动物细胞培养、核移植、动物细胞融合(S)

动物细胞工程四大基本技术：,动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等。,动物细胞培养技术是其它动物细胞工程技术的基础。,一、动物细胞培养,2原理：,细胞增殖,1、概念从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬浮液,10代细胞,传代培养,不死细胞,单个细胞,加培养液,动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。,分瓶传代培养,原代培养,细胞贴满瓶壁,胰蛋白酶,3、过程：,原代培养：,几个概念,将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养。,通常将动物组织消化后的初次培养。,传代培养：,细胞的接触抑制,细胞贴壁,（1）、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（2）、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素、动物血清、血浆等。）（3）、温度和PH36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。（4）、气体环境O2和CO2（95%空气和5%CO2）,补充合成培养基中缺乏的物质,4、动物细胞培养条件,5、动物细胞培养技术的应用,生产生物制品：疫苗、干扰素、抗体等。作为基因工程中的受体细胞。检测有毒物质及毒性。,科研方面：筛选抗癌药物、治疗和预防疾病等。,细胞的全能性,细胞株、细胞系,植物体,培养结果,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清、血浆,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,1.下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是A培养液通常含有蔗糖、氨基酸、无机盐、生长因子和动物血清等B原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞C动物细胞培养一般能够传到4050代，其遗传物质没有发生改变D动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身健康细胞,A,供体细胞（供核）,细胞培养,体细胞,卵巢卵母细胞（M中期：供质）,去核,无核卵母细胞,注入,细胞融合,重组细胞,重组胚胎,胚胎移植,代孕母体,生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛,1.核移植共分成两大阶段：,3.通过显微操作法去卵母细胞中的核。,二.核移植过程,2.取卵细胞作受体细胞的原因是:,体积大,易操作；卵黄多，营养物质丰富等。,核移植和胚胎移植。,依据：动物细胞核具有全能性,三、动物细胞融合（细胞杂交）,1、概念：,指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,2、结果：,形成单核的杂交细胞,3、原理：,细胞膜的流动性,4、诱导融合方式,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇（PEG),生物法：灭活的病毒,灭活:使病毒或细菌失去感染能力，但不破坏它的抗原结构。,5、过程：,动物细胞A动物细胞B,诱导，融合,融合细胞,杂交细胞,筛选,6、意义：,打破不同种生物间的生殖隔离(克服了远缘杂交的不亲和性)。,7、应用：研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤等，特别是利用杂交瘤技术制备单克隆抗体.,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,培养液中细胞有几种类型？（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？,骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B淋巴细胞-B淋巴细胞B淋巴细胞-骨髓瘤细胞,多种杂交细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠腹腔,体外培养,单克隆抗体的制备过程,第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。,第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,该细胞既能产生专一抗体又能无限增殖。,杂交瘤细胞有何特点？,特异性强，灵敏度高,产量大,注意：对小鼠做何处理？,注射特定的抗原蛋白，获得产生单一抗体的B淋巴细胞。,制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？,两次筛选目的分别是,第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,细胞融合技术、细胞培养技术,小结：单克隆抗体制备过程,B淋巴细胞骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择性培养基,杂交瘤细胞（B-瘤细胞）,克隆化培养,抗体检测,产生所需抗体的杂交瘤细胞,体外培养,单克隆抗体,单克隆抗体的优点和应用,单克隆抗体的优点强，高，大。单克隆抗体的应用：作为诊断试剂：准确识别各种物质的细微差别，并跟的结合，具有、的优点。用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗，可制成“”，也有少量用于治疗其他疾病。,特异性,灵敏度,产量,抗原,一定抗原发生特异性,准确高效简易快速,癌症,生物导弹,（导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）（位置准确、疗效高、副作用小）,形成杂交细胞，以生产细胞产物,获得杂种植株,结果,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振荡、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,细胞膜的流动性、细胞增殖,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,融合前处理,用纤维素酶、果胶酶去壁,注射特定抗原，产生免疫反应,1、下列是应用动物细胞工程技术获取单克隆抗X抗体的具体操作步骤，对单克隆抗体制备的相关叙述不正确的,将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的B淋巴细胞,从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞,利用促细胞融合因子使两种细胞发生融合,将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔培养,筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞,从腹水中提取抗体,A实验顺序应当是B过程中产生的多个杂交瘤细胞也称为克隆,C过程获得的细胞均可无限增殖,D到的过程中通常要经过两次筛选,C,2(11韶二模双选)对下图的分析，正确的A若上图表示基因工程的操作流程图，则C表示重组质粒，D是受体细胞,AD,B若上图表示单克隆抗体的制备，则A是经过免疫的T淋巴细胞，B是骨髓瘤细胞C若上图表示动物体细胞核移植过程，用胚胎分割技术可获得多个性别不同的克隆动物DD若上图表示植物体细胞杂交过程，则从C到D需用的技术是植物组织培养,B项：A是经过免疫的B淋巴细胞，B是骨髓瘤细胞；C项：胚胎分割技术属于无性生殖，形成的个体性别相同。,3.（双选）请据图判断，下列说法不正确的是,BC,A若a，b分别对应为骨髓瘤细胞和效应B细胞，则d能产生单克隆抗体是b的遗传物质选择性表达的结果B若d形成有性杂交后代，则a和b融合形成d的过程叫体细胞杂交C若d形成无性杂种植株，则采用了细胞工程中的核移植技术D若d形成无性杂种植株，由于杂种细胞具双亲叶绿体，则可能培育出比有性杂交品种光合作用性能更好的植株,有性杂交是通过爱情作用实现的,细胞工程中的体细胞杂交技术,4下列关于利用细胞工程技术制备单克隆抗体的叙述