实验室实习报告

西安交通大学机械学院实验室实践报告陈法师21300101001一、依靠部门：单位名称：先进制造技术研究所研究方向：生物3d打印责任教师：甚至秦秦硕士课程指导：毛伟时间和地点：7月3日至7月14日；生物制造实验室二、认知内容和方法：1.了解研究方向、研究项目和研究项目的特性结果、实验室或研究组。2、为了帮助理解科学研究的基本方法、基本过程，对研究工作的审查或适当参与。三、与实验相关的实验名称：无菌手术和细胞培养实验过程：准备实验仪器(1)蓝色盖瓶：洗净洗涤剂，洗净自来水，放入烤箱干燥后，戴上酸性手套，捞出蓝色盖子瓶，用纯净水冲洗，放入烤箱烘干盖上瓶盖，用锡箔包住瓶盖，用高压蒸汽灭菌消毒后取出，放进烤箱烘干，然后放入紫外线灯保管箱准备。(2)吸管完整的液体移动周期：安装总头、设置容量、预洗头、吸气、液体排出、抽吸头拆卸枪头：10 L，100 L，1000 L，全部使用一次性用品后丢弃。用于回收5毫升和10毫升的枪头的东西被扔在超声波清洗机里。组装吸管头：将吸管垂直插入进气口，左右旋转并拧紧半圈预洗头：为了高精度，应事先吸附一次样品溶液，然后正式转移液体。这是因为在吸收血清蛋白质溶液或有机溶剂时，吸头内壁留下了“液膜”，排放量少，可能产生误差。高温和低温不适合洗涤。浓度和粘度大的液体可以通过实验方式确定产生误差和消除误差的校正程度，校正量可以通过改变调节旋钮读取窗口中的读数来设置。吸收有机溶剂或高挥发性液体，挥发性气体形成白色套管室内的负压，产生泄漏，4-6次预清洗，白色套管室内的气体饱和后，负压自动消失(3)超净站使用前准备：根据实验要求，准备各种必要的设备和物品，清点完毕后，放在营业场所(培养室、超清洁站)后开始消毒。奥诺消毒：初顺工作台台面台面在每次实验前要用75%的酒精擦洗。然后紫外线照射30分钟。工作台上消毒时，不要将培养细胞和培养液同时暴露在紫外线下，消毒时不要过度或重叠放置工作台上常用用品。否则会遮住射线，降低消毒效果。手和服装：戴手套，操作前用75%的酒精消毒手。实验过程中，如果碰了有污染可能性的东西或出入培养室，就要用消毒药洗手。要进入初级培养室，必须彻底洗手，戴口罩。火焰消毒：先打开酒精灯。酒精灯中加入了绝对乙醇。太多或太少的话，加到2/3也可以。今后所有的工作，例如安装吸管帽、打开或关闭瓶子，都必须在靠近火的地方燃烧。措施：培养时，动作要准确、敏捷，但即使不太快，也能阻止空气流动，增加污染机会。杀菌的器皿不能用手触摸，接触后要用火焰消毒或带备用零件更换。为了方便存取，工作台上的用品要有合理的布置，原则上右手使用的要放在右边，左手用品放在左边，酒井灯放在中间。工作从头到尾要保持一定的顺序性，在组织或细胞无法处理之前不要太早暴露在空气中。准备实验材料：1、海藻酸粉末紫外线照射12h2、用去离子水制备3.5%的嗪ate组成3，4 A4、预热培养液、PBS溶液和胰蛋白酶5、从培养基中去除细胞图1:混合聚合物溶液细胞继代培养过程：准备上一代：1)。预热培养液：将培养液、PBS液、胰蛋白酶已经准备好的瓶子放在37 的水中锅里预热。点燃酒井灯。准备要使用的无菌培养皿或培养瓶。去除预热后的培养液：去除预热后的培养液，用酒精棉棒擦拭后，可放入超高台面。3)从培养箱中取出细胞：不要把培养皿倒放，用酒精棉棒擦拭显微镜的台面，在镜子里观察细胞。打开瓶口：在酒井灯上逐个打开瓶盖消毒。胰蛋白酶消化；1)添加消化液：最好注意吸收旧的培养液，然后用PBS清洗，添加适量的胰蛋白酶溶液复盖细胞。2)用显微镜观察细胞：反过来用显微镜观察消化细胞。当细胞质再次收缩时，细胞之间不再连接，表明此时细胞适当消化。3)吸收消化液，添加培养液：扔掉胰蛋白酶溶液，更换吸管，添加新鲜培养液。分散细胞法语：1)。