国产注射用洛铂在恶性肿瘤患者体内药动学的研究_史健

基金项目: 河北省科技厅科技攻关项目( 05276101D - 59) 作者简介: 史健,女, 副主任医师, 博士 T e l /F a x : ( 0311) 86095672 E - m a i l : s h i j i a n 6668126. c o m 国产注射用洛铂在恶性肿瘤患者体内药动学的研究 史健 1 ,袁志芳 2 ,刘伟娜 2,郭芳2 ,单保恩 3,王贵英4, 刘江5,鲁壮平5, 张俊珍5 ,王永利 2( 1. 河北医科大学第四医院肿瘤内 科, 石家庄 050011; 2. 河北医科大学药学院, 石家庄 050011; 3. 河北医科大学第四医院科研中心, 石家庄 050011; 4. 河北医科大学第四医院外科, 石家庄 050011; 5 . 河北医科大学第四医院药剂科, 石家庄 050011) 摘要: 目的 研究国产洛铂在恶性肿瘤患者体内的药动学特点, 为该药的合理应用奠定理论依据。方法 将洛铂按照 50 m g m- 2体表面积给 8例恶性肿瘤患者输注后, 采集不同时间静脉血及其手术中切取恶性肿瘤组织, 应用高效液相色谱方法, 检测 8 例恶性肿瘤患者血浆、恶性肿瘤组织中的药物浓度。结果 患者输注洛铂后 0, 0. 2, 0. 5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 h , 检测外周血中洛铂 的平均药 物 浓 度 分 别 为 (2. 626 0. 31)10 4, (1. 683 0. 2)104, ( 1. 124 0. 163)104, (6. 43 1. 45)103, ( 4. 451. 57)103, ( 2. 190. 26)103, ( 1. 530. 25)103, ( 0. 790. 18)10 3, ( 0. 470. 11)103, ( 0. 020. 01)103 g L - 1; 洛铂在恶性肿瘤病人血浆中药动学符合二室模型拟合, 各药动学参数分别为: 最大血药浓度( m a x) 为( 2. 6260. 31)10 4 g L - 1; 分布半衰期( t 1/2) 为( 152. 4) m i n ; 消除半衰期( t1/2) 为( 16215) m i n ; 药物由周边室至中央室的转运速率常数( k21) 为( 1. 000. 28) h - 1; 药物自中央室消除速率常数 ( k 10) 为( 0. 740. 11) h - 1; 药物自中央室至周边室的转运速率常数( k 12) 为 ( 1. 310. 27) h - 1; 药- 时曲线下面积( A U C )( 35. 205. 47) g h L- 1; 血浆清除率( C L ) ( 8. 731. 51) L h- 1。 8例患者肿瘤 组织手术标本中, 肺和乳腺癌肿瘤组织中, 洛铂的平均血药浓度分别为( 0. 330. 12) , ( 0. 230. 15) m g L - 1, 明显高于输注 24 h 后血浆中的洛铂浓度( 0. 020. 01) m g L - 1( P0. 01) 。 结论 按照 50mg m- 2体表面积给药后, 在肿瘤患者血浆中洛铂药动 学符合二室模型拟合, 优于文献报道的国外同类产品。 关键词: 洛铂; 高效液相色谱法; 血药浓度; 肿瘤组织药物浓度; 药动学 中图分类号: R 979. 1; R 969. 1 文献标识码: A 文章编号: 1001-2494( 2007) 24-1888-04 S t u d yo nL o b a p l a t i nP h a r m a c o k i n e t i c i nH u m a nP l a s m aa n dT u mo r T is s u eo f Ma l i g n a n t P a t ie n t s S H I J i a n 1 , Y U A NZ h i - f a n g 2, L I UWe i - n a2 , G U OF a n g 2, S H A NB a o - e n3, WA N GG u i - y i n g4, L I UJ i a n g5 , L UZ h u a n g - p i n g 5 , Z H A N GJ u n - z h e n 5 , WA N GY o n g - l i 2 ( 1. C h e m o t h e r a p yo f H e b e iMe d i c a lU n i v e r s i t y , S h i j i a z h u a n g050011, C h i n a ; 2.H e b e i Me d i c a l U n i v e r i s t y , S h