血流感染实验室诊断VIP

，血流感染实验室诊断的新进展，北京协和医院检查和王瑶2013年4月13日。内容，血流感染是什么？血流感染的流行病学特征优化血液培养过程提高阳性率分析培养结果减少污染分子生物学方法血液感染检测基于PCR的技术MALDI-TOFMSPNA-FISH。概念，感染=炎症病原体全身炎症反应综合征(SIRS)体温38或90次/分呼吸频率20次/分钟，或PaCO 2109/l或10%败血症(sepsis)=SIRS感染，血液病原体主要是细菌，也可能是真菌、分枝杆菌等。菌血症(bacteremia):细菌在血液中短暂出现的现象，一般没有毒血症状，在外国文献中经常与败血症一起使用。血流感染(bloodstreaminfection，BSI):败血症和菌血症现在统称为血流感染。血液感染、医院获得性血液感染、原发性血流感染实验室确认，lcbi(行尸-组态-血流感染)临床血流感染、次血流感染：血液培养分离有意义的微生物，该微生物与其他部位院内感染有关。不包括血管或血管内导管设备引起的血流感染。社区获得性血流感染，实验室确认血流感染(LCBI)，标准1:在一个或多个血液样本中培养出一致的病原体，培养的病原体与其他部位的感染无关。标准2:患者至少有发热(38C)、发冷或低血压等症状和体征之一，并导致以下症状之一：1.从两次以上不同部位提取血液的标本中培养出皮肤寄生菌(如白喉、芽孢杆菌、丙酸杆菌、凝血酶阴性葡萄球菌或微球菌)。2.至少有一次，在血管内导管患者的血液样本中培养了皮肤寄生细菌(如白喉、杆菌、丙酸杆菌、凝血酶阴性葡萄球菌或微球菌)，相关医生开始了适当的抗菌药物治疗。血液中抗原检查阳性(如嗜肺嗜血杆菌、肺炎链球菌、脑膜炎或链球菌b组)。与实验室阳性结果一致的症状和体征与其他部位的感染无关。标准3:年龄38C、低温(37C)、呼吸暂停、脉搏下降、以下一项(3点)、临床血流感染(ClinicalSepsis)、两个条件之一：有其他已知原因引起的发烧、血压低(收缩血压约或收缩气压一般在40mmHg以下)、体重不足(每小时30ml以下)没有进行血液培养或血液培养阴性或血液抗原反应阴性的其他部分感染者医生对该感染症状用适当的抗菌素治疗1岁以下的婴儿，有其他书原因引起的发热、低体温、呼吸停止或心跳过速等临床症状之一，并且符合以下所有条件的人没有进行血液培养，或者血液培养阴性或血液抗原反应阴性的其他部位，感染者医生没有对该感染症状进行适当的抗菌药。BSI的流行病学特征、BSI发病率逐年增加，凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌、真菌血流感染发生率增加，革兰阴性细菌减少耐药菌率逐年增加，与社区获得血液感染病原体谱有差异的医院内BSI患者的死亡率增加。美国脓毒症流行病学，Martinetal，NEJM20033483336601546，加拿大CANWORD监视2002-2009，diadiagrammointdis.201169:3307.加拿大CANWORD监视2002-2009，diagrammointdis.201169:3307，美国49医院BSI病原体谱，cid.2004，393336309-317。pumpich 2012 834血培养分离物，pumpich 2012 BSI大肠杆菌144株的药敏结果，esbl 60.2%，PUMCH2012年67株BSI肺炎克雷伯氏菌的药敏结果，Esbl34.4%，彪马2012年61株BSI鲍曼不动杆菌药敏结果。pumpich 2012年76株BSI金黄色葡萄球菌药敏结果。pumpich 2012年BSI绿色链球菌46株的药敏结果。2011CHIF-NET489菌株的BSI酵母，2011CHIF-NET对坎迪达阿尔科纳佐的耐性，2011CHIF-NET对坎迪达阿尔科纳佐尔的敏感性，2011CHIF-NET不同酵母的氟康唑敏感性，2011CHIF-NET对其他酵母中伏立康唑的敏感性，采血量是影响血液培养阳性率的独立相关因素，CLSIM47-A:每个患者2-3组血液培养(40-60ml)surviviningsepsissippingguidelins(world wide):采血量对血液培养阳性率的影响，j.clin.microbiol.2011，49 (12) :147，27，j.clin.microbiol.2011，49 (12) :147，Routerinet mayo clinic 33602 bactecrobicplussbottles 1 bactebottles，28、在多种血液培养中，下一种细菌阳性凝固酶阴性葡萄球菌微孢子虫杆菌单一培养阳性，可能是条件病原体，临床分析，血液培养污染菌。