临床输血前免疫血液学检查

临床输血前免疫血液学检查一、输血前检查的目的和要求输血前检查的目的是选择与患者血型相匹配的各种血液成分，使其能够在患者体内有效存活而不产生不良反应，从而达到安全有效输血的目的。二、输血前检查的内容输血前检查的内容包括以下几个方面：1.病人的病史和标本的检查、核对和处理。2.受体和供体的ABO和Rh血型鉴定。3.不规则抗体的筛选和鉴定。4.交叉拟合测试。5.血小板输注前的抗体检测和配合试验。6.交叉配血结果报告和发血。(一)患者的病史和标本检查、检查和治疗1.病史数据和信息受血者的相关资料，包括受血者的姓名、年龄、性别、床号、种族、临床诊断、输血史、药物史、妊娠史，尤其是既往输血反应记录等。有助于解决可能的血清学问题。2.样本要求要求时限不超过3天。重复输血的受血者应注意抽取新的血液样本进行配型试验，以避免因召回反应而漏检抗体。如果患者接受肝素治疗，则使用鱼精蛋白来凝结样本。如果患者接受葡聚糖治疗，应注意清洗红细胞。(2)受体和供体的ABO和Rh分型1.ABO分型的最佳反应温度为4，但室温下反应良好，因此常规ABO分型试验只能在室温下进行。(1)分型方法：阳性和阴性试管离心仍被认为是最可靠的ABO分型方法。1)分型试剂：一些ABO血型诊断试剂是通过混合人血清制备的，但必须满足以下条件：第一，高滴度的IgM抗-A或抗-B(1:128)。其次，它具有良好的亲和力，不含冷凝集素。第三，必须具备检测A2和A2B血型的能力。第四，血清必须通过艾滋病毒、丙型肝炎病毒、HBV病毒和其他测试或被病毒灭活。其他ABO分型试剂由来自培养细胞系的单克隆抗体制成。2)ABO亚型的鉴定：通常使用以下试剂来鉴定ABO亚型：抗-A、抗-B、抗-A1、抗-H、抗-AIA1红细胞、A2红细胞、B红细胞和O红细胞。一些工作人员通常选择在型式试验中应用抗-抗体抗血清，以避免将弱反应性的A型或B型红细胞错误地归类为O型。通用抗-抗体试剂可增加Ax型红细胞的凝集反应强度。(2)ABO血型鉴定中的常见问题：这种不一致的主要原因是：1)技术和管理错误：这是ABO分型结果异常的主要原因，包括：标本或试剂错误；设备不干净；试剂污染或失效；离心过度或不足；不承认由阳性反应引起的溶血。试剂泄漏；结果被错误地记录或判断；细胞和血清的比例不合适。2)血清异常：血清蛋白导致货币存款的形成，影响抗凝结果。3)红细胞致敏：被免疫球蛋白致敏的红细胞可在含高蛋白培养基的试剂中凝集。4)基因型异常：在ABO亚型检测中，抗原A和B可能是弱抗原，难以检测。5)近期输血：试验前输入了不同血型的血液，使血样变成混合血型的红细胞悬液，凝固时出现“混合外观凝集”现象。6)嵌合血型：该血型体内有两种类型的红细胞群，在凝固过程中会出现“混合外观凝集”现象。7)疾病因素引起的抗原衰减：在一些白血病患者和难治性贫血患者中，ABO血型系统的抗原性可能受到抑制，检测困难。8)红细胞的多聚调节：由于遗传或获得性表面异常引起的红细胞的多聚调节。9)获得性乙型：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“乙型”活性。10)血型特异性物质过高：在一些卵巢囊肿病例中，血型物质的浓度很高，可以中和11)在不久的将来将进行大量的血浆交换处理：由于大量的非相同血浆用于交换处理，样本的血清含有供体提供的抗-A或抗-B抗体，导致抗-分型错误。12)血浆蛋白异常：受试者血浆中白蛋白、球蛋白比例异常，纤维蛋白原浓度高，导致形成麻点，导致假凝集。13)不规则抗体的存在：受试者的血浆中含有除ABO血型抗体之外的不规则抗体，其与试剂红细胞上的其他血型抗原系统的抗原反应。14)低丙种球蛋白血症：由于免疫球蛋白水平降低，当血清凝固时，低丙种球蛋白血症(丙种球蛋白量减少)可能不会凝集或弱凝集。15)药物等因素：药物、葡萄糖中毒和静脉注射某些造影剂可导致红细胞凝集或类似凝集。16)年龄因素：对免疫系统尚不健全的婴儿、母亲被动获得抗体的婴儿或抗体水平下降的老年人进行检测时，可能会出现异常结果。17)保存因子：患者可能含有针对保存剂或悬浮介质中成分的抗体，导致ABO分型错误。2.RH (d)分型和分型试验中应注意的问题Rh分型主要鉴定d抗原(IgG抗d和IgM抗d)。