肿瘤动物模型ppt课件

肿瘤动物模型，孔伟，耿飞导师郑亚元2015342056，2015年11月30日，1。肿瘤动物模型，1。自发性肿瘤动物模型。诱发肿瘤动物模型。移植肿瘤动物模型及其研究方法。人肿瘤异种移植瘤动物模型。自发性肿瘤的动物模型，定义：在实验动物中自然发生的肿瘤，未经人工实验治疗，成为自发性肿瘤。实验动物的选择：对于发病率高的实验动物，一般选择小鼠；3、小鼠常用肿瘤模型中肿瘤的自然发生率；4、自发性肿瘤动物模型的优点、自然发生、肿瘤发生和细胞学特征与人类肿瘤相似。2.便于慢性治疗和综合治疗。3.发生条件是自然的，通过仔细观察和研究，可以发现新的环境致癌因素和其他致癌因素。可以着重观察遗传因素在肿瘤发生中的作用。5、自发性肿瘤动物模型的缺点，肿瘤的发生是不均匀的。很难在短时间内获得大量的肿瘤材料，这需要很长的时间和大量的资金。患有肿瘤的动物的肿瘤生长率差异很大，难以评估。诱发肿瘤的动物模型定义：在实验条件下使用致癌因子在动物体内诱发肿瘤的动物模型。原理：利用外源性致癌因子引起的异常细胞遗传特性，表现出异常生长和高增殖活性，形成肿瘤。用于诱发实验性肿瘤的动物有很多种，其中大多数是啮齿动物，包括大鼠、小鼠、豚鼠等。诱导肿瘤模型的动物选择。物理方法：放射性物质引起的肿瘤，放射照射或局部注射放射性同位素。化学方法：使用化学致癌物，如苯并芘、甲基胆蒽、联苯胺、亚硝胺、黄曲霉毒素等。生物学方法：致癌作用是由能诱发动物肿瘤的病毒引起的，如小鼠白血病病毒和SV40病毒。为了通过转基因方法在动物中诱导肿瘤，可以根据不同的启动子类型选择不同的肿瘤产生器官，例如使用乳球蛋白启动子的SV40T抗原的转基因小鼠，其可以诱导乳腺癌或胰腺癌。MMTV-Wnt-1转基因小鼠乳腺癌发病率高。建立诱导肿瘤动物模型的方法。原位诱发致癌物直接与动物靶组织或靶器官接触，在组织或器官中诱发肿瘤。异位诱导是动物组织或器官的肿瘤，是通过将与致癌物接触的动物组织或器官埋在动物或另一正常动物的皮下而产生的。建立诱发肿瘤、致癌物、致癌物动物模型的方法，10，1。涂片法(皮肤癌)2。口服(消化道或消化腺)3。注射方法4。气管灌注法(肺癌)5。穿线方法6。埋藏法，诱发肿瘤模型，11，1致癌物的给药途径。肺癌简介：在实验工作中诱发肺癌比诱发其他肿瘤困难得多，癌症诱发率低。呼吸给药方法经常诱导多个肺外肿瘤而不是肺肿瘤。方法： DEN诱发小鼠肺癌：每周一次皮下注射1% DEN水溶液，剂量为56 mg/kg。(2)氨基甲酸乙酯诱导的肺腺癌：每隔3-5天向小鼠(品系A，1-1.5月龄)的每个腹腔内注射0.1-0.3毫升马拉坦生理盐水溶液。每只小鼠的总剂量约为100毫克，持续2-3个月。诱导肿瘤模型为，例如，12，特征:DEN总量为868毫克，观察时间为100天，癌症发病率可达40%，DEN总量为1176毫克，观察时间为半年时癌症发病率可达94%，其中支气管鳞状细胞癌占41%。(2)氨基甲酸乙酯注射后3个月肺腺癌发病率为100%，且多为多发性。诱发肺部肿瘤的部位和组织类型与人肺部肿瘤相似。13，2。食道癌(癌瘤)简介：亚硝胺在体内代谢产生重的碳烷，碳烷将核酸或其他分子烷基化，从而导致癌症。口服或胃肠外给予不对称亚硝胺可诱发大鼠食管癌。