的溶解性：【思考1】DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特征？ 这有什么应用？【思考2】什么原理可以进一步分离DNA和蛋白质？ 另一方面，利用基础知识、DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同的特点，选择合适的盐浓度可使DNA充分溶解，使杂质沉淀，反之DNA不溶于酒精溶液，但细胞中蛋白质的一部分溶于酒精。 进一步分离DNA和蛋白质。 DNA对、-、4、(2)酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶可水解，但没有影响的大部分蛋白质经不起温度的高温，但DNA在温度以上变性。 可以破坏细胞膜，但不影响DNA。 (3)DNA的鉴定： DNA的鉴定方法是？ 在沸水浴条件下，从DNA被二苯胺染色、- 5、NaCl溶液中的DNA的溶解度曲线，考虑DNA在哪个浓度下的溶解度最小，DNA在NaCl溶液中的溶解度如何变化？ 关于NaCl溶液中DNA的溶解度曲线，当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随着NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低，当DNA溶解度最小的NaCl溶液的浓度持续增加时，DNA的溶解度逐渐增加。 通过控制NaCl溶液的浓度使DNA溶解或析出于盐溶液的方法氯化钠的物质的量浓度为2mol/L时，DNA的溶解度比较大，浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。 利用这一原理可以使DNA溶解或析出于盐溶液中。6、- 7、(1)实验材料的选定、(2)破碎细胞，采集含有DNA的滤液，(3)除去滤液中的杂质(精制)、(4)DNA的析出和鉴定、2、实验设计、- 8、(1)实验材料的选定、从以下材料中选择23种，原则上是鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃在洋葱、豌豆、菠菜、液体培养基培养的大肠杆菌，包括DNA在内的生物材料都可以考虑，但是选择DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性很高，在9、 (1)教材中选择鸡血作为实验材料的优点是什么？ (2)取得的鸡血可以直接使用吗？ 真核生物，DNA在染色体上的原因是鸡血核大，DNA含量丰富，材料易得，不能去除三细胞壁，因此方法：加入0.1g/mL柠檬酸钠溶液100mL，500mL烧杯，用玻璃棒搅拌新鲜鸡血(约180mL ) 记得、10、-、11、1 .必修一学习的质壁分离、方法和原理吗？ 2 .鸡血球溶液： (2)细胞破碎，采集含DNA的滤液，加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒向同一方向搅拌，但不能过早破坏DNA。 过滤后取液。 方法：一般在510mL鸡血液中加入蒸馏水20mL搅拌5min。 释放出的大量DNA和RNA与蛋白质结合，用纱布过滤，除去粒子大的杂质。-、12、-、13、思考： (1)可以用滤纸吗？ (2)这道工序得到的滤液成分是什么？DNA在哪里？ 不，孔径太小了。 有必要用纱布除去粒子大的杂质，得到含有DNA的滤液。 释放出的大量DNA和RNA必须与蛋白质结合，过滤，去除粒子中的大杂质。 DNA在滤液中。、14、想想：洗涤剂和食盐分别起什么作用？ 洗涤剂离子去污剂有利于溶解细胞膜，DNA释放食盐NaCl，DNA溶解在研磨液中，(3)细胞对动物细胞的渗透压可以破坏细胞，但通常必须面对植物材料。 我们不是还能通过加入一定量的蒸馏水使细胞膨胀，而是粉碎植物细胞的细胞壁。 研磨过程中一般加入洗涤剂和食盐。 15、研磨破碎细胞壁，释放核内的DNA。 研磨不充分时，提取的DNA的量减少，看不到线状沉淀物，或者二苯胺不显示蓝色。 想一想。 研磨的目的是什么？ 如果研磨不充分，对实验结果会有什么样的影响呢？-、16、2.DNA的溶解性、2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐性、(3)去除滤液中的杂质，-、17、(1)溶解细胞核内的DNA，在浓度高的NaCl溶液中核蛋白质容易分解，游离的DNA在溶液中方法：向溶液中加入双倍体积浓度为2mol/L的NaCl溶液，搅拌1min。 注意：单向搅拌，充分溶解DNA。 (2)在DNA的析出中加入蒸馏水，降低NaCl溶液浓度，使DNA析出。 方法：实验中慢慢往墙上加入蒸馏水，轻轻地单向均匀搅拌，使DNA分子的附着和纠缠良好。 同时要注意控制供水量，使NaCl溶液的最终浓度达到0.10.2mol/L。 