(1)Rh血型鉴定中可能出现假阳性的原因：1)受试细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清含有导致红细胞凝集的因子。2)待测细胞与抗血清孵育时间过长，高蛋白固定剂会导致凝胶形成。3)样本未适当抗凝。检查过程中出现凝血或小纤维蛋白凝块，被误判为阳性。4)分型血清含有其他未预先检测到的特异性抗体，导致分型结果为假阳性。5)多个凝集细胞导致定型假阳性。6)识别设备或抗血清被污染，导致假阳性。(2)假阴性的可能原因1)被测细胞悬液浓度过高，与抗血清不成比例。2)漏加或误加血清。3)定型血清的使用方法错误，没有按照说明操作。4)离心后重悬细胞钩时，振动力过大，弱凝集分散。5)抗血清保存不当会导致失败。(3)弱D (Du)血型及其鉴定；杜抗原是RhO(D)的弱抗原。这种抗原通常不会与大多数盐类抗-D试剂产生直接凝集反应，但通过间接抗-球蛋白试验与某些IgG抗-D血型产生阳性反应。因此，当我们第一次获得Rh阴性结果时，我们必须进行Rh阴性确认试验，即三个不同批次的IgG抗-D定型。如果所有的样本都是阴性的，我们可以认为被检者是Rh阴性，否则，只要有一批是阳性的，我们就可以认为是杜型。3.弱D型(杜型)的临床意义虽然杜弱于正常的D-阳性细胞抗原，但在输血给Rh阴性受体后，自然有可能产生抗-D免疫。同时，如果Rh阳性细胞被接受，杜型人也可能产生抗-D抗体。因此，作为供体，Du型被归类为Rh阳性，而作为受体，Du型被归类为Rh阴性。(3)不规则抗体的筛选和鉴定1.目标和原则应当对受者的血清和血浆进行常规抗体筛查试验，以发现临床上显著的不规则抗体。所谓的不规则抗体是指除抗甲和抗乙外的血型抗体抗体筛查试验可以在交叉配型试验之前进行，也可以与交叉配型试验一起进行，这有利于早期识别患者的抗体和临床上有意义的抗体，避免因某些可能的情况而延误病情。抗体筛选试验的原理是让受试血清与已知血型的试剂红细胞(即筛选的红细胞)反应，以发现在37下反应的抗体。2.抗体筛选和鉴定技术抗体筛选试验中使用的试剂筛选红细胞，通常是2或3个人体部分的O型红细胞成为一套试剂。每组试剂至少用下列常见抗原筛选红细胞、C、E、C、E、M、N、S、S、P、Le抗体筛选试验可能无法检测出所有具有临床意义的抗体。一些针对低频抗原的抗体或具有剂量效应的抗体可能会被遗漏。此时，应安排抗原性更完整、特异性更强的筛选细胞进行检测，或采用更敏感的技术进行检测。一旦检测到抗体，应进行抗体鉴定试验以确定其特异性。抗体鉴定实验包括以下主要内容：(1)自细胞检查：观察患者(受体)血清和患者(受体)自身细胞之间的反应，以确定血清中是否存在自身抗体或同时存在自身抗体和同种抗体。(2)使用试剂细胞中的光谱细胞和各种抗体检查技术来检测患者的血清并确定其抗体的特异性。试剂光谱细胞通常由8-16个已知血型的O型红细胞组成，并具有各种抗原成分。常见的抗体通常可以根据光谱细胞的反应模式来识别。不同的特异性抗体可以通过选择不同的光谱细胞来鉴定(3)当患者体内有两种或两种以上同源抗体时，可采用吸收和发射试验。对于抗体鉴定，必须灵活应用盐水试验、白蛋白培养基法、酶技术、抗球蛋白试验、低离子强度培养基法(Liss)、凝聚胺法和凝胶法等多种技术，结合吸收扩散等血清学手段，分析抗体的特异性。(4)为了对光谱细胞的反应结果有一个正确的解释，我们必须首先了解一些特定抗体的血清学特征，然后分析反应结果。在确定抗体特异性时，可以综合使用以下数据：1)观察被测血清与各试剂光谱池之间的反应结果。2)观察被测血清与其自身细胞之间的反应结果。3)观察测试血清和酶处理细胞之间的反应结果。4)观察反应模式并检查每个反应阶段的结果，包括不同的温度、悬浮介质或酶作用。一些抗体的特异性与反应介质直接相关。5)是否有溶血。6)反应强度是否不同，阳性细胞是否存在剂量效应。7)详细检查红细胞上的抗原，并指出缺少抗原是否有相应的抗体。(4)自身抗体患者的血清学检查患者血清中的不规则抗体可分为两种类型：一种是同种抗体，另一种是自身抗体。自身抗体可分为冷自身抗体和热自身抗体。1.