i j i a z h u a n g050011, C h i n a ; 3. T h e R e s e a r c ho f H e b e i Me d i c a l U n i v e r i s t y , S h i j i a z h u a n g050011, C h i n a ; 4. S u r g u r yo f H e - b e i Me d i c a l U n i v e r s i t y , S h i j i a z h u a n g050011, C h i n a ; 5. D r u go f H e b e i Me d i c a l U n i v e r s i t y , S h i ji a z h u a n g050011, C h i n a ) A B S T R A C T : OB J E C T I V E T os t u d yt h ep h a r m a c o k i n e t i c so f l o b a p l a t i ni np a t i e n t sw i t hm a l i g n a n t . ME T HO DS 8 P a t i e n t s( 35 t o 56y )r e c e i v e da s i n g l ed o s eo f l o b a p l a t i n50 m g m - 2 i n t r a v e n o u s l yf o r2h .P l a s m aw a s o b t a i n e da f t e r t h ei n f u s i o nf o r t h ed e t e r m i n a t i o n o f l o b a p l a t i nc o n c e n t r a t i o n s .L o b a p l a t i nc o n c e n t r a t i o n sw e r em e a s u r e du s i n gh i g h - p e r f o r ma n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p y( H P L C ) .T h ep h a r - m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r sw e r ec a l c u l a t e db yu s i n gP K Ss o f t w a r e .R E S UL T S T h em e a nc o n c e n t r a t i o n s o f l o b a p l a t i na t0, 0. 2, 0. 5, 1, 2, 4, 6, 8, 12a n d24ha f t e r i n f u s i o nw e r e( 2. 6260. 31)104, ( 1. 6830. 2)104, ( 1. 1240. 163)10 4, ( 6. 431. 45) 103, ( 4. 451. 57)10 3, ( 2. 190. 26)103, ( 1. 530. 25) 103, ( 0. 790. 18) 103, ( 0. 470. 11) 103 a n d( 0. 02 0. 01)10 3 g L- 1 r e s p e c t i v e l y .T h ep h a r ma c o k i n e t i cp a r a m e t e r s w e r ea sf o l l o w s : m a x( 2. 6260. 31)10 4 g L- 1, t 1/2( 0. 25 0. 04) h , t 1/2( 2. 700. 25) h , k21( 1. 000. 28) h - 1, k 10( 0. 740. 11) h - 1, k 12( 1. 310. 27) h - 1, A U C ( 35. 205. 47) g h L- 1, C L ( 8. 731. 