加水过程一般分3次进行，总加水量为300mL左右时，DNA基本析出。 加水多，溶液过稀时，DNA分子再次溶解。 用34层纱布过滤DNA稀释液，过滤蛋白质，收集DNA粘稠物。 采用离心法，效果更好。 用4000r/min转速的离心机离心15min，去除上清液(含蛋白质)，残留沉淀物中含有DNA。 此时注意到了DNA粘稠物的颜色。18、(3)再溶解DNA粘合物，接着用2mol/L的NaCl溶液20mL溶解DNA粘合物，依然单向搅拌3min，充分溶解DNA，防止损失。 用34层纱布过滤(或离心)，过滤杂质，收集含有DNA滤液。 想一想：为什么DNA能反复溶解析出，去除杂质？ 用高浓度的盐溶液溶解DNA，去除不能溶解在高盐中的杂质，用低盐浓度析出DNA，可以去除盐溶液中的杂质。 因此，通过反复进行DNA的溶解和析出，可以除去与DNA的溶解度不同的杂质。-、19、2mol/l、-、20、过滤取出纱布上的过滤物，再次溶解纱布过滤、DNA、2mol/LNaCl溶液，21、思路：方案2和方案3的原理有什么不同？ 提案2用蛋白酶分解杂质蛋白质，分离提取的DNA和蛋白质的提案3利用DNA和蛋白质的耐高温性的差异，改性蛋白质，与DNA分离，-，22，(4)DNA的析出和鉴定，在滤液中逐渐添加50mL的预冷的体积份数95%乙醇1、DNA的初步纯化，-，23，思路：为什么加入预冷酒精预冷乙醇溶液具有以下优点。 1 .抑制核酸水解酶活性，防止DNA分解，2 .降低分子运动，易形成沉淀析出，3 .低温下增加DNA分子的柔软性，减少断裂，2.DNA鉴定：在二苯胺法、沸水浴条件下，DNA遇到二苯胺变蓝。 溶解：在物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL中加入丝状物，用玻璃棒搅拌使之溶解。 显色：加入二苯胺试剂4mL。 均匀混合后，将试管放入沸水中加热5min。 设置对照组：在5mL体积2mol/L的NaCl溶液中加入二苯胺试剂4mL，在沸水中加热5min。24、加入冷醇析出(精制) DNA，制备冷醇、DNA鉴定、-、25、1、鸡血球液提取鸡血细胞核物质后，溶解，20m1，蒸馏水，20m1，蒸馏水，40，mL，3，核内的DNA ，9，DNA，b，(1)，试管上有，2mol，/，l，的NaCl，溶液，5，mL，(2)4m ， 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝、促进血细胞破裂、溶解DNA、为了最大限度释放DNA而将2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L、将含有DNA的粘合物留在纱布上， 尽可能多地将含有DNA的粘稠物溶解在溶液中，去除含有DNA的滤液中的杂质，提取DNA，A中即使出现蓝色b也没有变化，-，27，真题练习，(2012.18 )以下的“DNA粗提取和鉴定实验”正确地说明了a .洗涤剂使细胞膜崩溃将增加DNA在NaCl溶液中溶解度的b.DNA丝状物放入二苯胺试剂中的沸水浴后，在蓝c .常温下菜花匀浆中的酶类的一部分会影响DNA的提取d。 用滤棒慢慢搅拌滤液的话，DNA的取得量会减少，在28、(2011.19 )利用鸡血的“DNA的粗提取和鉴定”的实验中，a .用蒸馏水将NaCl溶液的浓度调整为0.14mol/L，过滤析出物b。 调整NaCl溶液的浓度或加入木瓜蛋白酶，可以去除一部分杂质c。 将丝状物溶解在2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂后变成蓝色d。 以菜花代替鸡血为实验材料，其实验操作程序相同，-，29，观察你提取的DNA的颜色，说明如果不是白色丝状物，DNA中的杂质多。 二苯胺的鉴定是蓝色的说明实验基本上成功了。 没有蓝色说明，提取的DNA含量低，或者实验操作可能存在错误，需要重新制备，三是课题成果评价，(一)是否提取了DNA，(二)用不同的实验材料和方法，-，30，(2010.32 )某生物兴趣组开展了DNA粗提取的研究活动具体步骤：材料处理：取鲜花菜、辣椒、蒜黄各2份，取l0g各1份。 裁断后，分为两组，一组在20，另一组在20保存24小时。 DNA粗提：第一步：将上述材料分别放入乳钵中，放入l5mL研磨液，进行充分研磨。 用双层纱布过滤，取滤液备用。 第二步：首先向6只烧杯中倒入10mL人的滤液，加入20mL体积分率为95%的冷酒精溶液，用玻璃棒慢慢向一个方向搅拌，在玻璃棒上缠上絮凝物。-，31，第三步：取6根试管，分别加入等量的2mol/LNaCl溶液，溶解上述絮凝物。 DNA检查：上述试管各加入二苯胺试剂4mL。 均匀混合后，放入沸水中加热5min，冷却试管后，比较溶液颜色的浓淡，如下表所示。 分析上述实验过程，回答以下问题： (1)该探究性实验课题名为。 (2)第二阶段“慢慢”搅拌