免疫定性项目性能验证ppt课件

.临床免疫定性检测的性能验证，高速列车的性能验证、具有固定和悬挂式空气动力学速度转向架的部件的强度稳定性和舒适性故障率，第3页，方法学、操作程序、校准品、仪器、试剂、测定系统的关键要素，为什么医学检验需要“性能验证”？评估检测系统是否符合临床检测和认证机构的要求(ISO 15189)；验证制造商提供的试剂参数可在本实验室复制。何时进行性能验证以及何时使用新的检测试剂或系统；更换检测试剂或系统时。更换新试剂或系统的重要性：更容易操作，更高的检测性能，更经济，更能满足实验室测定要求，1.定性临床应用和分类，1。定性临床应用免疫学检测：传染病微生物检测、肿瘤标志物核酸和基因检测、细胞学检测、寄生虫检测。2.临床分类筛选实验的定性实验；如大便隐血和TP诊断实验；如微生物培养和细菌鉴定确认实验；对上述检查结果进行验证和确认。3.几个重要的概念，筛选测试：临床筛选方法通常用于检测整个人群(或人群的特定部分)中的特定指标。例如，对需要输血的病人样本进行艾滋病毒血清学检测。一般来说，这些用于筛查的定性检测必须高度敏感，以确保检测到真正的阳性结果。如果筛查试验的假阳性结果造成的社会和经济后果不是很严重，这种低特异性可以通过具有更好特异性的确认试验来补偿。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准指南。3。几个重要的概念，诊断测试：诊断定性测试通常用于临床怀疑特定疾病或状况的存在。例如，各种微生物培养是用于检查感染的诊断测试。对于临床治疗要求，诊断试验应具有良好的敏感性和特异性。如果在诊断测试之后进行确认测试，则可以稍微降低诊断测试的特异性要求。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准指南。3。几个重要的概念，确认测试：确认测试用于验证筛选测试或诊断测试的结果。如果诊断测试确认了先前的测试结果，则临床医生可以做出诊断。验证性试验旨在具有高特异性(有时甚至以牺牲敏感性为代价)和高阳性预测值。蛋白质印迹试验是在筛选试验如艾滋病血清学试验后的确认试验。几个重要的概念，灵敏度或阳性分析能力指数(di():可以定义为试验在测试阳性标本后给出阳性结果的能力。di()=真阳性/(真阳性和假阴性) 100%特异性或阴性分析能力指数(di (-):它是对阴性样品给出阴性结果的能力di(-)=真阴性/(真阴性和假阳性)100%，3.几个重要的概念，阳性预测值：也就是说，被检测为阳性的样本实际上是阳性的可能性。=真阳性/(真阳性假阳性)100%阴性预测值：是给出阴性结果的样本实际上是阴性的可靠性。=真阴性/(真阴性假阴性)，100%，灵敏度=100%A/(A C)，特异性=100%D/(B D)，相关样本的患病率=100%(A C)/N阳性预测值(PVP)=100%A/(A B)，阴性预测值(PVN)=100%D/(C D)，方法效率(准确性)=100%(A D)/N，“预测值”对临床试验结果的影响。预测值对95%灵敏度和95%特异性试剂(100，000人)检测结果的影响。嘿。2.定性检测系统性能验证，验证内容：1。准确度(准确度)2。精度3。敏感度4。特异性5。截止值验证6。其他(需要时)，EP15 A2 EP17 A EP12 CLINIALLABORATORYANDSANDS SININSTITUTE(CLSI)，涉及免疫测定评估方法的标准、临床实验室标准化协会和性能验证前的准备，应熟悉待验证的试剂或系统，并提供必要的培训，包括样品处理和储存、试剂处理和储存、合理的检测方案、结果的合理解释和系统质量控制。制定质量保证计划以确定患者样本的数量和强度(评估重复性)并确定比较方法，CLS IEP 12-A2用户方案质量测试绩效；批准指南，性能验证的资格标准来自哪里？试剂盒说明书、国际和/或国际标准、性能验证前的样品制备、质量控制：采用商业质量控制，包括阴性和阳性。样品采集和保存：采集时间、保存方法等必须保证一致性。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准指南，用于方法比较的样本数量取决于评估者的目的。作为最低要求，测试应继续进行，直到通过比较获得至少50个阳性样品。通过比较方法获得至少50个阴性样品，以确定该检测方法的特异性。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准指南。1。1。准确度验证，1)用于测试具有已知值的参考物质室间质评材料(卫生部或CAP)的材料，由制造商提供指定的分析参考材料或用于确定方法固定值的材料。2)方法对比试验：样本数为10-20。相同的样品由两种方法同时测定。KAPPA测试方法用于分析两种方法(如HBV酶免疫分析法和发光法)测试结果的一致性。选择40个样本(20个样本)。最好用半随机盲法重新选择半结肠试验样本，阴阳各一半。将所有测试结果汇总并填写在表格中，以计算评估性能指标。2.精度验证。1)批内精度：在同一批中并行测试同一样品10次。然后计算平均值、标准差和变异系数。2)批间精度：连续10天测试同一样品，每天并行测试双孔。然后计算平均值、标准差和变异系数。注：使用信噪比进行统计计算。最好选择临界值或弱阳性样本。判断标准：批内变异系数小于15%。批间变异系数小于25%。批内重复性验证，对于高、中、低浓度的样品，在一批试验中重复检测20次(孔),计算获得的S/CO值的平均值和标准差，并计算批内变异系数。判断结论：应小于或等于试剂规格中注明的批内变异。酶联免疫吸附试验批内变异变异系数应10%。批间重复性的验证。对于高、中、低浓度的样品，在10天以上的时间内，重复20批测试一次(孔或管)。计算获得的S/CO值的平均值和标准差，并计算批间变异系数。