51) L h - 1. C ON C L U S I ON P h a r ma c o k i n e t i c so f l o b a p l a t i nf o l l o w sb i p h a s i ck i n e t i cm o d e l s .T h ep h a r m a c o k i n e t i cp a - r a m e t e r s o f l o b a p l a t i na n di t sm e t a b o l i t ea r eh i g h e rt h a nt h o s er e p o r t e d . KE YWO R DS : l o b a p l a t i n ; H P L C ; p l a s m ac o n c e n t r a t i o n ; t i s s u ec o n c e n t r a t i o n ; p h a r m a c o k i n e t i c s 随着顺铂、 卡铂等铂类药物在临床抗肿瘤治疗中 的广泛应用,大量证据已表明,铂类化合物对治疗不 同类型的恶性肿瘤有较好的疗效, 产生了重大影响, 是目前临床使用的最有效抗癌药物之一 。但由于该 类药物具有明显的肾毒性、 神经毒性及可导致听神经 损伤和严重恶心呕吐, 使其临床应用受到一定的限 1888 C h i nP h a r mJ , 2007 D e c e m b e r , V o l . 42 N o . 24 中国药学杂志 2007年 12月第 42卷第 24期 制。 第三代铂类化合物洛铂 ( l o b a p l a t i n ) 具有与顺铂 相似的作用机制 1- 3 ,对多种肿瘤有抗癌活性,且对顺 铂耐药的肿瘤也有效 ; 而该药物的胃肠道不良反应 小,水溶性好,水溶液性质稳定 ,所以,综合临床医师 和广大患者欢迎,然而,有关洛铂在肿瘤患者体内药 动学的特点尚未见文献报道。本试验拟在建立一种 快速 、 灵敏、 准确的洛铂体内血药浓度测定方法,研究 该药在肿瘤患者血浆中的药动学特性 ,为临床制定合 适的给药方案提供科学依据 。 1 材料与方法 1. 1 药品与试剂 注射用洛铂 ( L o b a p l a t i n ) ( 规格: 50 m g , 批号: 20050601,海南长安国际制药有限公司 ) : 洛铂对照品 ( 海南长安国际制药有限公司) ; 乙腈 ( 色谱纯) ; 其他 试剂均购自于 S i g m a 公司。 1. 2 仪器 Wa te r s 液相色谱仪和 2487检测器使用浙江大学 生产的色谱工作站。使用梅特勒- 托利多 A E 240/ 0. 000 01 g 电子天平; 高速离心机( 16 000 r m i n - 1 ) ; WH- 2涡轮混合器。 1. 3 标本来源 收集在河北医科大学第四医院初治、可手术、经 病理确诊的恶性肿瘤,患者均为自愿参加本临床研究 者并签署知情同意书,共 8例, 其中乳腺癌 5例,非小 细胞肺癌 1例, 小细胞肺癌 2例; 男性 4例, 女性 4 例; 年龄 35 56岁,中位年龄 42岁 ; 体力情况评分 ( K p s ) 在 90分以上 ; 8例患者造血功能正常 ,血常规 均在正常范围: 白细胞数4 000个 L -1,血小板数 100 000个 L -1,肝肾功能正常,转氨酶 1. 5倍 正常值上限,碱性磷酸酶 2. 5倍正常值上限 ,胆红素 2 m g 100 m L - 1 ,肌酐 5 c m 的正常组织各 0. 1 g ,加适量水匀浆后 ,转移 至 2 m L 量瓶中 ,加水至刻度, 混匀后离心 10 m i n ( 4 000 r m i n - 1 ) ,取上清液 1. 0 m L , 置 5 m L 尖底离心 试管中,加入甲醇 3 m L ,漩涡混合 1 m i n ,离心 10 m i n ( 10 000 r m i n - 1 ) ,取上清液 3 m L ,置 5 m L 尖底试 管中,在水浴 37 下,氮气吹干 ,残余物用 100 L 水 溶解,高速离心后, 取上清液 20 L 进样进行 H P L C 分析。 1. 6 样品中药物浓度的色谱分析 1. 6. 1 色谱条件 色谱柱: C18( 4. 6 m m 250 m m , 5 m ) ( 迪马) ; 保护柱 : Z O RB A X S B-C18( 4. 6 m m 12. 5 m m , 5 m ) ; 流动相: 磷酸二氢钾溶液( 1. 36 g 磷 酸二氢钾溶解于水,用水稀释至 1 000 m L ,以 5 m o l L -1 K O H 溶液调节 p H 值为 6. 4,乙腈- 三乙胺( 95. 97 4 0. 03) 。流量: 1. 0 m L m in -1 ; 检测波长 : 210 n m ; 柱温: 35 。分别取受试者 ,应用洛铂前后的血浆和 加入洛铂对照品和未用药血浆 ,按方法 “1. 4”中血浆 样品的处理方法制备溶液,进行 H P L C 分析, 记录的 结果见色谱图 1,可见各成分分离良好。 