方法：甲基苄基亚硝胺(MBNA)诱发食道癌：在少量粉状饲料中加入1% MBNA溶液，搅拌均匀，1月龄以上Wistar大鼠自由进食。剂量为每天0.75 1.5毫克/公斤。二氢黄樟素诱导的大鼠食管癌模型：小剂量(1/2500 1/10000)黄樟素对大鼠的诱导率为20% 70%，14、特征及应用：在MBNA诱导的食管癌中发现食管鳞状细胞癌组织，但转移罕见。亚硝胺具有高度致癌性，一旦大剂量服用，就会致癌。15，3。肝癌简报:常用的引起肝癌的口服物质包括乙基亚硝胺(DEN)、4-2甲基氨基偶氮苯(DBA)、2-乙酰氨基酸(2AAF)、亚氨基偶氮甲苯OAAT和黄曲霉毒素。方法： DEN诱发大鼠肝癌：给一组体重约250克的大鼠灌服0.25-1毫升0.25% DEN水溶液或稀释10倍，置于饮料瓶中，每天2-10毫升/公斤，免费饮用。喂养大鼠约半年黄曲霉毒素诱发大鼠肝癌：每月将0.001-0.015毫克/千克混合到饲料中，喂养约6个月。16，特征和应用: DEN诱导的大鼠致癌率为70%，DBA诱导的致癌率为60%，黄曲霉毒素诱导的大鼠肝癌发生率为80%。从病因学的观点来看，这种方法类似于人类肿瘤，因此这种类型的模型通常用于深入研究肿瘤特征。17，4。宫颈癌(Carvicalcarcinoma)将一个含0.1毫克二甲基胆蒽(DMC)的棉纱布结穿入雌性小鼠的颈部并固定缝线。观察约半年后，处死动物，取宫颈组织。可移植肿瘤的动物模型及其研究方法，定义：模型是指选择将动物或人肿瘤移植到相同或不同的动物体内连续传代形成可移植肿瘤动物的肿瘤实验动物：常用的可移植肿瘤动物是小鼠、大鼠和仓鼠的肿瘤细胞的选择：在筛选抗癌药物时，最好选择3种肿瘤株、肉瘤、腹水瘤和白血病株。在众多移植肿瘤中，小鼠Lewis肺癌、小鼠黑色素瘤B16和小鼠白血病P388是目前最有价值和应用最广泛的。19、接种方法(无菌操作)，1。实体瘤、实体瘤接种法：肿瘤块接种法、肿瘤细胞悬液接种法、培养细胞接种法、活细胞接种法等。20、肿瘤块接种法，选择接种后7-10天生长状态良好的肿瘤衍生动物，颈椎脱臼，杀灭，手术部位皮肤消毒。切开皮肤，剥离肿瘤进行接种，去除非肿瘤组织和坏死组织，选择生长良好但无变性和坏死的肿瘤组织、红色(黑色素瘤为黑色或黑紫色)和鱼肉，在无菌盘中切成2mm3小块。盘子放在冰块上，盘子里放一点消毒过的PBS或其他营养液。用无菌套管针抽吸肿瘤，并在同一受体动物的腋窝下皮下接种(接种部位的皮肤应首先消毒)。也可以将肿瘤取出并切成小块，在受体动物的腋下切开一个小开口，用无牙眼钳夹住肿瘤块并送入切口。腋窝的皮肤松弛，使得肿瘤变得更大，延长了宿主动物的寿命。接种操作的时间应尽可能缩短，并应在肿瘤获得至接种结束的30分钟内完成。21、当每次接种的动物数量较大时，可采用肿瘤细胞悬液接种法。具体方法如下：无菌操作取出肿瘤块，将多个肿瘤块混合，切成小块，放入玻璃匀浆器中，加入无菌生理盐水，单向旋转研磨，过过滤网，加入生理盐水，稀释成1:3-1:4(肿瘤g:生理盐水ml)的肿瘤细胞悬液，台盼蓝染色计数活细胞数，用1毫升注射器注入接种部位，接种0.2毫升(一般含1106通常在腋下接种，每只动物可以选择多个接种点。