肿瘤的分子生物学检验PPT课件

.1，1，分子诊断肿瘤Moleculardiagnosisoftumor，李江彬副教授。2，2，2，1节肿瘤诊断的生物标记染色体异常，基因异常，单核苷酸多态性，表观遗传学异常，miRNA第二节肿瘤的分子生物学检测技术第三节肿瘤分子生物学检测的临床应用乳腺癌肿瘤分子诊断和个体化医学。3，3，什么是肿瘤？肿瘤(Tumor)是身体由于各种致癌因子作用，局部组织中的特定细胞在基因水平上失去对生长的正常调节功能，其复制性异常增殖引起的异常病变。学界一般将肿瘤分为良性和恶性两类。4，4、cancervstumor、tumorsaresometimescancrousbutthisdoesnotmeanthattumorsandcancersaresynonyms(asmostpeoplethink.5，5，abnormalcellulargrothtumorsandcanceredifferent . atumordevelopswhenalesionorlump病变或肿块isformedinyourbodydeluetoabnormant，6，6、treatment cancersurgery、chemotherapyandradiiotherapy . tumorremingabgntumorisrelativelyeasysthroughsury、and thes，7，7，7，1节肿瘤诊断用生物标记物：本-主蛋白，截至1846年，100多种肿瘤标记蛋白和核酸两种主要肿瘤相关染色体异常，基因异常，单核苷酸多态性，表观遗传异常，miRNA，8，8，1，在肿瘤相关染色体异常多种肿瘤细胞中发现了染色体异常。1.染色体数目异常：特定癌细胞的染色体共104条，包含很多异常染色体。9，9，2。染色体结构异常有易位、缺失、重复、环染色体、双着丝粒染色体等。例如：Ph染色体(费城1号染色体)、慢性髓系白血病(CML)、9号和22号染色体长臂位置9号肿瘤基因abl和22号bcr基因组合成融合基因增加酪氨酸激酶活性。Ph的临床意义是95%的CML为Ph阳性，可以作为诊断的基础。有时Ph先于临床症状出现，可以用于早期诊断。10，10，第二，肿瘤相关基因表达异常肿瘤基因：sis，VEGF，EGFR，c-myc抑癌基因3360APC，BRCA，p53，Rb细胞周期调控基因：cyclins，CDKs，11，11，3，肿瘤相关的单核苷酸多态性whataringlenucleo depolymorphsms(SNPs)？Snps (pronounced snips )，arethemostcommontypfginticiamongpeople . earchsnprepresentsafferenceinasinglednabuide、12、12、13，13，Snpsoccurnormalthroughpoutaperson sdna。theyoccuronceinevery 300 nucleotidesonaverage，Whichmeans therrerun oughly 10 millonsnpsinthehumangenome . theycanactasbiologicalmage，14，14，mostsnpshavenoeffectonhealth . researchershaefoundsnpsthatmayhelpredictanindividual sresponsetcertdugs，15，15，3，肿瘤相关的单核苷酸多态性SNP :单核苷酸多聚体细胞瘤1。SNP与肿瘤易感基因、肿瘤药物治疗相关基因肿瘤的个体化诊断和治疗2。SNP的研究思路研究对象差异研究技术：PCR，芯片研究难点：样品获取，16，16，4，肿瘤相关表观遗传异常表观遗传：DNA序列保持不变，但基因表达发生遗传变化。这种变化发生在细胞内除遗传信息以外的其他遗传物质上，在发育和细胞增殖过程中，这种变化是稳定的。几乎所有种类的人类肿瘤都有表观异常肿瘤抑制基因甲基化和肿瘤基因去甲基化。异常甲基化经常发生在肿瘤细胞形成的早期。17，17，5，与肿瘤相关的mirnamicrornformationandfunction . flv。18、18、19，19，5，与肿瘤相关的miRNA1.miRNA和肿瘤miRNA及肿瘤发生、发展、诊断、治疗、预后2.miRNA肿瘤标志物研究思路：实体肿瘤、细胞、循环血液、其他研究技术：定量PCR、WCR肿瘤发展过程中长链非编码RNA的位置。