GB 29686-2013 食品安全国家标准 猪可食性组织中阿维拉霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

G 中华人民共和国 国 家标准 9686 2013 食品安全国家标准 猪可食性组织中阿维拉霉素残留 量的测定液相色谱 in of （电子版本仅供参考，以标准正式出版物为准） 2013布 2014施 中华人民共和国农业部 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 可食性组织中阿维拉霉素残留量的测定 液相色谱 . 1 范围 . 2 规范性引用文件 . 3 原理 . 4 试剂和材料 . 5 仪器和设备 . 6 试料的制备与保存 . 料的制备 . 料的保存 . 7 测定步骤 . 取 . 化 . 准曲线的制备 . 定 . 白试验 . 8 结果计算与表述 . 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 . 敏度 . 确度 . 密度 . 附录 A . 言 本标 准的附录 A 为资料性附录。 本标准系国内首次发布的国家标准。 猪可食性组织中阿维拉霉素残留量的测定 液相色谱 1 范围 本标准规定了猪 可食性 组织中阿维拉霉素残留 量 检测的 制样和 液相色谱 法 。 本标准适用于猪 的 肌肉 、 脂肪 /皮 、 肝脏 和 肾脏中 阿维拉霉素 残留量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其 随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用 这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写规则 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试料中残留的阿维拉霉素， 用 丙酮提取，氢氧化钠溶液水解， 再用 乙酸乙酯提取， 氧化铝 固相萃取柱净化 ，以二氯甲氧苯酸为内标物， 液相色谱 定 ，内标法定量。 4 试剂和材料 以下所用的试剂，除特别注明外均为 分析 纯试剂，水为符合 6682 规定的一级水。 阿维拉霉素 、 阿维拉霉素残留标示物 准品： 含量 98。 内标物： 二氯甲氧苯酸 标准品 ：含量 98。 甲醇 ： 色谱纯 。 正己烷 乙睛 ：色谱纯 。 乙酸乙酯 丙酮 甲酸 氢氧化钠 磷酸 中性氧化铝 固相萃取 柱： 1 000 相当者 。 1 氢氧化钠溶液 ： 取氢氧化钠 4 g，用水溶解 并 稀释至 100 洗脱液 ： 取 甲酸 5 乙腈 溶解并稀释至 100 1 mg/维拉 霉素 和阿维拉霉素残留标示物 准贮备液： 精密称取 阿维拉霉素 和阿维拉霉素残留标示物 0 别于 10 甲醇 溶解并稀释至刻度，配制成浓度为 1 mg/维拉霉素 和阿维拉霉素残留标示物 准贮备液。 2 4 保存 ，有效期 1 个月 。 10 g/维拉霉素 和阿维拉霉素残留标示物 准工作液： 精密量取 1 mg/维拉霉素和阿维拉霉素残留标示物 准贮备液 各 1.0 别于 100 瓶中，用 甲醇 溶解并稀释至刻度，配制成浓度为 10 g/ 阿维拉霉 素和阿维拉霉素残留标示物 准 工作液。 2保存 ，有效期 1 个月。 1 mg/标物 二氯甲氧苯酸 标准贮备液 ： 精密称取 二氯甲氧苯酸 10 10 瓶中， 用 甲醇 溶解并稀释至刻度，配制成浓度为 1 mg/ 二氯甲氧苯酸 标准贮备液。 2 4 保存 ，有效期1 个月 。 2 g/标物 二氯甲氧苯酸 标准工作液： 精密量取 1 mg/氯甲氧苯酸 标准贮备液 200 L，于 100 瓶中，用 甲醇 溶解并稀释至刻度，配制成浓度为 2 g/ 二氯甲氧苯酸 标准 工作液。2保存 ，有效期 1 个月。 5 仪器和设备 效液相色谱 配 大气压化学电离源（ 。 析天平 ： 感量 1 g。 平 ： 感量 g。 冻高速离心机 荡器 涡混合器 质机 吹仪 转蒸发仪 相萃取装置 底烧瓶： 50 心管： 15 50 6 试料的制备与保存 料 的制备 取新鲜或冷冻空白或供试组织， 绞碎， 并使均质。 取 均质后的 供试样品 ，作为 供试 试料 。 取均质 后的 空白样品，作为空白 试料 。 