图 1 洛铂 H P L C色谱图 A- 空白血样; B- 空白血样 + 对照品; C- 含药血样; 1 - 铬铂; 2 - 铬铂 D2 F i g1 H P L CC h r o m a t o g r a mo f l o b p l a t i n A-b l a n kp l a s m a ; B- b l a n kp la s m as p ik e dw i ths t a n d a r do f l o b a p l a t in ; C- u n k n o w p l a s m ao f ap a t i e n t ; 1- l o b a p l a t inD1; 2 - l o b a p l a t i nD2 1. 6. 2 标准曲线的制备 取空白人血浆或组织匀浆 上清液,加入洛铂对照品溶液, 使样品中的洛铂浓度 为 8. 028 10 4 g L -1, 依次用相应人血浆或组织匀 浆上清液稀释成 4. 014 10 4, 8. 03 103, 8. 0 102, 80, 20 g L - 1的系列质量浓度,按 “1. 6. 1”方法操 作,以洛铂血浆质量浓度 ( g L - 1 ) 对洛铂的色谱 峰面积 ( A ) 作线性回归, 分别得出标准曲线方程: 1889 中国药学杂志 2007年 12月第 42卷第 24期 C h i n P h a r mJ , 2007 D e c e m b e r , V o l. 42 N o . 24 血浆= 3. 903 10 6A- 0. 02( r = 0. 999 3, n = 5) ; 组织= 4. 225 10 6A- 0. 05( r = 0. 998 9, n = 5) 。 按该方法将样品做倍比稀释后, 进行 H P L C 分 析,以信噪比 S /N 5时的相应浓度为定量下限 ,血浆 和组织样品的定量下限分别为 1. 2, 1. 6 g L -1。 1. 6. 3 方法学评价 回收率测定: 取空白血浆或 组织匀浆上清液 1 m L ,按标准曲线制备方法制备低、 中、 高 3个质量浓度的含洛铂标本 ( 洛铂质量浓度分 别为 10, 5. 94 10 3 , 3. 590 10 4 g L -1 ) ,每个浓度 制备 6个样本进行测定。记录色谱图 ; 计算所得浓度 与加入洛铂浓度的比值即为相对回收率,该法测得的 低、 中 、 高 3种质量浓度的相对回收率 ( %) 分别为 ( 94. 5 4. 8) %, ( 92. 3 5. 2) %, ( 94. 3 3. 3) %。 日间及日内误差分析: 取空白血浆或组织匀浆 上清液 200 L ,按标准曲线与线性范围制备, 同法操 作制备低、 中、 高 3个质量浓度 ( 洛铂浓度为 10, 5. 94 10 3, 3. 590 104 g L-1 ) ,每一浓度制备 6样本进 行分析, 连续测定 3 d ,以标准曲线计算样品的浓度, 将结果进行方差分析。计算得血浆日内误差 ( R S D ) 分别为 9. 2%, 5. 6% 和 6. 6%,日间误差 ( R S D ) 分别 为 8. 5%, 5. 6%和 3. 6%; 组织样品日内误差 ( R S D ) 分别为 7. 3%, 5. 2% 和 6. 2%,日间误差 ( R S D ) 分别 为 8. 5%, 4. 6%和 3. 6%。 温度对检测值的影响: 同法配低、 中、高 3个质 量浓度洛铂分别为 10, 5. 94 10 3, 3. 590 104 g L - 1 ,室温,每隔 1 h 测定 1次结果, 连续测定 6 h , 观 察其稳定性。结果显示: 样品的峰面积在 6 h 内基本 不变 , R S D 为 2. 7% 和 3. 6%,说明洛铂待测液至少在 6 h 内稳定。在冻融条件下, 将样品分别置于 - 20 冰冻 2周后, 于 37 条件下解冻, 按“1. 6. 3”方法测 定洛铂血浆或组织样品浓度变化 ( n = 6) , 计算冰冻 2 周及冻融对样品稳定性影响,求得冰冻前后浓度变化 比率分别为( 99. 8 2. 9) %, ( 96. 7 5. 1) %, ( 99. 1 6. 5) %; ( 98. 2 3. 2) %, ( 97. 8 4. 6) %, ( 98. 2 3. 9) %。 1. 7 药- 时拟合值分析(P K S 软件) 综合分析静脉输注国产注射用洛铂治疗血中药 物浓度数据,列表并计算均值和标准差, 绘制药- 时曲 线; 用上海宏能软件有限公司开发的 B E C S 程序对药- 时数据进行拟合 ,以实测值计 m a x, tm a x; 以末端相血药 浓度的对数值对时间进行回归, 求得斜率 Ke, 再求算 t 1/2; 运用梯形法求算曲线下面积 A U C 。 2 结 果 2. 1 洛铂在肿瘤患者血浆中的药物浓度变化 洛铂按照 50 m g m -2体表面积对 8位肿瘤患者 输注洛铂后,于 0, 0. 2, 0. 5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 h 共 10 个 时 间 点 测 得 的 平 均 血 药 浓 度 分 别 为 ( 2. 