21，21，2节肿瘤分子生物学检测技术，肿瘤分子诊断是常用检测标本外周血细胞病变的局部损伤组织DNA或mRNA提取，检测。22，22，肿瘤早期诊断标本的选择和处理(1)选择样品作为早期分子诊断(如体液、分泌物、粪便)的检查样本。(2)样品处理：血浆DNA获得不输血血浆(Cellfreeplasma):重复离心：EDTA抗凝剂41500rpm20min上血浆萃取 3000 rpm 10分钟。以多种方法提取循环DNA，包括磁非主流法和QIAampDNAminikit。23，23，循环DNA定量检测方法早期检测方法：二苯胺法、溴化b锭法、对流免疫电泳、RNA-DNA杂交新检测技术：辐射免疫法、实时荧光定量PCR法等。24，24，新的检测标记：血浆DNA是什么(血浆DNA)？细胞外脱氧核糖核酸(extracellularDNA，又称为循环脱氧核糖核酸)，由单链或双链脱氧核糖核酸(DNA)及其混合物构成，主要以脱氧核糖核酸(DNA)蛋白质混合物的形式存在，但也有一些自由脱氧核糖核酸(DNA)。25，25，以血浆DNA为检查对象的优势循环DNA来自外周血浆或血清，比组织标本更容易获得，可以进行无创检查。DNA比RNA和蛋白质更可靠，不可分解，更适合用作受检查的分子。可以放大，检测灵敏度高。越来越多的证据表明疾病(尤其是肿瘤)患者的循环DNA存在和质量变化。26，26，cell-freednaresuscitatedfortumortestingnaturemedicine 14，914-915 (2008)，27，27，肿瘤分子诊断的一般方法，以分子杂交和PCR为核心技术的DNA为主要检测对象1。病原基因结构异常检测2。基因转录水平检测3。基因序列分析和表达检测，28，28，28，肿瘤分子诊断的一般方法，染色体数目异常荧光原位杂交，fish。29，29，病原基因结构异常检测(1)双杂交(2)等位基因特异性寡聚核苷酸探针杂交(allele-specificoligonucleotide，ASO)()，30，30，病原基因表达异常检测(1)mRNA检测定量PCR(2)蛋白质检测免疫组织化学：定性，半定量，定位Westernblot:定量，定位。31，31，3节肿瘤分子生物学检查临床应用乳腺癌。32，32，1，乳腺癌女性发病率高，5%-10%家族性。90%的家族性乳腺癌与BRCA1和BRCA2基因突变有关。BRCA1突变可以发生在所有细胞中，如果发生在精子或卵子中，就可以传到下一代。其他相关基因：p53、PTEN、c-myc、端粒酶等。论文指南： astrontgaridatforthebreakstandovarian卵巢cancersusceptibilitygenebrca 1http:/www . scienc mag . org/CGI/rapid pdf/266，33，33，Brca 1 Brca 1(early onset early)isahumantumorsuppressorgene抑癌基因，whichproducesaprotein，Calledbreakstcancertype，34，34，Mutationsandcancerriskcertainvariancationsofthebrca 1 geneleadtoanicreasedriskforbreakstcancer . researchiershaveneidesincreadyriskofdlopine goverarincancerisabout的55% forwomen withabrca 1 mutationsandabout 25% forwomen withsbrca 2 mutations。35，35，thesemputionscanbechangsinoneorasmallnumberofdnabsepairs . thosexcutionscanbeidentifiedwithpcrandnasequence . ottsnewmethodshavebeen nrecontlyproposed : heteroduplexanalysis isource double chain analysis(HDA)多毛细管电泳oralsooligonucletidesis.36，36，researchersbelievenhedefectebrc 1 proeinisunabletohelptmutationsthatoccurinothergenes . thesedefectsacumulatiandmens，37，37，37，女性第一位的常见恶