细菌与病毒的病原学检查法ppt课件

第7章细菌和病毒病原学检查法、诊断方法：形态学检查、分离培养和鉴定检查、抗原检查、基因序列检查、抗体标本的采集和运输：无菌操作部位时间用抗生素前的血清：急性期，提前检查：冷藏运输、标记，第1节细菌感染的微生物学检查法之一， 细菌学诊断形态学检查1 .普通光学显微镜检查法：2.暗视场显微镜检查法：活菌、线圈体及其动力检查3 .荧光显微镜检查法：病原菌的分离培养生化学试验血清学检查：玻璃片凝集试验动物实验：毒性、致病性毒性检查： LD50、ID50、毒素药物敏感性试验：纸片扩散法二， 病原菌成分抗原检测：凝集试验，对流免疫电泳，酶联技术，免疫荧光技术核酸检测：1.核酸杂交技术：Southern印迹杂交，Northern印迹杂交，原位杂交2.PCR技术3 .基因芯片4.16rRNA基因序列分析： rRNA 编码可变区三、抗体检测(血清学诊断)凝集试验：直接、间接、协同、凝集沉淀试验：环状、棉状、双向、对流电泳补体结合试验：酶联免疫吸附试验(ELISA ) :采取两部分血清，抗体有效价值比早期提高4倍以上。 第二节病毒感染的微生物学检查法，一、形态学检查1 .电镜直接镜检查法： 107颗粒/ml，电镜观察病毒颗粒形态和结构免疫电镜法(IEM ) :标本特异抗体病毒颗粒聚集电镜观察轮状病毒粪便，HAV、HBV血清，疱疹病毒疱疹液，可早期诊断。 2 .用光学显微镜检查痘病毒，观察封入体，CPE，2 .病毒分离培养的方法1 .动物接种常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、猴子等； 接种途径：皮下、皮内、脑内、腹腔、静脉等接种； 观察：动物出现感染症状，取病变组织进一步检查，2、鸡胚培养：孵化914天的鸡胚接种途径为绒毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊腔、卵黄囊。 鉴定：凝血和凝血抑制试验、尿囊腔接种、羊膜腔接种、蛋黄囊接种、绒毛尿囊膜接种、3、组织培养器官培养、组织培养、细胞培养：单层细胞培养、浮游细胞培养； 原代细胞培养：由新鲜组织制备的二倍体细胞：二倍体性质，传输4050多岁，人胚肺成纤维细胞传代细胞系：由突变的二倍体细胞或肿瘤细胞制备的HeLa细胞、三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标细胞的变化： CPE红细胞吸附(HAd ) :红细胞凝集：病毒干扰作用：风疹病毒、埃雷中和试验(NT ) :病毒在生物体内或细胞培养中被特异抗体中和而失去感染性的试验空斑形成试验：食斑形成单位(PFU )，感染性病毒滴度以PFU/ml表示。 四、病毒成分病毒抗原检测： HIV和HBV抗原病毒核酸检测，ABCA :未感染成纤维细胞。 b :单纯疱疹病毒感染后使细胞变圆。 c :呼吸道合胞病毒感染后出现细胞融合。五、病毒抗体检测：中和试验：阳性：过去可能有隐性感染，可用于流行病学调查。 补体结合试验：用已知病毒可溶性抗原检测患者血清中有无相应抗体，作为近期感染指标。 血凝抑制试验病毒红细胞凝固现象病毒抗体红细胞凝固现象消失用于流感病毒、流感病毒的诊断、流行病学调查以及病毒类型和亚型的鉴定。 ELISA法： HSV、CMV、EB病毒等蛋白印迹技术：利用已知病毒蛋白检测未知病毒，总结细菌感染