飞：用滴管吹已消化的细胞，制作细胞悬浮液。2)将细胞悬浮吸入离心管：将细胞悬浮吸入10ml离心管。3)。平衡离心：平衡后，将离心管插入台式离心机，1000转/分离心3-5分钟。4)扔掉上等液，添加新培养液：扔掉上等液，添加2毫升培养液，用滴管轻吹细胞，制作细胞悬浮液。图2:分散细胞吹稀释细胞分离：1)。化妆：将细胞悬浮液吸入2-3个培养瓶，放入适量的培养基，盖上瓶盖。图3，4，5:化妆的细胞2)用显微镜观察细胞：用显微镜观察细胞量，一定要计数。密度太低会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度必须在5105/ml以上。最后要做好标记。细胞数：66细胞浓度(细胞数/ml)=4个大方框中的活细胞数/4104稀释倍数=16.5104继续培养：图6:培养皿中细胞粘附的生长图7:细胞被海藻酸钠包着细胞冷冻保存实验过程：(1)冷冻保存前一天交换，细胞形态好及无公害培养瓶交换。(2)冷冻储藏箱中的液体是异丙醇，5次冷冻储存后更换。4 预冷。(3)混合消化液，消化细胞，完成消化后，离心分离1000 r/min 5分钟，加入添加4 4预冷冷冻保存液的沉重悬浮液，将细胞浓度调整为(1-2) 106-107/ml。(5)细胞悬浮在2ml冷冻保管管中各1-1.5ml；密封冷冻保管喷嘴，贴标签(6)放入4度预冷程序式冷却箱，取出-80度冰箱过夜，然后放入液氮罐。慢慢冷冻，快速融化。细胞复苏实验过程(对设备故障引起的理论理解):细胞恢复的原则快速熔化：在冻结的存在196的液氮中的细胞迅速融化到37 ，在细胞外冻结时的冰晶快速融化，在冰晶慢慢融化时进入细胞并重新结晶，防止细胞受损。l实验前准备：1)。将浴缸预热到37 ，培养液预热到37 ，然后将5毫升放入灭菌离心管。2)。用75%的酒精擦拭超高台，30分钟的紫外线照射。3)。将消毒好的离心管、吸管、培养瓶等依次放在超清洁工作台上。l拆卸冷冻保管管：1)。根据细胞冻结保存记录，按标签查找所需细胞的编号。2)从液氮瓶中取出细胞盒，移除所需细胞，同时检查管外号码。l快速解冻：1)。将冷冻保管管迅速投入预热后的浴缸，快速解冻，快速融化管内的液体。2)大约1-2分钟后，冷冻保管管中的液体完全溶解，用酒精棉棒擦拭冷冻保管管的外墙，然后放入超高台面。吸取细胞悬浮液，添加到准备好的37培养液中。l平衡离心：用车床天平平衡后，将1000 r/min离心3 min插入离心机。l细胞悬浮液的制备：1)。吸上等额。2)在离心管中放入10毫升培养液吹制细胞悬浮液。l细胞数：细胞数和活性检测：估计为0.1 ml和0.4%的蓝色0.1 ml，混合，2-3分钟。在计数板边缘，轻轻添加10 L染色的细胞悬浮液，使其充满计数板和复盖板滑动之间的空隙。4在显微镜下，计算出四个大方块中的活细胞(透明的、未着色的)和死细胞(细胞核是蓝色的)总数，然后计算如下：细胞浓度(细胞数/ml)=4个大方框中的活细胞数/4104稀释倍数细胞活力=活细胞数/(活细胞数死细胞数)100%数的时候，大方块末端的基尔线细胞数不清，数不清，数不清，数不清。Vii .培养细胞将符合细胞数要求的细胞悬浮液分到培养瓶中，将培养瓶放入37 和5% CO2培养培养2-4小时(或24-48小时)后，液体交换时间由细胞条件决定。初学者容易出错：1浴缸未预热或未预热到37 。2.浴缸里冷冻保管管太多，传热不好，融化时间变长了。3.离心前如果忘记平衡，离心机就会受损，细胞也会丢失。4.一次复活的细胞太多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。实习的感觉这次实习让我了解了研究室的一些相关实验，还掌握了一些仪器操作的基本知识，扩大了我的视野。过去，我认为