判断结论：应小于或等于试剂规格中注明的批间差异。酶联免疫吸附试验批间变异变异系数应15%。灵敏度，1)验证方法：取10-20个已知为真阳性的样品，使用常规检测方法检测并计算阳性样品占样品总数的比例。2)样本来源：临床诊断阳性患者血清：份；制造商提供的阳性对照；决定性的参考方法2)样本来源：份体检样本，经检验员确认符合要求。注：项目在健康检查人群中的阳性率较高，且难以对这些项目进行具体验证。建议引用制造商的说明。例如，麻疹病毒IgG、CP-IgG、MP-IgG和一系列病毒抗体IgG。由于很难确认受试者是否有过任何既往感染史，而且IgG抗体在体内的保留时间较长，因此很难收集到真正的阴性样本。嘿。嘿。特定验证(干扰)和除特定病原体以外的传染病患者样本。含有干扰物质的样品：类风湿因子阳性、含有异嗜性抗体的样品、溶血、脂血症和高胆红素血症。结果判断：非特异性病原体感染患者的标本应为阴性。含有一定浓度干扰物质的样品应检测为阴性。截止重复性和测定下限的验证，截止重复性的验证：样品浓度应接近临界值。不应使用阴性或强阳性样本。批内和批间差异的验证：高、中、低浓度(对应于试剂盒说明书中描述的浓度)，当同一样品有50%的机会在重复实验中获得阳性或阴性结果时，临界点的定义和分析物的浓度。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准指南。试剂盒的截止值是指根据某一公式由阴性和阳性对照信号值计算出的信号值，用以判断某一测定结果，每次测定都是不同的。(1)截止重复性验证、截止重复性验证(包括测定下限验证)、批内变化验证和批间变化验证。验证步骤：准备足以重复检测40次的3个样品：临界浓度、高于临界浓度20%和低于临界浓度20%的样品。重复测试40次，以确定每个样本的阳性和阴性结果的百分比。临界浓度准确吗？20 -20%的浓度范围是否包括在该方法的95%范围之内、位于该范围之内或超出该范围？CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；是批准指南。C50准确吗？不同C50重复检测次数与阳性检测次数之间的关系，以及截止的重复性是什么？为被评估的检测试剂或系统建立分析物(C50)的临界浓度，并确保临界浓度的20%范围在95%范围内。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准指南。如果临界浓度未知，可对阳性样品进行一系列稀释，然后重复测试以确定哪种稀释可获得50%阳性和50%阴性结果。这种稀释的分析物浓度是临界点。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准的指南，(2)测定下限的验证：对于测定下限(如临界点浓度的20%)的样品，重复检测20次，至少18次(90%)或更多次应为阳性反应。重复验证的质量控制和质量控制：如果方法学比较在10天内完成，应对每批质量控制样品进行测试。如果发生失控，该试验的结果将无效。安排重新测试以替换不合格批次。实验室需要分析失控的原因。不合格批次不得超过10天一次或20天两次。如果超过，实验室应暂停检测工作，并咨询试剂制造商以确定原因并采取纠正措施。获得了20次重复试验的结果。如果方法比较研究持续20天以上，每批将对每个对照样品进行一次测试，总共将提供20个结果。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准指南。6。6。其他(1)同一项目不同检测方法或仪器的比较，适用范围：一个项目有两种以上方法或两种以上仪器(包括同型号仪器)同时检测，需要进行一致性比较。(注：在定量检测中，不同的报告单位不需要进行比较)。第一次比较选择40 (20)个样本。最好是将阴阳的每一半随机分成8个一组。每天使用两种方法(或两种仪器)并行检测一组样本。所有检测结果汇总为Kappa试验，并对一致性进行评估、新鲜患者血清2例阴性，3例阳性，阳性中含高、中、低值。新旧批次试剂用于检测。低值避免“灰色区域”夹心法：信噪比低值1.2-3竞争法：信噪比低值0.4-0.6判断标准：100%符合率可接受。(2)批号替换的简单比较：(3)性能验证标准操作程序的编制。理想的操作方法：在操作过程中知道影响测定结果的关键环节；具有可操作性的标准操作程序。如何编写标准操作程序？(4)性能验证(定性)、重复性和准确度检测限(定性)批内变异(10%)和批间变异(15-25%)“胡克效应”变异检测能力(如乙型肝炎表面抗原)临床灵敏度和特异性抗干扰能力。嘿。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准指南。2。数据收集检查，每一次实验，都应立即记录所有原始试验数据并进行审查，以便在早期发现分析系统和人为错误的来源。一旦发现某些结果是由可解释的错误引起的，就应该记录下来，这些结果不能用于数据分析。如果无法确定错误的原因，将保留原始结果。对于不一致结果的处理，如果比对方法不是100%准确，则可以使用“金标准”和“参考方法”来检测检测方法和比对方法之间存在差异的样品。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准指南。4。参考血清板、经成熟方法检验或检测的临床样本，或在临床诊断中有意义的样本，对定性方法的评价具有重要价值。阳性样品的浓度各不相同，具有代表性。可占血清平板样品总数的50%。阴性样品可能含有干扰物质。可占血清平板样品总数的50%。CLSIEP 12-A2UserProtocolforevaluationfQualitativeTestPerformance；批准指南。5。5。除操作人员外，操作人员的准备、人员操作和遵守