生化实验考试题

1、生化二理论部分填空1 RNA的提取方法 （苯酚法 ） （ 去污剂法）（ 盐酸胍法）2 二苯胺法测定DNA含量样品中含有少量RNA并不影响测定，但因（蛋白质）（多种糖类及其衍生物）（芳香醛）羟基醛等能与二苯胺反应形成有色化合物，故能干扰DNA定理。简答1.提取DNA/RNA去除杂蛋白的方法有几种 原理是什么？答 1变性剂法：用SDS等去污剂使蛋白质变性，可以直接从生物材料中提取DNA；2苯酚法：用含水的酚溶液沉淀蛋白质和DNA，分层、离心。因蛋白变性，抑制了核酸酶活性，并且操作过程比较缓和，可以得到较好的DNA制品；3氯仿法：用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白，使乳化，离心除蛋白，DNA在上层水相

2、，用乙醇沉淀上层，可将DNA沉淀出来。2.二苯胺法测DNA含量的原理以及乙醛的作用。答DNA分子中的2-脱氧核糖在酸性环境中变成-羟基-酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（max=595nm）。DNA在40 400微克范围内，光吸收值与DNA的浓度成正比。乙醛可增加二苯胺法测定DNA的发色量，又可减少脱氧木糖和阿拉伯糖的干扰，能显著提高测定的灵敏度。3 0.14mol/lNaCl分离DNA和RNA的原理。答 物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在0.14mol/L氯化钠中

3、溶解度最大，利用这一性质可将其分开。生化二操作部分1. 紫外可见分光光度发影响因素（不知道）2. 提取动物DNA的流程（自己看吧）3. DNA/RNA提取及测定时的注意事项提取：在低温下进行操作；减少物理因素对核酸的机械剪切力；防止过酸、过碱引起核酸降解，控制pH值范围（pH值5-9），并要保持一定离子强度；防止核酸的生物降解；生化一理论及操作1. 填空Folin-酚法测定蛋白含量时folin甲试剂是（碱性）反应试剂，（ ）能还原乙试剂中的（磷钼酸）（磷钨酸）还原成（ ）和蛋白质中的（ ）（ ）和folin乙中的（ ）（ ）2凝胶层析利用被分离物质的（分子大小）（形状不同）进行分离。2名词解释

4、1.米氏常数：Km值是酶的特征常数之一，只跟酶的性质有关，而与酶的浓度无关。 2.正交表符号L9(34)每个代表的意义 L: 正交表的代号9：正交表横行数3：字码数（因素的水平数）4：正交表纵列数（最多允许安排因素的个数）3蔗糖酶活力测定原理（ppt79页）蔗糖 蔗糖酶的作用 D-果糖 + D-葡萄糖DNS试剂 + D-葡萄糖 强酸，沸水浴 氨基化合物4.有机分级沉淀向水溶液中加入一定量亲水性的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出的分离纯化方法。3简答1细胞破裂的方法（1）机械（匀浆）法（2）超声波处理法（3）反复冻融法：（4）化学处理法：（5）溶胞作用 (酶溶解法)：（6）自溶法：2. SDS凝胶电泳中过硫酸铵(AP) TEMED（四甲基乙二胺）CL离子 甘氨酸的作用AP 催化剂 引发聚合TEMED 加速剂 促凝作用 加速聚丙烯酰胺凝聚CL 甘氨酸 浓缩效应 （明天给你看）3.双倒数法求VM、KM时用的米氏方程是什么？怎样求VM KM ？曲线特点是什么？ 1 Km 1 1 = + V Vmax S Vmax斜率是KM Y轴截距倒数是VM特点自己看吧4离子交换层析的原理步骤原理：以离子交换剂为固定相，以特定的离子溶液为