626 0. 31) 10 4, (1. 683 0. 2 ) 10 4, ( 1. 124 0. 163) 10 4, (6. 43 1. 45 ) 10 3, ( 4. 45 1. 57) 10 3, ( 2. 19 0. 26)103 , ( 1. 53 0. 25)10 3 , ( 0. 79 0. 18)10 3 、( 0. 47 0. 11) 10 3, ( 0. 02 0. 01) 103 g L -1; 血浆中洛铂最大药 物浓度 m a x为 ( 2. 626 0. 31) 10 4 g L -1 ,血药浓 度- 时间数据经 P K 软件处理,洛铂在肿瘤患者血浆中 药动学符合二室模型拟合。 2. 2 洛铂在肿瘤组织中的浓度变化 手术中切取的肺癌和乳腺癌等 8位患者肿瘤组 织中,洛铂的平均药物浓度分别为 ( 0. 33 0. 12) , ( 0. 23 0. 15) m g L -1,明显高于术前输注 24 h 后血 浆中的洛铂浓度( 0. 02 0. 01) m g L - 1 。 2. 3 洛铂在肿瘤患者体内的药动学参数 针对 8名肿瘤患者将洛铂按照 50 m g m -2体表 面积给药后,平均血浆药- 时曲线见图 2,主要药动学 参数见表 2。 图 2 8名恶性肿瘤患者接受洛铂给药后的平均药- 时曲线 . n =8, x s F i g2 Me a nd r u gp l a s m ac o n c e n t r a t i o n - t i m ec u r v eo f l o b a p l a t i n i n8 c a r c i n o m ap a t i e n t s . n =8, x s 表 2 8名肿瘤患者单药洛铂输注后的主要药动学参数 . n= 8, x s T a b2 Ma i nd r u gk i n e t i c sp a r a m e t e ro f l o b a p l a t i ni ne i g h t p a - t i e n t s . n =8, x s P a r a m e t e rT e s t R e f e r e n c e 4 t 1/2 152 . 410. 69 . 0 t 1/2 1621593. 323 . 9 m a x/ g L- 1 ( 2 . 6260 . 31) 104( 2. 61 . 1) 104 k 21/h - 1 1. 000 . 28 k 10/h - 1 0. 740 . 11 k 12/h - 1 1. 310 . 27 A U C / g h L- 1 3. 520 . 547 104( 3. 21 . 1) 104 C L /L h- 1 8. 731 . 5114. 67 . 0 3 讨 论 自 1967年顺铂被发现有抗癌活性以来, 铂类金 1890 C h i nP h a r mJ , 2007 D e c e m b e r , V o l . 42 N o . 24 中国药学杂志 2007年 12月第 42卷第 24期 属抗癌药物的应用和研究得到了迅速的发展 。顺铂 和卡铂已成为癌症化疗中不可缺少的药物。 1995年 世界卫生组织对世界上近百种抗癌药物进行评价 ,顺 铂的疗效及应用 、 市场等综合评价得分位居前茅。另 据统计,在我国抗癌化疗治疗的所有方案中以顺铂为 主或有顺铂参加配伍的占所有化疗方案的 70% 80%。临床报道, 对于复发性或转移性乳腺癌, 系统 化疗是首选的治疗措施。以顺铂为主的联合化疗作 为第一线方案可以获得 40% 50%缓解率 4 。但是 顺铂的肾毒性和胃肠道反应等毒性使其剂量强度受 到一定的限制。 第三代铂类化合物洛铂 ( l o b a p l a t i n ) 有很好的抗 肿瘤作用,与顺铂有相似的作用机制,抗癌疗效指数 高于顺铂和卡铂, 对部分顺铂和卡铂耐药的肿瘤有 效 1 ; 其抗肿瘤活性源于与 D N A 共价键结合形成的 D N A - 药物加合物,主要是 G G 和 A G 的链内交联 6- 7 , 使 D N A 变性失去复制功能, 导致细胞生长停滞及死 亡; 洛铂- D N A 交联还可选择性的影响 c - m y c 基因的 表达 ,导致 c - m y c 基因启动子区域- 290 - 350 b p 缺 失 8 。单药洛铂治疗复发性或转移性乳腺癌有效率 为 45. 2% 9 ,然而该药的应用剂量尚不统一, 影响了 最佳治疗效果, 其原因是该药的药动学尚不十分清 楚 4, 10 。 本试验中将洛铂以 50 m g m -2体表面积对 8 名肿瘤患者 ,其血浆中洛铂药动学符合二室模型拟 合 。文献报道洛铂静注完毕后 3 h t m a x( 3. 2 0. 