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实验2分离以尿素为氮源的微生物,一.实验原理,尿素NH3中性碱性酚红颜色：(酸性)黄色红色,(变色范围pH6.4-8.2),二.实验目的,使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶),通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化学反应),三.实验步骤,.倒平板,.制备一定浓度梯度的细菌悬液,g土壤ml无菌水，振荡，为-2稀释液，依次制备-3、-4、-5的土壤稀释液。,.稀释涂布分离法分离细菌,.制备无菌的固体培养基和尿素固体培养基P26,.培养观察（倒置，3724-48h）,（无菌，0.1ml，玻璃刮刀）,配制培养基,尿素培养基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g琼脂糖0.5g酚红0.25g尿素10ml,选择培养基,实验组,为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？,接种,取0.1ml菌悬液,涂布分离,涂布分离,37倒置培养,按浓度捆成一摞,恒温37培养,1、为什么要用琼脂糖代替琼脂配置固体培养基,因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂,思考题：,2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用,土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与SO42-等离子形成化合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。,3、有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现。,细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解，水解后产生氨，氨为碱性，酚酞在酸性环境里呈黄色，碱性里呈红色。培养基中酸碱指示剂产生颜色变化（变红），标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株以尿素为氮源。,4、与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落,表明能利用尿素的细菌在土壤菌落中只占有极少数。,5.本实验分离
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