患者血清中自身抗体的几种情况及其对血清学试验的影响1.1冷自身抗体冷自身抗体是一种常见的自身抗体，通常为IgM抗体，可在盐水介质中与红细胞反应。理论上，任何在37下不与自身红细胞反应，但在37下只能与自身红细胞反应的抗体都可以称为冷自身抗体。事实上，大多数冷自身抗体只能在非常低的温度(例如4)下与自身细胞反应。因此，尽管大多数人的血清中含有冷自身抗体，但它们不会与自身细胞发生反应，也不会对体温造成任何不利影响。在罕见的病理情况下，患者的血清具有极高滴度的冷自身抗体，并且它还可以在相对较高的温度下(例如室温)与自身细胞反应。这种情况会对患者血样的分型和相关的血清学检测产生很大影响，有时也会对输血产生一定影响。1.2温度自身抗体温热自身抗体是指在37时能与自体红细胞反应的抗体。当患者的血清中含有温热的自身抗体时，患者通常会出现贫血或溶血症状。温热自身抗体可分为两种类型：大多数情况下为lgG温热自身抗体，少数情况下为IgM温热自身抗体。患者血清中存在温热的自身抗体会使获得血清学上相容的输血变得困难。然而，在这种情况下应该特别小心，因为自身抗体可能会掩盖同种抗体的存在，并且同种抗体引起的输血反应可能是致命的。因此，如果时间允许，输血前应排除自身抗体的影响，以确定是否存在同源抗体。2.自身抗体的治疗及相关血清学检查2.1冷自身抗体的血清学检查当怀疑患者血清中存在冷自身抗体时，可进行以下必要的检查：(1)如果患者血清中的抗体在室温下(约22)不与任何红细胞发生反应，则该抗体可被认为没有临床意义，不需要进一步检测。(2)如果患者的血清在室温下与自身的红细胞发生反应，应首先确认抗体的冷反应性抗体特征。患者血清凝集的红细胞可分别置于37水浴和4冰箱中。当凝集在37完全分散，在4显著增强时，该抗体可视为冷反应性抗体。(3)排除同种抗体，由于自身抗体可以掩盖临床上显著的同种抗体，因此有必要确认血清中是否存在不与自体细胞反应的同种抗体。确认的方法是用自己的红细胞在4进行吸收试验。(4)在患者最近失血或红细胞不足的情况下，很难进行冷自身抗体吸收试验。此时，同样的抗体筛选和鉴定试验可以在37的严格条件下用抗球蛋白试验方法进行。2.2温自身抗体的血清学检查大多数温热的自身抗体都是IgG型抗体，因此在患者的直接抗体试验中抗IgG抗体通常是阳性的，并且血清中的抗体不会与自身或在盐水介质中的试剂红细胞发生反应。(1)血清中是否有温热自身抗体在许多患有温热自身抗体的患者中，所有的温热自身抗体都被自身的红细胞吸收，因此在他们的血清中没有可检测到的温热自身抗体。只有当红细胞对热自身抗体的吸收达到饱和时，患者血清中才会出现热自身抗体。(2)自动吸收法排除了相同的抗体当患者血清中有强烈的温热自身抗体时，温热自身抗体可能掩盖同种抗体的存在。这时，可以用自动吸收法来测定同种抗体。温自身抗体吸收试验的方法是：通过扩散的自身细胞与自身血清在37反应约30分钟来检测自身吸收是否完全。当被吸收的上清液不与自身抗体已被完全去除的自体细胞反应时，证明自身吸收是完全的，并且可以进行同源抗体的进一步检测。(3)通过同种细胞吸收法消除同种抗体自身抗体可以被同种异体细胞吸收，但是同种异体细胞也可以吸收可能的同种异体抗体。(4)稀释技术当同种抗体的滴度高于现有自身抗体的滴度时，可以适当稀释患者的血清以消除自身抗体的干扰并确定同种抗体的特异性。(5)交叉匹配试验1、交叉配血试验的原则和方法1.1原则除了在非常紧急的情况下，患者(受血者)必须与献血者(待输血者)交叉配血，这与输血前再次确认受血者和献血者的ABO血型的相容性一样重要。然而，为了确保安全输血，仅使受体和供体与ABO血型相容是远远不够的。有必要确保受体血清中没有抗体能立即或延迟凝集和/或溶解输入的红细胞。IgM和IgG抗体都能溶解体内输入的红细胞。这种抗体被称为具有临床意义的抗体。献血者(待输血)不应有凝集和/或溶解受血者红细胞的抗体。简而言之，输血前必须进行交叉配型试验。交叉匹配测试包括一次侧交叉匹配和二次侧交叉匹配。主要交叉配型：例患者(受体)血清(血浆)献血者(待输)红细胞；二次交叉配型：献血者(待输)血清(血浆)患者(受体)红细胞。应注意：(1)用于交叉配血的患者(受血者)血样应为刚抽取的新鲜血液，而不是患者的旧血样。要输入的样