29，无条件致病菌，mayo cley NIC，(p 38 cor 90/min；呼吸20/分钟；白细胞12or10%未成熟中性粒细胞32%患者为1瓶以上CNS阳性，BSI68%，污染12%(p0.001) SIRS无症状：BSI5%，污染29%(p30秒1% 2% iod，急诊血液培养污染率与工作量相关，theuniversity ityofmichiganheallthsystem急诊血液培养大部分由采血者采集，护士和医生采血者：患者=1:9，重症监护室护士：患者=233603，紧急情况下的工作量，Schuylrhalverson，et al.jcm.2013联机。繁忙时血液培养污染率增加，or=1.23，or=0.93，schuylrhalverson，et al.jcm.2013联机，抗菌药物治疗和血流感染死亡率，死亡率，测试115 (2) :199。42，血培养三级报告系统，血培养阳性，最终报告，革兰氏染色，传播培养，初步报告(直接药敏)，菌株确认，电话报告，识别标准药敏，血培养结果奖励对治疗的影响，A=appropriate therapy I=inappropriate therapy(错误治疗)，clinife cdis 24336054-602，血液感染的快速分子诊断，不受抗菌药物使用影响的分子诊断阳性后分子诊断直接使用血液标本进行分子诊断，速度快，但不提供药敏结果。血液培养阳性病分子鉴定，AntigoneKotsaki，Et al.experto pin.med.diag.2012，6(3)336099，阳性血培养-基于PCR的检测，PCR特异性PCR特异性耐药基因检测：葡萄球菌、肠球菌van细菌负荷：肺炎链球菌自溶毒a基因lytA复制广泛光谱检测：PPS，47，qPCR血培养阳性病中铜绿假单胞菌的鉴定，Target:ecfXgene培养系统：BacT/ALERT，FA 87瓶，FN 13瓶，导马全部G-b对照组方法，48，QPCR在血培养阳性病中，铜绿假单胞菌，33瓶，敏感性和特异性均为kpn PAE 100%1瓶，PAE(20 cfu/ml)，阳性血培养-基于PCR的检测，最常见的病原体多PCR电泳谱，ELISA混合，多real-timepcrhyplexbloodscreen(bag，lich，Germany) :多个PCR emany，血培养阳性-多个实时PCR，newmicrobiologica，36，65-74，2013。血培养阳性-多个实时PCR，newmicrobiologica，36，65-74，2013。52，血培养阳性- PNAFISH核酸荧光in situ hybridization，血培养阳性肉汤gram染色PNAFISH，gram阴性杆菌：商业化套件eco/kpn/paeEfa/其他肠球孔Sau7633363601j . clin . microbiol . 2013，51(4):1 jclin microbiol . 2009；4730336947，MALDI-to FMS，矩阵辅助激光分析电离(MALDI)原理：将样品分散到矩阵分子中，形成结晶，然后直接注入，用激光照射结晶，矩阵吸收激光的大部分能量，使矩阵分子和样品从能量投影到气体上，获得电离，成为带电离子。矩阵在样品离子形成过程中起了质子化或去物质化作用，使样品带正电荷或负电荷，成为带电荷的离子矩阵，干扰检测分子质量峰的大小和浓度；不同种类的分析物质选择不同的气质。MALDI-TOFMS，飞行时间(TOF)原理：离子源产生的离子通过加速电场获得动能，进入高真空无电场飞行管在此管内飞行时，质量较轻的离子更快，更早到达探测器；质量更重的离子飞行速度慢，晚点到达探测器。因此，根据离子的飞行时间和质量比的平方根(m/z)成比例测量飞行时间，计算该离子的分子量。MALDI-TOFMS操作步骤、56，MALDI-TOFMS快速确认阳性血培养，使用殖民地、阳性血培养肉汤快速确认：20分钟(警报到结果确认)brker (brker) ba ctec (BD) :正确确认：10革兰染色后，使用阴性或阳性库进行分析，从6瓶中确认第二种细菌，ClinMicrobiolInfect201016:1631JClinMicrobiol201048336901542，57，maldi-to FMS，vitate kms (biom rieux)为金标，980个临床分离体，ID正确率enterobacteriaceae 97.7%非发酵菌92%葡萄状48360900，PCR/ESIMS，光谱电子能谱(PCR-ESIMS)189阳性血培养和45阴性血培养，相似率为98.7%6 SPN抽样方法阴性提供定量结果-评估病原体负载的假阴性率102:112.血液样本分子检测，物种特异性，广谱，多PCR，Bartonellaspp llaspp.bartone，Coxiellaburnet