多聚酶链式反应扩增DNA片段(优质课)ppt课件

聚合酶链反应(PCR)是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，因此也被称为体外DNA扩增技术。主题2通过聚合酶链反应1，1扩增DNA片段。脱氧核糖核酸分子的组成和结构。DNA分子的基本单位是。常见物种。每个基本单位由一个分子、一个分子和一个分子组成。脱氧核糖核酸，4，磷酸，碱基，脱氧核糖？DNA分子的平面结构怎么样？基础知识，2，A，G，C，T，1，脱氧核苷酸，DNA的基本单位，3，脱氧核苷酸链的结构图，4，一个分子的水在一个核苷酸的磷酸基团上的“-oh”和另一个核苷酸分子的第三个碳原子上的羟基之间损失，形成磷酸二酯键，即在两个相邻脱氧核苷酸的3和5碳原子之间形成磷酸二酯键。大量的四个脱氧核苷酸通过3，5，磷酸二酯键相互连接，形成脱氧核苷酸链。通常，脱氧核糖核酸的羟基末端称为3末端，而磷酸基团的末端称为5末端。4.多脱氧核苷酸链的形成。5，2。DNA分子的平面结构，5端和3端。识别：DNA分子的3末端和5末端羟基末端是3；磷酸基团的末端是5。6，2，脱氧核糖核酸分子复制过程，7，解旋酶，脱氧核糖核酸母链，4种脱氧核苷酸，脱氧核糖核酸聚合酶，引物(核糖核酸)，打开脱氧核糖核酸双链，模板，合成子链原料，催化子链的合成，使脱氧核糖核酸聚合酶从引物的3末端连接脱氧核糖核酸，思考：体内脱氧核糖核酸复制的条件是什么？体外DNA扩增如何提供类似的环境？变性(80-100)，Taq聚合酶(耐高温)，20-30个核苷酸组成脱氧核糖核酸或核糖核酸，8个核苷酸组成脱氧核糖核酸双链，单链，变性(加热80-100)，复性(缓慢冷却)，4个核苷酸组成脱氧核糖核酸分子的热变性原理，变性目的，复性目的，解链双链，这有利于引物一和引物二与两条单链的结合，9，首先，聚合酶链反应的原理(聚合酶链反应的技术原理)，时间(分钟)，温度，()，合适的温度重复1-3个步骤30轮，3、DNA复制的方向，DNA合成的方向总是从亚链的5端延伸到3端，2、步骤：变性复性延伸，10、总结了聚合酶链反应技术的原理，利用DNA分子热变性的原理，通过控制温度来控制双链的解链和结合，从而完成了丹分子的体外扩增。 体外复制DNA的条件：四个脱氧核苷酸、热稳定的DNA聚合酶、引物和模板；缓冲溶液，严格控制温度的温控设备。复制方向：子链的5端延伸到3端。在25-30个循环(复制)后，模板DNA的含量可增加100万(220)倍以上。13、每个循环包括：变性、复性、延伸，从第二个循环开始，前一个循环的产物也可以作为模板参与反应，并且由引物延伸形成的DNA单链将与引物结合进行DNA延伸，从而使DNA聚合酶只能特异性地复制两个引物之间的DNA序列，使这种固定长度的序列呈指数级扩增。，聚合酶链式反应过程概述，14，3，聚合酶链式反应的实验操作，1，聚合酶链式反应仪器、设备和工具，2，微量离心管，总体积为0.5毫升的薄壁塑料管，3，微量移液管，用于定量转移聚合酶链式反应配方中的液体，一次性移液管吸头一次更换一次，本质上是一种能自动调节和控制温度的仪器，15，3，聚合酶链式反应的实验操作， (1)将所需试剂按配方(制剂)放在实验台上，(2)用微型离心器装置(3)将离心管开口盖紧，按配方顺序将各组分(移液)加入微型离心管中，用手指轻敲管壁(混合)，(4)将微型离心管放在离心机上(离心)，(5)将离心管放在聚合酶链反应仪上，建立聚合酶链反应仪(16，4)结果分析和评价的循环程序(反应)。 DNA含量的测定：稀释对照调零测定计算(见公式P63)，在260纳米波长下读数，蒸馏水为对照，50倍，17，(1)DNA扩增数的理论计算，4。项目成果评价，1。一个DNA，n个复制，DNA 2n，2，一个DNA，n个复制，DNA ax2n，(2)实验中DNA含量的测定，1。原则上，扩增效果可以通过测量DNA含量来评估。DNA在260纳米的紫外波段有一个强吸收峰。峰值的大小与DNA含量有关。18，2。过程：稀释，2L聚合酶链反应溶液，加入98L蒸馏水，即样品稀释50倍；控制零点，以蒸馏水为空白对照，在波长260纳米时，将紫外分光光度计的读数调至零点。将100升的脱氧核糖核酸稀释剂加入试管，测量260纳米处的吸光值。测量和计算：DNA含量(克/毫升)=50(260纳米读数)稀释倍数，19，50:1厘米厚试管中的光吸收值为1，DNA含量为50克/毫升，20，体内DNA复制和聚合酶链反应的技术差异：21，课堂总结，22，练习和巩固。1.关于聚合酶链反应技术的应用，其中一个错误是古生物学，犯罪调查和检测，基因测序，基因疾病诊断，基因克隆，古生物学，基因克隆，犯罪调查和检测，基因疾病诊断，合成核苷酸，基因测序。23，2。DNA合成的方向总是从子链的哪一端延伸到哪一端？聚合酶链反应技术最突出的优点是原理a简单，原料b容易找到，聚合酶具有耐热性，d快速、高效、灵活、易操作，从亚链的