7) h , 在体内达到最大洛铂药物浓度 ( 2. 1 0. 4) m o l L -1 ,本试验结果为血浆中最大血药浓度 ( 2. 626 0. 31)10 4 g L -1, 在输注洛铂完毕时 刻 ,究其原因可能在于给药方式不同 ,本试验是持续 静脉点滴。恒速静脉滴注与单剂静脉注射不同 ,此 时药物一方面以恒速的零级动力学方式进入体内 , 另一方面又以恒比的一级动力学方式从体内消除 。 临床上通常视恒速静脉滴注经过 5 6个半衰期后 , 达到稳态血药浓度。而有效的血药浓度在二室模型 药物( C s s)m a x应为消除相起始段 。 洛铂在体内消除的半衰期为 ( 162 15) m i n , 同文献报 道的进口洛 铂半衰期 ( 10. 6 9. 0) , ( 93. 3 23. 9) m i n 相比较时间略延长 , 测定数值 显示 : 国产洛铂在输注 12 h 时 ,血浆中洛铂的浓度 很低 ,同文献报道的洛铂在注射后 11 h 血浆中几 乎测不到的结论相一致 11 , 提示国产洛铂较进口 洛铂的药时长 。 国产洛铂的血浆清除率较小于文献报道的进口 洛铂 ( 14. 6 7. 0) L h -1, 表明国产药物较进口药 在体内代谢缓慢,且两者之间有统计学差异 ,其原因 在可能与种属相关 ,国产药物可能适用于亚洲人种 为研究对象。 试验中测定的 8名肿瘤患者的肿瘤组织中洛铂 浓度明显高于同时刻血浆中的洛铂浓度 ,表明洛铂 进入体内有较好的选择性, 肿瘤组织中分布的药物 浓度高。 以上结果表明, 国产洛铂在我国肿瘤患者体内 药动学具有起效快 、 持续时间长、药物进入体内有较 好的选择性, 在肿瘤组织中浓度高, 在血浆中浓度 低, 有很好的抗肿瘤作用, 毒副作用较小 ,有较好的 应用前景 。 R E F E R E NC E S 1 H A R S T R I C KA , H A P K EG , S C H A R N O F S K EM , e t a l .H i g h a c t i v i t y o f l o b a p l a t i ni nC i s p l a t i nr e s i s t a n t h u m a nc a r c i n o m a c e l l l i n e s c e l l l i n e si nv i t r oa n di nv i v o J . P r o cA M A s s o c C a n c e r R e s , 1993, 34: 403. 2 M E I J E RC , M U L D E RNH , T I M M E R - B O S S C H AH , e t a l .R e - l a t i o n s h i po f c e l l u l a r g l u t a t h i o n e t o t h e c y t o t o x i c i t y a n d r e s i s t a n c e o f s e v e np l a t i n u mc o m p o u n d s J . C a n c e rR e s , 1992, 52: 6883- 6889. 3 C H A R L O T T EK , C H R I S T I A N EE , K A I SFH , e t a l .D e v e l o p - m e n t a n d a p p l i c a t i o no f a s i m p l e a s s a y t o q u a n t i f y c e l l u a r a d d u c t s o f p l a t i n u mc o m p l e x e s w i t hD N A J . P h a r mR e s , 1999, 16( 3) : 470- 473. 4 WE L I N KJ , B O V E NE , V E R M O R K E NJ B , e t a l .P h a r m a c o k i - n e t i c s a n dp h a r m a c o d y n a m i c so f l o b a p l a t i n( D - 19466)i np a - t i e n t s w i t ha d v a n c e ds o l i dt u m o r s ,i n c l u d i n gp a t i e n t sw i t hi m - p a i r e dr e n a l o r l i v e r f u n c t i o n J . 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