血涂片制备与染色.ppt

血涂片的制备和染色【目的】掌握血涂片的制备和染色方法。 【原理】将一滴血液均匀涂抹在玻璃板上，单层紧密分布，制成薄的血片。 用含有天蓝b和伊红的Romannowsky系染料染色。 细胞中的碱性物质，例如RBC中的血红蛋白和嗜酸性粒细胞质中的嗜酸粒子等与酸性染料的曙红结合而被染成红色的细胞中的酸性物质，例如淋巴细胞质和嗜碱性粒子等与碱性染料亚甲基蓝结合而被染成蓝色的嗜中性粒子在等电状态下与伊红和美蓝结合，呈淡紫红色实验用品、器材：一次采血针、消毒液、消毒棉棒、清洁载玻片、推进试剂： Wrights (瑞氏)染液、【操作】1 .采血2 .涂膜3 .干燥涂膜4 .标记涂膜5 .染色6 .观察结果表明，部位： WHO推荐中指或无名指尖内侧，耳垂采血受温度影响较大的半岁采血步骤和注意事项：每人必须严格实施一针制的穿刺深度适当，用力按下以免混入组织液，不要影响检查结果。 用消毒干棉球擦去第一滴血，然后流出的血可以使用。 皮肤采血法(毛细血管采血法)、涂层技术是制作血样最常用的技术。 以血样为单层细胞涂片，染色后可以对血液中的各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测定等工作。、和的所有的所有的元素、3045、两个玻璃板的角度适合3045，将两个玻璃板轻轻向前等速进行涂抹血液膜。3 .成片、干燥、满意的血涂片应薄而均匀，头尾清晰，李四，血涂片质量评价、均匀、薄、头尾、边缘、两侧注意：血滴大、速度快、角度大-血膜厚度好的血涂片标准是薄、头尾清晰、细胞分布均匀不良血涂片，4 .印、涂片干燥后，用铅笔在血涂片头部写上姓名和号码，李四123， 5 .血涂片被染色，再洗涤5-8滴瑞氏染色ii液，然后充分混合I液和ii液静置10分钟，直接用流水洗涤至无浮色，涂片水洗干燥后，用油彩镜将白血球分类为100个，李四123、涂膜干燥后，瑞氏染色I液5-8滴将血膜整体分为1个细胞染色具有物理吸附作用和化学亲和作用，细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不同。 因此，如果用本染料液染色，则在同一血液片材上，血红蛋白、嗜酸粒子与碱性蛋白质、酸性染料曙红结果，可见被染成粉红色的被称为嗜酸物质的各种颜色、图瑞氏染色原理示意图、瑞氏-吉姆萨染色、【原理】瑞特染料和吉姆萨染料按一定比例混合染色细胞，其染色原理与瑞特和吉姆萨染色法相同，但染色效果更好。 这是因为瑞士和吉姆萨染色法的优点相结合。 【方法学评价】，瑞氏染液和吉姆萨染液在染色细胞时具有各自的显色特征，前者对细胞质和颗粒着色良好，后者核结构清晰。因此，两者结合可获得长度短、集中优势，用该混合染色液染色血细胞，细胞核、细胞质和细胞内粒子鲜明着色，对比度鲜明。 瑞氏吉姆扎混合染色法是临床上广泛应用的方法。 染色工序，a，涂膜在空气中完全干燥后，滴加几滴Wrights染色液至复盖血液膜，染色1min。 b、滴加等量或稍多的缓冲液，混合，染色5-10分钟。 用流水冲洗染液，用吸水纸吸取，做镜子检查。 【质量控制】，血膜干燥后不染色，染色时容易脱落。 染色时间与染色液浓度、室温和细胞多少有关，一般染色液较薄，染色时间较长有效。 染液太少，不能防止蒸发沉淀。 洗的时候，不要先把染液弄掉。 应该用流水冲洗，防止染料沉淀。 清洗时间也不能太长。 染色过薄，可以再染色。 染色过深可以用水洗涤或浸渍，也可以用甲醇脱色。 【染色结果评价】，正常情况：血液膜外观呈浅橙色。 显微镜下红血球染成粉红色，薄而均匀的地方有碟状感。 白细胞胞质中的颗粒表现出各种细胞特有的颜色，细胞核染成紫红色，核染色质结构清晰。 染色环境的偏酸：红血球和嗜酸粒子变红，白核染色为淡蓝色或未着色，染色酸性pH3.5时，呈红色，白血球上除了嗜酸粒子以外没有着色。 染色环境偏碱：所有细胞呈灰蓝色，微偏碱者红细胞红，白细胞暗。 嗜酸粒子可染成暗褐色，染成黑紫色或蓝色。 中性粒子也被粗染成紫黑色，血膜过厚的地方变成绿色。 6 .血涂片的观察、低倍镜观察1 .染色情况(满足、偏酸、甲碱)2.细胞分布情况油镜下分类数：体尾边界。 油镜的分类一定要进行，不能重复计数。 (合计数100个白血球)、，李四123，体尾边界，理想区域，细胞重叠细胞过于稀薄，理想区域，各种成熟白血球的形态学：中性粒细胞(Ne ) :瑞氏染色血涂膜呈圆形，直径1013m，细胞浆染粉红色，核形一叶(棒状核)到五叶各种各样嗜酸性粒细胞(Eo ) :略大于嗜酸性粒细胞，细胞核双叶多，呈眼镜、八字形，核染色质粗染为深紫红色，细胞内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，在瑞氏染色时呈橙色，具有折射性。 嗜碱性粒细胞(Ba ) :细胞浆中含有大小不同的嗜碱性粒子，在瑞氏染色时呈兰黑。 光学显微镜下常见的细胞浆中有小的空泡，是由于嗜碱性粒子容易溶于水或在功能活动中脱粒所致的核呈淡紫红色，不常见，呈棒状或分叶状。淋巴细胞(Ly ) :细胞呈圆形，直径在615m之间，成人血涂膜多见小淋巴细胞，直径69m，核呈深紫色致密浓染，细胞浆量极少大淋巴细胞细胞浆量多，呈清澈蓝色，可见少量嗜苯胺蓝粒子、细胞核圆或椭圆单核细胞(Mo ) :瑞氏染色涂膜上1220