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仪器分析实验分子荧光分析法,MolecularFluorimetryForshort:M-F,一、分子荧光分析法简介,(对光的吸收),发生激发态反应,分子内的激发和衰变过程,1.1荧光的产生,激发态能量的跃迁与转化的形式和速率：A1,A2吸收:10-15sVR振动松弛：10-12sic内转化：10-11sisc系间窜越：10-610-2sF荧光：10-910-6sP磷光：10-6100s,激发光谱,发射光谱,1.2荧光光谱任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发射光谱。,组成、结构与衍化信息物质的化学结构环境与介质条件与其它溶质的相互作用反应动力学,1.3荧光定量,F=KI0fCI0：光源强度；f：荧光量子产率；C：荧光体浓度）,1）影响相对荧光强度的因素有哪些？2）试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。,?,问题：,（注意：在一定浓度范围内适用）,1.4荧光仪的基本构造,？问题：荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置上有什么不同？为什么？,1.5分子荧光分析法的应用简介,常规分析应用：定性分析：f；ex；em；峰形等定量检测：F=KI0fC其它（略）高端生化研究：分子相互作用研究；代谢动力学跟踪；显微成像（物理迁移与化学衍化的原位“显迹”）,二、维生素B6注射液中维生素B6含的荧光法测定,2.1实验原理,在近中性的水溶液中有较强的荧光发射:（323nm/392nm附近）,在碱性介质中不稳定,易发生光降解,VB6的化学结构,2.2实验流程,、试液配制,、VB6的荧光光谱的绘制,、标准工作曲线的制作,、未知液的配制,2.3注意事项：,注射液的移取与稀释,系列标液的测定顺序,即放即测，防光降解,荧光仪的开关机顺序,2.4数据处理,从荧光光谱图上读出最大激发（ex）和发射波长（em）用标准工作曲线法算
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