取 均质后的空白样品 ， 添加适宜浓度 的 标准 工作 液 ， 作为空白添加试料。 料 的保存 以下 保存。 7 测定步骤 取 称取 肌肉 或 脂肪 试料 （ 2g 、 肝脏 或 肾脏 试料 （ 1g ， 于 15 心管中，加丙酮 4 旋 5 6 000 r/心 10取 上清 液 ， 于 50 底烧瓶中 。残渣中 加 丙酮 4 复 提取 两次，合并 3 次上清液， 于 60 旋转 蒸发至 干， 用 1 氢氧化钠 溶液 4 解残 余物 ，转 至 50 心管中， 于 70 水浴 2 h，取出，用 85磷酸调 乙酸乙酯 4 混匀，于 6 000 r/心 10 取 上清液 于 另一离心管中， 重复两次，合并 3 次 上清液 ，加 2 g/氯甲氧苯酸内标 0.5 空白 试料 除外 ） ，混匀备用。 化 氧化铝 萃取柱 用乙酸乙酯 10 化 ， 取 备用液 过柱 ， 分别用正己烷 5 酸乙酯 5 甲醇 5 洗， 用 洗脱 液洗脱两次 ，每 次 7收集洗脱液， 于 50 旋转 蒸发至干 ， 用 甲醇 1.0 解 残余物 ， 涡旋 混匀 ， 供 液相色 谱 准曲线的制备 精密量取 10 g/维拉霉素残留标示物 准工作液 适 量 ，用甲醇 稀释， 配 制成浓度为 5、50、 100、 200、 400 和 800 g/L 的 系列 标准 溶 液， 供液相色谱 以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线 。 求回归方程和相关系数。 定 相 色谱条件 色谱柱： 150 .6 径 5 m） ，或相当者； 流动相：甲醇 +水（ 50+50， v/v） ； 流速： 0.6 mL/样量： 10 g/L； 柱温： 40 ； 谱 条件 离子源： 扫描方式：负离子扫描； 检测方式：选择反应监测； 蒸发温度： 400 ； 离子传输管温度： 275 ； 鞘气压力： 25 辅助气压力： 5 选择反应监测的优化参数见表 1。 表 1 阿维拉霉素选择反应监测的优化参数 药物名称 相对保留时间 离子质量数 定性离子及碰撞能量v 定量离子及碰撞能量v 阿维拉霉素残留标示物 49 249189（ 23） 249205（ 16） 249205（ 16） 二氯 甲氧苯酸 19 219159（ 18） 219145（ 15） 219175（ 8） 定法 性测定 通过 试样 色谱图的保留时间与 相应标准品 的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度 标准溶液 各色谱峰的特征离子相对照定性。 试样 与标准 品 保留时间的相对偏差不大于 5； 试样 特征离子的相对丰度 与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 2 的规定，则可判断 试样 中存在相应的被测物 。 表 2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50% 20%至 50% 10%至 20% 10% 允许的相对偏差 20% 25% 30% 50% 将供试试样和标准溶液的定量离子面积之比作单点校正定量。 量测定 取试样溶液和 标准溶液 ，按外标法 ，以峰面积 定量，标准 溶 液及试样 溶 液中的 阿维拉霉素 响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱 阿维拉霉素 标准溶液和 空白 添加 试样溶液 中特征离子质量色谱图 见附录 A。 白试验 除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。 8 结果计算与表述 试料中阿维拉霉素残留标示物（ 残留量（ g/按下式计算 残留量， g/ 浓度， ng/ 色谱峰面积； 色谱峰面积； 液 中內标物的浓度， ng/ ng/ 量， g。 注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留 三 位有效数字。 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 敏度 本方法 在肌肉 和 脂肪 组织 中的 检测限为 10 g/定量限 为 20 g/在肝脏 和 肾脏 组织 中的 检测限为 20 g/定量限为 50 g/ 确度 本方法在 20 600