22、肿瘤细胞悬液接种法：对数生长期细胞用0.25%胰蛋白酶消化去壁后，用PBS或生理盐水以1000转/分钟离心10分钟，洗涤两次，洗去细胞培养液中的胰蛋白酶和血清等成分，用台盼蓝染色排斥法计数活细胞数，用生理盐水将肿瘤稀释成一定浓度的细胞悬液， 将细胞悬液置于冰上，用1毫升注射器在每个接种点接种0.2毫升(包括1106-1107个细胞),并尽快注射到接种部位。23，2。腹水瘤，24。肿瘤细胞的冷冻保存和复苏。肿瘤细胞或肿瘤菌株的冷冻保存能够使它们长期使用，防止退化或变异，并保持不同代细胞的特征。一般在液氮中保存12年，细胞存活率可达80%90%。1.冷冻保存方法：取对数生长期增殖旺盛的细胞，消化，离心，用胰蛋白酶洗涤，用7份培养液、2份小牛血清和1份二甲基亚砜制备(15)*106细胞/ml细胞悬液，移入细胞冷冻保存管。将冷冻保存管在4放置30分钟，-20放置4小时，-70过夜，然后放入液氮中。2.复苏方法：取出冷冻保存管，迅速放入3840的水浴中，保持振荡，使其在1分钟内完全融化，以500 800转/分钟离心5分钟，弃去上清液，加入培养液，移入培养瓶培养。第二天更换培养基，然后按照常规培养。人肿瘤异种移植瘤模型采用人肿瘤细胞，在病理组织形态和遗传特征上与人肿瘤相同，可用于直接研究人肿瘤的生物学特性和抗肿瘤药物。常用宿主动物：裸鼠和C57BL/6小鼠，26只。裸鼠被用作移植宿主。实验动物：6-8周龄，体重21-22克，在无特定病原体的SPF中饲养和生长的BALB/c裸鼠。肿瘤来源：来源大致可分为两种类型，一种是人类肿瘤细胞系，另一种是来源于快速人类肿瘤组织的癌细胞。常用的人癌裸鼠细胞系、接种方法和最佳生长期为：结肠癌HCT-8(匀浆，3周)、胃癌MGC-803(组织块，4-5周)、肝癌BEL-7402(组织块，4周)、小细胞肺癌LTEP-SM1(组织块，4-5周)、乳腺癌MCF-7(组织块，4-5周)和其他手术方法(如人胃腺癌SGC-7901): 1。将移植的肿瘤在超净台上切割成2 3m 3大小的肿瘤块，用套管针在BALB/c裸鼠右腋下接种肿瘤。2.接种24小时后，随机分组，开始给予试验药物进行实验治疗。测试期约为6周。3.停药后第二天称肿瘤，剥离肿瘤并称重，计算肿瘤重量抑制率。27，观察指标和疗效评价：1。在肿瘤接种后约6周，动物形成大于1g(平均肿瘤重量)的肿瘤块，这表明肿瘤移植成功2。如果20%小鼠的肿瘤重量小于400毫克，则表明肿瘤生长不良3。在药物治疗期间，如果给药组小鼠的死亡率超过20%或肿瘤切除后的平均体重超过15%(自我控制)，则表明药物具有毒性。根据给药后的肿瘤重量抑制率来评价药效，当肿瘤重量抑制率大于30%时，经统计学处理后组间差异有统计学意义，表明受试药物有体征。重复3次，如果疗效稳定，说明药物有一定疗效。注意：肿瘤模型形成需要很长时间，30 40天甚至更长。在异种移植肿瘤实验中，还有另一种直立移植，即根据人体内肿瘤组织或细胞的主要位置，将它们接种到相应的器官中，这不同于正常的皮下接种(异位接种)。28.免疫抑制大鼠被用作移植宿主。实验动物：体重120 160克的Wistar大鼠(如人胃癌细胞株):1只。老鼠被关在单独的笼子里。皮下注射200mg/kg体重的具有免疫抑制作用的阿糖胞苷，全身照射10Gy(1000rad)60Co 2